悬浮培养型BHK-21细胞生长特性及成瘤性研究

目的:了解低血清驯化的悬浮培养型BHK-21细胞的生长特性及致裸鼠成瘤能力.方法:比较研究悬浮型和贴壁型BHK-21细胞的细胞形态、生长动力学和成瘤性.结果:驯化的悬浮培养型和贴壁培养型BHK-21细胞生长状态均良好,最大增殖浓度分别为517×104/mL和39.67×104/mL,群体倍增时间分别为23.03h和21.36h,能显著提高细胞培养密度(P0.05).背部皮下接种致裸鼠成瘤性实验表明,驯化的悬浮培养型组裸鼠的体重增长率均低于贴壁培养型BHK-21细胞、阳性细胞组(Hela)和阴性细胞组(KMB17)(P0.05),裸鼠成瘤体积增长率均高于其他三组(P0.05).结论:驯化的悬浮培养型BHK-21细胞能显著提高细胞密度,其成瘤性方面还需进一步改善.     

悬浮培养型 BHK -21 细胞的生长规律和不同接种密度培养效果的研究

为探索悬浮培养型BHK-21细胞的生长规律和最佳接种密度,以3．0×10^5个／mL、4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个/mL和7．0×10^5个／mL等5个接种密度培养了悬浮培养型BHK-21细胞,绘制了细胞生长曲线和活力变化曲线．结果显示,悬浮培养型BHK-21细胞生长曲线呈“S”型,接种培养前24h细胞处于适应期,生长曲线上密度增长不大,期后细胞进入对数增长期,生长密度呈指数增长．以3．0×10^5个／mL和4．0×10^5个／mL接种培养的在120h达到最大增殖密度,分别为4．65×100个／mL和5．59×10^6个／mL,倍增时间分别为26．9h和26．7h;以5．0×10^6个／mL、6．0×10^6个/mL和7．0×10^6个／mL接种培养的在96h就达到最大增殖密度,分别为5．14×10^6个／mL、5．36×10^6个／mL和5．1×10^6个／mL,倍增时间分别为22．4h、24．1h和25．2h．各组在培养的96h以前细胞活力均在90％以上且变化较小,120h和144h时细胞活力开始下降,且接种密度越高活力下降越快．该细胞以4．0×10^5个／mL、5．0×10^5个／mL、6．0×10^5个／mL接种培养能达到较高培养密度,细胞生长快,且细胞峰值持续时间长．     

BHK21细胞悬浮培养的驯化和质量评价

目的:将贴壁培养型BHK21细胞驯化成适合口蹄疫疫苗生产的无血清全悬浮培养型细胞.方法:引进贴壁培养型BHK21细胞,通过改变培养液和降低血清的方法进行悬浮培养的驯化,对驯化得到的悬浮培养型细胞进行生物学检定.结果:引进的BHK21细胞低血清驯化培养22代可悬浮生长,用无血清培养基培养10代后形态趋于稳定生长变快.贴壁和悬浮细胞均有致瘤性,对口蹄疫病毒敏感,适应生物反应器高密度培养,且没有外源物污染.结论:驯化的BHK21细胞可用于口蹄疫疫苗的研究和生产.     

猪α干扰素在BHK-21细胞中的表达与生物活性分析

为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞。通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-time PCR及ELISA测定PoIFN-α基因在BHK-21细胞内的表达,利用淋巴细胞增值试验(MTT)检测表达蛋白的生物学活性。结果表明:稳定整合PoIFN-α基因的BHK-21细胞系其PoIFN-αmRNA的转录效率比阴性对照组提高1.52倍,蛋白表达量显著提高1.35倍。MTT试验表明真核表达PoIFN-α淋巴细胞增值活性与阴性对照组相比差异显著(P<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIFN-α具有良好的生物学活性,为开发新型抗病毒制剂奠定基础。     

犬呼肠病毒3型感染BHK-21细胞的超微结构观察

本实验采用免疫电镜负染、细胞超薄切片透射电镜观察 ,证实所分离的病毒为犬呼肠病毒。病毒粒子由致密的核心和包围着核心的双层衣壳组成 ,有的为空心衣壳 ,多呈晶格状排列 ;病毒在胞浆增殖 ,装配 ,通过细胞崩解释放 ;细胞浆内可见大量的微丝与微管结构 ,认为与病毒复制有关。胞浆与胞核中均可见到内容物不同 ,形态各异的包涵体     

柴胡细胞悬浮培养

柴胡愈伤组织的诱导以适当浓度的２，４－Ｄ和细胞分裂素的配合使用效果较好。在细胞悬浮培养过程中，细胞生长的情况是接种后的９￣１８天迅速生长，１８天后基本停止生长；ｐＨ值随培养的进程由开始时的５．８逐渐降至４．９（第９天），然后又出现回升。对培养液的检测表明：未分化出根的柴胡培养细胞也能生成柴胡皂甙。     

伊贝母细胞悬浮培养的研究

研究了伊贝母细胞悬浮培养过程中接种量、培养方式和激素浓度对细胞生长的影响；测得细胞生长周期为１９～２４ｄ；分析了培养液的ｐＨ、蔗糖浓度、电导率和Ｄｏ变化的原因。鉴定了悬浮培养细胞中含有生物碱，其总生物碱和西贝素含量均高于栽培鳞茎。     

细胞悬浮培养制备紫杉醇的研究进展

紫杉醇具有很强的抗癌活性,药用价值很高.综述了生物合成、微生物发酵和细胞悬浮培养制备紫杉醇的研究进展,重点阐述细胞培养过程中外植体的选取、培养基的组成和诱导因子等对紫杉醇产率的影响.     

银杏细胞悬浮培养及其黄酮类物质生产

探讨了银杏细胞悬浮培养过程中诸多因子对细胞生长率和黄酮类化合物含量的影响，结果表明：液体培养基以N6＋NAA（1.6-1.8) BA0.5为最好；最适接种量为2.5g-3.0g／瓶（鲜重），最适pH值为6.0-6.5，附加MES效果更好；碳源以40％葡萄糖进行细胞培养的30％蔗糖进行黄酮生产较好；细胞生长和生产黄酮的激素、碳源等培养条件不同，激素类以NAA（1.6-1.8) BA0.5进行细胞培养、以GA0.5 KT1.0进行黄酮生产最佳，附加黄酮前体物PLA可提高黄酮产量，放线菌素－D不适合黄酮类药用物质生产。     

草珊瑚细胞悬浮培养之研究

报道了草珊瑚（Ｓａｒｃａｎｄｒａｇｌａｂｒａ）细胞悬浮培养的某些特性。细胞悬浮培养的摇床转速对草珊瑚细胞生长至关重要、培养物在１００ｒ／ｍｉｎ速度下振荡培养几乎难以存活，最佳的摇床转速为４０ｒ／ｍｉｎ（２３．５ｈ／ｄ＋８０ｒ／ｍｉｎ（０．５ｈ／ｄ），其生长可增加５倍左右。细胞悬浮培养的接种量以２．０ｇＦＷ／瓶合适，其培养物的月产率１３．２２ｇＦＷ／瓶（或１８．７３ｇＤＷ／１）。细胞生长的时间进程是，接种０－５ｄ，细胞增殖十分缓慢，１０－２０ｄ迅速生长，２０ｄ后基本停止生长。培养基的ｐＨ迅速下降时是细胞增殖缓慢的时期，当培养基ｐＨ值开始升高时，细胞增殖也显著加快。黄酮苷类物质的合成在０－２０ｄ迅速增加，２０ｄ左右达到高峰。     

粉纹夜蛾5BI细胞的悬浮培养

报道了粉纹夜蛾５ＢＩ细胞在转瓶系统悬浮培养及血清浓度，细胞接种浓度，非离子表面活性剂Ｐｌｕｒｎｉｃ－Ｆ－６８等对细胞生长的影响与作用，实验结果显示：５ＢＩ细胞能够搅拌条件下，在含５％血清培养基中正常生长增殖，当血清浓度降至２％时。细胞生长速率产生较明显变化，ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ－６８对细胞生长有显著的保护作用，５ＢＩ细胞适宜于悬浮培养和进一步放大培养。     

植物生物反应器细胞悬浮培养研究进展

利用生物反应器进行植物细胞悬浮培养可以缩短植物细胞的生长周期，但进行大规模植物细胞悬浮培养会受到植物自身特点和生物技术的限制。通过与微生物相比较，笔详细介绍了植物细胞悬浮培养的特点，分析了用于植物细胞悬浮培养的反应器类型及其特点和适用范围，并提出以植物快速繁育为主要目标的植物生物反应器的研究方向。     

红豆杉细胞悬浮培养及动力学研究

对红豆杉细胞在５Ｌ通气机械搅拌式反应器中的培养过程及动力学进行了研究．经２４ｄ培养，细胞生物量增加３倍，紫杉醇含量可达细胞干重的１．０３５×１０－３．建立了描述细胞生长过程的模型，采用分段多项式函数逼近关联ｕ与ｕｍ的函数Ｆ（ｓ），建立了描述产物合成的动力学方程，采用多项式函数逼近关联产物合成速率与细胞生长速率的函数，确定了部分动力学参数     

唐古特大黄细胞悬浮培养中的生理生化特性

目的 初步研究液体培养条件下唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.)细胞的生理生化特性.方法 以唐古特大黄子叶为材料,诱导和筛选愈伤组织,进行细胞悬浮培养.测定了细胞悬浮培养过程中的细胞生长、pH值和总蒽醌累积的动态变化,并研究了水杨酸(SA)对细胞生长和总蒽醌累积的影响.结果 培养细胞生长周期36d;细胞的增殖曲线呈"S"形;其培养液pH值先下降后回升;细胞中总蒽醌累积规律也呈"S"形曲线,在培养的第30天,细胞中总蒽醌可达到最大值.SA对细胞的生长和总蒽醌累积有影响,0.1mg/L和1.0mg/L SA促进细胞的生长和总蒽醌的积累.结论 细胞悬浮培养过程中的总蒽醌累积和细胞生长呈正相关性.     

胀果甘草细胞的悬浮培养

切取胀果甘草(Glycyrrhiza inflate)无菌苗的子叶、下胚轴和根段外植体进行愈伤组织的诱导和悬浮细胞培养,建立了胀果甘草细胞悬浮培养体系,测定了悬浮培养细胞的生长曲线,并且研究了接种量、条件培养和激素组合对胀果甘草悬浮细胞生长的影响.结果表明子叶来源的愈伤组织最适合作为胀果甘草细胞悬浮培养的起始培养物;悬浮培养的最佳接种量为 35 g/L;条件培养基的最佳用量为总培养体积的1/3;最适合胀果甘草悬浮细胞生长的培养基是附加了 NAA 1.0 mg/L + KT 0.5 mg/L 激素组合的 MS 培养基.