壳聚糖固定化风味蛋白酶的制备及其酶学特性

研究了球形交联壳聚糖固定化风味蛋白酶的制备工艺及其酶学特性.以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂,采用共价交联法制备固定化风味蛋白酶的较适条件为ω(壳聚糖)=2.5％、ω(NaOH) =3％、ω(戊二醛)=0.5％,交联时间6h,载体中∞(酶)=40 mg/g,于35℃、pH值5.5条件下固定化反应10h.固定化后,风味蛋白酶较适反应温度从50℃提高至70℃,较适pH值从7.0提高至8.0,且可在更宽温度与pH值范围内保持较高的酶活力.固定化风味蛋白酶具有良好的储存稳定性和操作稳定性,可反复多次使用,适宜于在工业生产中推广应用.     

组织蛋白酶B研究进展

组织蛋白酶B(cathepsinB:EC3.4.22.1)是溶酶体内半胱氨酸内切蛋白水解酶,其作用非常广泛,参与机体多种生理、病理过程.尤为重要的是,它能促进肿瘤细胞浸润转移,因此成为目前诊断、治疗恶性肿瘤的研究热点.综述了组织蛋白酶B的生物学特性、基因与蛋白结构特点、表达调控机制,以及应用方面的研究.     

组织蛋白酶L抑制剂抗骨质疏松作用的研究进展

组织蛋白酶L的小分子抑制剂能有效地抑制骨吸收,抗骨质疏松作用明显。这些小分子抑制剂主要包括肽基环氧化物、肽基重氮甲烷、肽醛和肽基卤甲烷,此外肽腈、肽基迈克尔受体等的研究近年来也得到人们的关注。     

玉米半胱氨酸蛋白酶的原核表达及酶学性质表征

以玉米基因组DNA为模板扩增获得玉米半胱氨酸蛋白酶基因(zmCP1),先将其克隆至pET-28a(+)原核表达载体中,再转化至大肠杆菌BL21(DE3)中.对重组酶进行诱导表达后经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹(Western blotting)鉴定,经Ni柱纯化后其质量分数大于95%.利用二肽荧光底物(R-AMC)和四肽荧光底物(LAFR-AMC)进行酶反应动力学实验,证明该酶对小底物R-AMC具有更好的亲和力和催化活性.重组酶的酶学性质研究表明,该酶最适温度为55℃,最适pH值为6.0,在90℃下的半衰期为39.82min.     

组织蛋白酶B在棉铃虫个体发育过程中的表达及活性研究

运用原位水解电泳、免疫印迹和免疫组织化学等方法系统研究了组织蛋白酶B（HCB）在棉铃虫个体发育过程中的表达及活性变化规律．研究显示,HCB的表达和活性随着胚胎发育的进行逐渐下降;整个幼虫阶段都没有HCB的表达和活性;整个蛹和成虫阶段虽然都有HCB的表达,但HCB的活性只能在发育晚期的蛹和成虫组织中检测到．这些现象表明,HCB的表达和活化属于翻译后控制,同时与棉铃虫的个体发育和组织分化有着密切的关系、     

产蛋白酶和淀粉酶菌株的筛选及其发酵产酶特性研究

利用酪蛋白固体平板分离培养基、淀粉平板分离固体培养基初筛,液体发酵产酶培养基摇瓶复筛相结合,从实验室保藏的真菌茵株中筛选出一株产蛋白酶的真茵菌株和一株产淀粉酶的真茵茵株,对其固态发酵特性进行了研究．结果表明：蛋白酶产酶高峰为24h,酶活力达到3760tJ／g;淀粉酶产酶高峰为32h,酶活力达到0．405u／g．     

氯原酸对弹性蛋白酶抑制作用的研究

用琼脂扩散法研究了氯原酸对弹性蛋白酶的影响，表明氯原酸具有抑制弹性蛋白酶的作用，随着浓度的提高，抑制作用增大。荧光光谱表明：氯原酸对弹性蛋白酶的荧光淬灭为静态淬灭，其结合常数为５．２１×１０４     

抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定

分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB／c小鼠，选择血清抗体滴度高的免疫小鼠，取其脾细胞和Sp2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合．经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞，共获得分泌抗组织蛋白酶B的单克隆抗体杂交瘤细胞3株，分别命名为9D5，100E2和100H6．以ELISA法和Western blotting法对3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了特异性鉴定，其中9D5和100E2能够同时识别两种不同来源的组织蛋白酶B，而100H6只能识别基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B．     

大肠杆菌L—谷氨酸脱羧酶酶促特性的研究

本文主要研究大肠杆菌505L-谷氨酸脱羧酶脱羧作用的最适浓度、pH、温度、耐热性、底物浓度以及它对天冬氨酸等十二种氨基酸是否具有脱羧性能,从而发现目前L-谷氨酸发酵生产中测定存在的问题。     

地热田碱性蛋白酶菌株的选育与酶性质的研究

从温泉附近土样中成功分离到一株高温碱性蛋白酶产生菌株H-1,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus).菌株H-1最佳产酶的发酵时间为67.5h,该酶在30～70℃酶活性随温度升高而增强,70℃酶活性达到最高,在pH7.0～11.0范围内较稳定,从菌株H-1液体发酵液中提取粗酶液,经CMC-I阳离子交换层析和SepHadex G-75凝胶层析,得到单一组分;通过Native-PAGE、SDS-PAGE电泳鉴定,粗酶至少含有3种碱性蛋白酶同工酶;单组分碱性蛋白酶的比活力为3875U,相对分子量约为31KDa.     

鱼类溶菌酶和组织蛋白酶研究进展

溶菌酶和组织蛋白酶在鱼类先天性免疫系统中发挥重要作用。溶菌酶是一种具有生物活性的、能水解粘多糖的无毒、无公害小分子碱性酶,参与机体多种免疫反应,在抵抗外来病原细菌、真菌、病毒或肿瘤入侵中起重要作用。组织蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,参与机体的多种生理和病理活动,目前在细胞凋亡中的作用日益受到重视。本综述主要介绍近年来鱼类溶菌酶和组织蛋白酶在生物学功能、基因克隆、组织分布及重组蛋白功能活性的新研究进展。     

半胱氨酸蛋白酶基因RNA干扰表达载体的构建及油菜的遗传转化

将半胱氨酸蛋白酶基因(Bncp5)cDNA序列片段正反向插入表达载体pFGC5941中,构建了RNA干扰表达载体pFGC-Bncp5-RNAi.采用根癌农杆菌介导法,转化甘蓝型油菜下胚轴.在5mg/L BastaMS培养基中筛选,PCR鉴定结果显示,获得Bncp5转基因植株28株.半定量PCR分析结果显示,半胱氨酸蛋白酶基因在转基因油菜中表达受到一定程度的抑制,表明Bncp5的干扰载体在油菜中得到表达.     

水稻OsNAP基因的功能分析及其在育种价值方面的研究

NAC转录因子是植物特异的转录因子.本研究通过从水稻日本晴(Oryza sativa L.)的基因组中克隆到一个与拟南芥衰老相关的基因AtNAP(Atlg69490)的同源基因OsNAP.OsNAP的ORF为1 179bp,推测其编码蛋白含有392个氨基酸,等电点为8.55,分子质量为42.195ku.为进一步研究OsNAP的功能,利用显性抑制元件SRDX构建其pCAMBIA1304-35S:OsNAP-SRDX表达载体,通过农杆菌浸染方法将其转化水稻中花11品种.T1代转基因植株通过潮霉素、RealtimePCR、和Western blot鉴定,筛选出4个OsNAP高表达的阳性植株.在种子成熟期,观察到T1代转基因4号植株较野生型相比有明显的延缓衰老的表型,其他农艺性状如单株分蘖数、单株总粒数、单穗饱和穗粒数、千粒重、结实率等都优于野生型.实验证明抑制OsNAP基因的表达能够延缓水稻叶片衰老并可以提高产量,具有潜在的育种价值.     

2，3，6-三羟基萘茜及其衍生物电子光谱的含时密度泛函理论研究

用密度泛函理论B3LYP方法，在极化基组6-31G^＊水平上，研究了2，3，6-三羟基萘茜及其3个衍生物的分子结构、前线轨道成份及其取代基对母体的影响．运用含时密度泛函理论方法计算了2，3，6-三羟基萘茜及其3个衍生物的电子光谱并与文献报道的实验值进行比较．结果表明，该理论方法能较好地再现实验结果．     

红景天属植物的研究及应用

红景天是一种珍稀药用植物，也是一种委有发展前途的环境适应性药物。目前其天然资源日趋枯竭。此文概述了其化学成分、药理作用、资源应用开发的研究进展，分析了红景天资源短缺问题和解决途径，并对红景天的进一步研究进行了展望。     

刺槐属植物花粉亚显微形态的研究

利用扫描电子显微镜对刺槐属(Robinia L.)2种植物的花粉形态进行了观察和研究。结果显示该属花粉为长球形,具3孔沟,外壁具点状坑雕纹和脑纹状雕纹。这些特征种间差异明显,可以作为种间分类的依据。     

毛蓼挥发油主要化学成分的研究

采用GC－MS－COMP联用方法，对毛蓼（Polygonum barbatumL.）全草通过超临界二氧化碳萃取（SFE－CO2）并加CHCl3作改性剂的挥发油成分进行发分离和鉴定。从中分出36个色谱峰，鉴定了33个化合物，其中，β－谷甾醇15．747％，桉叶油醇3．703％，维生素E类物质占3．603％。     

蝎子七化学成分的研究

从甘肃天祝县的蝎子七全草中分离鉴定出了15个化合物，其中2个为新化合物，报道9个已知化合物：阿魏酸、4-豆甾烯-3-酮、紫丁香甙、5，8，2′-三羟基-5′—甲氧基双氢黄酮、异鼠李素、槲皮素-3-O-鼠李素、山奈素-3-O-β-D-葡萄糖甙、洋芥素-7-O-β-D-葡萄糖甙、5-羟基-4-甲氧基黄酮-7-O-β-芸香甙。上述成分均首次从该植物中分离。