免疫胶体金技术在畜禽疫病检测中的应用和研究进展

免疫胶体金技术是近些年来发展起来的一项新型免疫标记技术,在生物医学中已有广泛的应用.以这种技术为基础开发的检测试剂盒有快捷、准确、特异性强、敏感性高的特点.适用于基层兽医站、养殖场等使用,在今后必定会有更广泛的应用前景.综述了该技术的原理、特点、应用及发展前景.     

鸡新城疫免疫胶体金诊断技术

鸡新城疫是鸡的一种高度感染和致死性疾病,是由一种侵害呼吸道、胃肠道以及中枢神经系统的新城疫病毒（NDV）所引起的。病毒存在于病鸡的血液、脑、内脏、粪便和口鼻中,国内外对本病的控制仍没有完全解决鸡新城疫对养鸡业有着巨大的威胁。所以有必要建立一种快速、简便、准确的检测方法用于鸡新城疫的诊断。胶体金技术最早是Faulk等于1971年报道的应用于电镜检查技术的一种示踪技术。与传统方法比较,由于胶体金具有肉眼可观察的红色,所以以这种技术为基础开发的检测试剂盒有快捷、准确、高特异性、高敏感性的特点,灵敏度可达0．5-1ng。适用于各级医院、卫生所、家庭个人诊断、保健、体检。目前以此方法为基础发展起来的检测试剂盒涉及范围相当广泛．包括HcG等激素、肿瘤标志物、心血管标志物、传染病的抗原与抗体的检测等。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金颗粒．标记纯化的鸡新城疫抗体．并包被在玻璃纤维素膜上,另外将纯化的鸡新城疫抗体和纯化的兔抗鸡抗体包被在硝酸纤维素膜上,组装成鸡新城疫快速诊断试纸条。当检样中含有鸡新城瘦病毒抗原时,试纸条上出现两条红线,为阳性;当检样中不合有鸡新城疫病毒抗原时,试纸条出现一条红线．为阴性。本试验建立的胶体金免疫层析法（GICA）是一种快速、灵敏、特异的抗原检测方法,可用于鸡新城疫诊断,也可用于鸡新城疫的流行病学调查．具有推广价值。     

胶体金免疫试纸法快速测定雌三醇

雌三醇(E3)在临床诊断、日用化工和畜牧业等领域具有广泛应用,同时它也是一种环境污染物,对E3的检测具有科学和应用意义.本研究采用竞争性免疫层析技术,以E3单克隆抗体-纳米胶体金复合物作为金标抗体,以E3偶联抗原为检测线(T线)、以羊抗鼠抗抗体为控制线(C线),通过条件的优化,制备出检测E3的胶体金试纸条.当试纸条C线和T线同时显色时,结果为阴性;当试纸条仅C线显色时,结果为阳性.所得检测试纸条测加标水样的最低检测限为100μg/L,测加标奶样的最低检测限为100μg/L,反应时间为10min,与雌酮、雌二醇、己烷雌酚等环境雌激素无交叉反应,具有良好的选择性.     

胶体金标记免疫凝集光度法检测癌胚抗原

利用胶体金特殊的光学性能,结合抗原抗体相互反应的免疫分析技术,建立一种基于胶体金标记技术的免疫凝集方法分析检测癌胚抗原.采用胶体金纳米粒子分别标记癌胚抗原的两种抗体,通过免疫夹心反应,使胶体金粒子之间凝集形成网络结构,从而引起反应体系光学性质的改变.随着癌胚抗原量的增加,抗原与胶体金粒子标记抗体的反应量不断增加,网络结构也越来越大,使得胶体金粒子在646 nm处的吸收值不断增加.根据胶体金吸光值的变化,检测溶液中癌胚抗原的浓度,最低检测极限为15μg/L.该方法只需要测量胶体金光吸收值的变化,就可以检测癌胚抗原在溶液中的浓度,快速、简便,不需要昂贵的仪器设备,易于推广使用.     

唾液中HIV抗体快速检测诊断胶体金免疫层析试纸条的研制

制备一种适于早期HIV的大范围筛查使用的检测人唾液中抗HIV-1抗体的胶体金免疫层析试纸条.采用柠檬酸三钠还原法制备直径为19nm的胶体金颗粒,标记HIV-1gp41抗原,制备胶体金免疫复合物,按常规组装成免疫层析检测试纸条.结果表明:阳性HIV患者唾液中的抗HIV抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色圆点.胶体金颗粒粒径均一,胶体金免疫复合物性能稳定,特异性强,试纸条检测时间只需10～20min.制备的胶体金免疫层析试纸条检测唾液中HIV抗体,使用安全,简便快速,结果准确,适用于基层医疗单位使用和对大量人群的规模筛查等.     

免疫胶体金技术及其应用

免疫胶体金技术近年来发展迅速,应用范围极广。本文综述了免疫胶体金技术原理、制备方法及其广泛应用,分析了存在的问题,并针对其存在问题提出展望。     

牛奶中三聚氰胺残留胶体金免疫层析快速检测方法研究

为建立牛奶中三聚氰胺免疫层析快速检测方法,采用胶体金偶联特异性三聚氰胺抗体,优化试纸条T线抗原包被量、金标抗体用量、二抗稀释倍数等条件,构建三聚氰胺免疫层析试纸条.结果表明,T线抗原包被量为0. 25μg/mL,金标抗体用量为9. 0μL/条,二抗稀释倍数为1:100时效果最佳;最优条件下该试纸条的最低检出限为0. 25μg/mL,结果可在5 min内进行判读,且牛奶样品不需任何处理可直接进行测定.本研究建立的免疫检测方法适用于牛奶中三聚氰胺的检测.     

胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析方法,建立对人绒毛膜促性腺激素的快速定量检测方法．该检测方法可以在15min内完成对HCG的定量检测,灵敏度可达25mIU／mL,线性范围25～10000mIU／mL．与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激素（hTSH）、人卵泡刺激素均无交叉反应,所建立的检测人绒毛膜促性腺激素的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的人绒毛膜促性腺激素,在异位妊娠的早期诊断及过程监控中具有较为广阔的应用前景．     

沙田柚自交花柱S1-RNase的免疫胶体金定位

采用免疫胶体金标记抗体技术成功地检测了沙田抽自交花柱中存在的Ｓ１－ＲＮａｓｅ结果表明：沙田柚自花授粉后１,２,３ｄ１／２处花柱段的Ｓ１－ＲＮａｓｅ分别定位于内质网、高尔基区、纤维内壁和纤维外壁;同时分析了自花授粉后１－３ｄ的Ｓ１－ＮＲａｓｅ的动态变化,及其参与沙田柚自交不亲和返应的可能机理,为高等植物自交不亲和机理的解释丰富实验证据。     

基于胶体金标记银增强的日本血吸虫免疫传感器

 提出一种高灵敏的、基于银增强放大和免疫胶体金技术压电石英晶体免疫传感器。采用夹心法模式,在电极表面固定日本血吸虫抗原,用以捕获血清中的日本血吸虫兔抗血吸虫抗体,再与胶体金标记的羊抗兔IgG二抗形成免疫复合物,加入银增强溶液,通过胶体金催化银离子还原,使大量银沉积在纳米金周围,提高压电石英晶体免疫传感器的灵敏度。结果表明,基于胶体金标记银增强的日本血吸虫压电石英晶体免疫传感器,对兔抗血吸虫抗体具有较高的识别能力,其操作简单、灵敏度高、线性范围宽、检测下限低。将该方法应用于兔血清中日本血吸虫抗体的测定,取得了满意结果。     

抗P30胶体金免疫试纸条灵敏度和特异性探讨

目的探讨抗F30胶体金免疫试纸条的灵敏度和特异性以及假阳性问题。方法按试纸条说明书的方法，对14份阴道分泌液、9份尿液、5份唾液、5份汗液、5份未经治疗的多囊卵巢综合征阴道分泌液，人、鸡和猪精液进行检测。结果5分钟时观察除人精液外，其余收集样品均为阴性，10分钟时观察除4份阴道分泌液、1份多囊卵巢综合征阴道分泌液呈阳性外，其余样本结果仍为阴性。试纸条的灵敏度达到10000—100000倍。结论试纸条的灵敏度、特异性较高，具有一定的种属特异性。但为了避免假阳性的出现，建议将样品稀释10倍，5分钟之内观察结果。     

氯霉素残留胶体金免疫层析快速检测法的研制

建立一种快速、简易的检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析法.将抗氯霉素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸-醋酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的结果.用GICA与ELISA试剂盒对比检测了...     

胶体金探针的制备

研究了直径１５ｎｍ胶体金的制备方法，制得金标记ＳＰＡ，并对其活性进行了研究，所制得的胶体金探针稳定，可靠，有较好的生物活性。     

鱼类致病性迟钝爱德华氏菌胶体金快速检测试纸的研制

制备迟钝爱德华氏菌胶体金快速检测试纸并对其性能进行检测.以柠檬酸三钠作为还原剂制备胶体金颗粒,标记迟钝爱德华氏菌多克隆抗体,将羊抗兔IgG和纯化后的迟钝爱德华氏菌多克隆抗体包被于NC膜上作为质控线和检测线,以检测样品中的迟钝爱德华氏菌(E.tarda).结果表明:所研制的试纸特异性良好,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鳗弧...     

心肌肌钙蛋白I胶体金免疫层析快速检测法的建立

为建立一种快速、简单实用的检测心肌肌钙蛋白I的胶体金免疫层析法(GICA),用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,采用胶体金免疫层析技术及双抗体夹心法原理检测心肌肌钙蛋白I,并对该方法进行敏感性、特异性和稳定性分析.结果:该方法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与心肌肌钙蛋白I阳性样品发生特异性反应;检测心肌肌钙蛋白I的最低检出质量浓度为1.0 ng/mL;与化学发光免疫分析法(CLIA)对比检测63份临床标本,阳性符合率97.0%,阴性符合率100%,总符合率98%,试纸条性能稳定.     

胶体金免疫层析法在结核病快速诊断中的应用

目的:探讨用胶体金免疫层析法检测血清及胸水中结核抗体,评估其在结核病快速诊断试验的相关指标。方法:应用免疫层析技术来检测血清及胸水中的结核抗体。检测临床诊断肺结核患者112例(其中分菌阳组、菌阴组)和96例无结核病史的健康体检者的血清结核抗体水平;52例结核性胸膜患者胸水中的结核抗体水平,同时对胸水进行抗酸染色镜检。计算诊断试验的相关指标。结果:该检测方法临床诊断肺结核的敏感性为60.7%,特异性为95.83%,准确性为79.2%,诊断指数为156.53%,阳性预期值为94.44%,阴性预期值为67.6%;胸水中结核抗体阳性22例,敏感性为42%,胸水结核抗体阳性率和胸水抗酸染色阳性率结果有显著性差异p(0.05。结论:血清结核抗体检测具有较高的敏感性和特异性,可用于临床肺结核的辅助诊断,对评价肺结核的疗效有较高的实用价值。胸水中结核抗体检测对结核性胸膜炎的诊断也具有重要的临床参考价值。     

脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体胶体金检测试纸条的研制

目的:为研制快速检测脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗体的胶体金试纸条.方法:以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化脊髓灰质炎病毒Ⅰ型单克隆抗体,用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液,胶体金标记单抗,再结合脊灰病毒抗原形成复合物,固定于金标垫上,将鼠抗人IgG和羊抗鼠IgG分别包被于试纸条的T (检测线)处和C (质控线)处,应用该试纸条进行性能检测.结果:以已知的脊灰病毒Ⅰ型阳性血清作为检测样品,试纸条检测的灵敏度为1:80;特异性试验证明该试纸条与甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒抗体阳性血清没有交叉反应;检测结果与脊灰病毒Ⅰ型疫苗抗体检测试剂盒(ELISA)试验的符合率为86.7%.结论:该试纸条检测脊灰病毒Ⅰ型的抗体水平具有较好的特异性与灵敏性,适用于大规模临床血清抗体水平检测,具有良好的应用前景.     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒lgM抗体的研究

目的建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgM抗体的方法.方法采用胶体金标记鼠抗人IgM单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAag,HEAg)、抗体(羊抗鼠IgM)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA测试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAVIgM,抗-HEVIgM两法总符合率依次为97.9%,98.4%,检测灵敏度可达2μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性抗体的GICA测试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备.     

胶体金免疫层析技术同步检测甲、戊型肝炎病毒IgG抗体的研究

目的探索并建立胶体金免疫层析(GICA)同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒的IgG抗体的方法.方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记鼠抗人IgG单克隆抗体,制成免疫层析测试条.血清中甲、戊型肝炎的特异性IgG抗体与测试条上金标抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动与膜上固相包被的抗原(HAAg,HEAg)、抗体(羊抗鼠lgG)结合形成肉眼可见的红色线条.结果自制的GICA试条与EIA对比检测血清标本188份,各单项指标抗-HAV IgG,抗-HEV IgG两法总符合率分别为98.9%,98.9%,检测灵敏度可达1μg/L.结论用于同步检测血清中的甲、戊型肝炎病毒特异性IgG抗体的GICA试条的制备条件已基本建立,其检测结果特异性强、灵敏度高、操作方法简便快捷且无需特殊仪器设备,有广泛的应用价值.     

大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析快速检测法的建立

建立一种大肠杆菌O157∶H7的胶体金免疫层析快速筛查方法.利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157∶H7,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析.该法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与O157∶H7阳性样品发生特异性反应;大肠杆菌O157∶H7的最低检出浓度为1×105 cfu/mL.新建立的大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查.