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将克隆入pGEM7zf(+)的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)新疆分离物外壳蛋白(CP)基因的cDNA的pGEB3,用XbaI切下,Klenow补平,再用BamHI切下cDNA片段。用NdeI切开原核表达载体pJW2,用Klenow补平,再用BamHI切去小片段。将该cDNA与pJW2大片段用T4连接酶连接,构建了BNYVVCP基因的表达载体pJWB4,转化到大肠杆菌DH5α。经培养和高温诱导,pJWB4成功地表达出了BNYVV的外壳蛋白。将pGEB3和pBI121用Xbal和BamHI酶切T4连接酶连接,构建了BYVVCP基因的植物表达载体,转化到DH5α,筛选出正向连结的阳性克隆pBIB3,转化入农杆菌LBA4404(pAL4404),经用PCR扩增和γ32P标记的探针杂交约证实为阳性克隆。往甜菜植株中转化工作正在进行中。 相似文献
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黄长晖 《复旦学报(自然科学版)》1998,37(4):387-394
应用PCR技术,对P16抑癌基因进行体外定突变。在P16cDNA中引入第48位密码子CCG(Pro)→CTG(Leu)和第74位密码子GAC(Asp)→AAC(Asn)突变,构建了p16-P48L和p16-D74N突变体,并把它们导入纯合缺失P16基因的人肺癌细胞株H460。 相似文献
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对P53阳性的8例肝细胞性肝癌(HCC)广西科学,1995,2(1):55~57)中的7例的P53基因进行DNA单键构象多态性分析(SSCP)和PCR扩增物直接测序。结果,7例均在P53第7外显子第249编码区的3号位发现异常。1例在249编码区的第3碱基微小丧失引起乱码突变;另6例在此位点同时出现突变的T和C带,成为的多态性突变形式。外显子5、6、8和9没有异常。估计除黄曲霉毒素B1外可能有别的致癌因素协同作用造成此种多态性。认为南宁地区是继中国江苏启东和莫桑比克后的第3个HCCP53基因249编码区有集中突变热点的地区。 相似文献
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构建重组腺病毒载体AdCMVp53,将wtp53分别导入PG(人肺巨细胞瘤细胞)、CAE(人结肠癌细胞)、HCT(人结肠癌细胞)、HeLa9人宫颈癌细胞)及BEL7402(人肝癌细胞)五种癌细胞中,测定AdCMVp53对癌细胞的半抑制浓度(IC50)和细胞生长曲线,分别不同组织癌组织对AdCMVp53的敏感程度。结果表明,AdCMVp53对癌细胞具有与病毒剂量相关的明显致死作用,但不同细胞对腺病毒 相似文献
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慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞染色体遭受病毒损害的见证 总被引:1,自引:0,他引:1
用Southem blot分子杂交技术,检测99例HBVM阳性的慢性HBV感染者外周血单个核细胞(PBMCs)内HBVDNA的存在状态,其中71例同时用BrdU标记法检测细胞中姊妹染色体交换(SCE)率,观察HBV对宿主单个核细胞染色体的损害情况。结果发现42例被检者(42.42%)的PBMCs中存在HBVDNA(游离型或整合型,有的还见到游离的复制中间体),正常对照组则无1例检出HBVDNA。被检者PBMCs的平均SCE率明显高于对照组,其中HBVDNA(+)组又显著高于HBVDNA(-)组。证明HBV的入侵与SCE率升高之间有密切关系,提示HBV对单个核细胞染色体形成了损害。这一现象可能是慢性乙肝病毒感染者免疫功能紊乱和HBV长期不能清除等系列表现的原因之一。 相似文献
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应用PCRSSCP技术及DNA 测序技术对37 例原发性脑肿瘤及相应外周血淋巴细胞中p53 基因5 ~8 外显子的突变情况进行了检测,结果表明,p53 基因在原发性脑肿瘤中的突变频率为19 % (7/37) .并且突变频率在不同病理类别脑肿瘤中的分布是非随机的,其中星形细胞肿瘤中的突变频率最高,为36 % (5/14) .所有突变均为错义点突变,57 % (4/7) 的突变位于CpG位点.突变仅发现于脑组织中,外周血淋巴细胞中未检出突变,这些结果提示,p53 基因突变在脑肿瘤的发生发展过程中起一定的作用,p53 基因在散发性脑肿瘤中的突变为体细胞型的突变 相似文献
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丙型肝炎病毒核酸疫苗的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
从丙型肝炎病人的阳性血清中提取出丙型肝炎病毒RNA,通过RT-PCR的方法获得丙型肝炎病毒C区基因片段。并将此片段克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1(+),得到重组质粒pcDNA-HCV/C,再将其通过肌肉注射免疫BALB/小鼠后,小鼠产生了抗HCV/C区抗体。 相似文献
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乙型肝炎病毒(HBV)DNA免疫的初步研究 总被引:1,自引:1,他引:0
用聚合酶链反应(PCR)扩增了编码HBVsAg的基因序列,将其插入到pcDNA3载体中,位于人巨细胞病毒(CMV)早期启动子下游.重组质粒pcDNA3-sAg转染细胞后检测到HBsAg表达.用纯化后的重组质粒直接注射到BALB/C小鼠骨骼肌内,诱发实验小鼠产生了抗HBsAg特异性抗体.PCR扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源HBVDNA整合 相似文献
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用聚合酶链反应(PCR)扩增了编码HBVsAg的基因序列,将其插入到pcDNA3载体中,位于人巨细胞病毒(CMV)早期启动子下游,重组质粒pcDNA3-sAg转染细胞后检测到HBsAg表达,用纯化后的重组质粒直接注射用BALB/C小鼠骨骼细内,诱发实验小鼠产生了抗HBsAg特异性抗体,PCR扩增未检测到注射部位及肝脏细胞染色体中有外源HBVDNA整合。 相似文献
12.
用PCR方法,从人脑cDNA库中克隆FHIT基因,扩增得到553bp片段克隆于pGEM-T载体,测定了其DNA序列。该序列包括FHIT cDNA编码区全部444bp,以及5‘端52bp和3’端57bp非编码区序列。编程区有二处位点发生突变,第92位密码子中的C突变成G,是同义突变,不导致氨基酸改变; 相似文献
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本文合成了八种新的茂基钕邻取代苯甲酸衍生物:Cp_(3-n)Nd[O_2CC_6H_4(0-Z)]_n(n=1,2;Z=OMe,Cl,Br,I;Cp=C_5H_5)。由于邻位取代基中配位原子X(O,Cl,Br,I)与中心Nd ̄(3+)之间具有配位作用,增加了铁的配位数及空间饱和性,提高了这类化合物的稳定性。这些化合物均经过元素分析,红外光谱,质谱及光电子能谱鉴定。 相似文献
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AcNPV增强子hr5增强HBsAg基因表达的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用形成包涵体(OOC+)并能利用人工合成启动序列和多角体XIV启动子表达外源基因的转移载体质粒pSXIVVI+X3将多角体基因、乙型肝炎病毒表面抗原(HBSAg)基因和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的增强子hr5部分序列同时插入无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒TnNPV-SVI-G基因组中,得到两株高效表达HBsAg基因又形成包涵体的重组病毒TnNPV-shr35-OCC+和TnNPV-shr26-OCC+.对重组病毒的酶切鉴定、DNA斑点杂交和Southernblot分析证实,外源基因及其相应的启动子和增强子序列已正确插入病毒基因组中.插入顺序中,hr5增强子是插入HBsAg基因下游,多角体基因与HBsAg基因方向相反.125Ⅰ-固相放射免疫检测和Westernblot结果表明,HBsAg基因在昆虫离体细胞中得到高效表达并保留了抗原活性.TnNPV-shr26-OCC+和TnNPV-shr35-OCC+表达的HBsA吕蛋白与没有插入增强子序列的重组病毒TnNPV—HBs85-OCC+的比较,分别提高了40%和46%. 相似文献
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gsp癌基因在国人肢端肥大症患者中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
gsp癌基因是肢端肥大症患者发生垂体肿瘤的重要原因,这是由于编码刺激性G蛋白α亚基(Gsα)的基因存在突变,导致细胞内cAMP水平持速升高所致。令人惊讶的是,来自日本的报导gsp癌基因的发病率(4~9%)明显低于西方(40%),推测为种族差异所至。为了进一步观察,我们检测了gsp癌基因在我国肢端肥大患者中的表达率。材料与方法:检测了10例国人肢端肥大患者(男6例,女4例,年龄23~54岁,其中3例表现有巨人症,肿瘤直径为11~40mm,6例肿瘤有侵袭性)。从肿瘤组织中提取DNA,经PCR扩增Gsα基因,PCR-DNA直接进行序列分析来检测gsp癌基因突变位点。结果:4例(40%)肿瘤gas癌基因为阳性,3例突变位点位于编码Gsα基因的201号密码子上,精氨酸被替换为半胱氨酸(CGT→TGT),1例位于227号密码子,甘氨酸被替换为亮氨酸(CAG→CTG)。讨论:结果显示,gsp癌基因在中国肢端肥大症患者中的发病率与西方一致,其与日本研究结果的差异似乎不是种族不同所致 相似文献
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应用PCR-SSCP和免疫组化法检测29例广西南部肝癌组织中的N-ras基因突变和HBV感染状况,结果,肝癌中N-ras基因在第2 ̄37密码子之间的突变率为79.3%,其中22例有2 ̄5个突变位点,该基因突变也见于癌旁组织,肝组织中HBsAg和HBsAg和HBxAg检出率分别为86.2%和79.3%,两者具有相关性,并与N-ras基因突变率呈相平行的趋势。因广西南部的肝癌与AFB1污染有关,本研究 相似文献
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用套式聚合酶链式反应—单链构象多态分析法对30例结肠癌的p53基因突变进行了观察,检测了第5~8四个外显子,发现21例有p53基因突变(70%)。30例肠癌按临床Dukes分期:A期2例皆有突变,B期11例有突变者6例(55%),C期8例有突变者5例(63%),D期9例有突变者8例(89%),按病理分型则13例有11例突变(85%),管状腺癌6例有p53基因突变4例(67%),低分化腺癌5例中检出3例有突变(60%),在6例粘液腺癌中测出3例有突变(50%)。从临床分期看愈晚突变率愈高。而病理分型恶性程度高者突变率反低,这是因为缺失率未计数之故。最后讨论了突变率与预后的关系 相似文献
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将乙肝病毒(HBV)ayw株完整的X基因正向重组到原核表达质粒pBV-221的PL启动子下游,得到能表达X蛋白的重组质粒pBV-HBV(+);同时将X基因反向重组到原核表达质粒pBV-220的PL启动子下游,得到能转录X基因反义RNA的重组质粒pBV-HBX(-)。利用这两个质粒,构建出能同时转录X基因mRNA和反义RNA的重组质粒pEX。AN-HBX,并在原核水平上,证实了反义RNA对X基因的表 相似文献