用基因芯片研究苦丁茶甙对K562细胞基因表达的影响

以人红白血病K562细胞株为材料，应用基因芯片技术研究苦丁茶甙对人红白血病K562细胞作用前后基因表达的差异，以诱导分化药物羟基脲处理作为正对照，分别提取药物处理前后细胞RNA进行逆转录cDNA，使获得的cDNA分别标记上Cy3和Cy5两种荧光物质；然后与由1632条cDNA片段制作的基因表达谱芯片杂交，经扫描及对获得的数据用相关软件分析，确定K562细胞经苦丁茶甙处理前后差异表达基因48条，有41条与羧基脲处理相同，其中上调表达的基因有32条，下调表达的基因有16条，这将为进一步建立基因芯片技术药物筛选模型奠定基础。     

低功率毫米波辐射对HL60白血病细胞基因表达谱的影响

应用基因芯片技术考察了经频率为41.32GHz的毫米波辐射的HL60白血病细胞和未经毫米波辐射的HL60白血病细胞组的基因表达差异,并用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法验证了IL-7、EGF和LGALS3基因变化.结果表明,毫米波辐射60 min后.HL60细胞增殖,基因芯片检出基因表达上调18个和下调306个,在下调的基因中,RT-PCR检出IL-7、EGF和LGALS3基因下调的情况与基因芯片结果一致.这说明低功率毫米波可导致HL60细胞的基因表达谱发生变化,这些变化的基因与HL60细胞的增殖功能相关.     

用基因芯片的方法对人酪蛋白激酶CK1γ1基因

将人酪蛋白激酶基因CK1γ1的cDNA与4096个胎脑cDNA一起点在玻璃介质的基因芯片上,用16种不同组织或细胞系的mRNA分别杂交该基因芯片,以正常人混合组织mRNA作共同对照,检测CK1γ1基因的表达谱变化,结果显示人CK1γ1基因在15种组织表达没有变化,但在肝癌组织中的表达却显著下调,采集的7例肝癌标本的cDNA与正常肝组织的cDNA重复7次芯片杂交,结果肯定了CK1γ1基因在肝癌组织中表达下调,同时,对芯片杂交结果通过聚类分析,按基因表达谱特征将CK11基因与其他7种基因聚类在一起,提示CK1r1基因可能在生物学作用方面与这7种基因有某种相关性。     

低功率毫米波辐射对HL60细胞基因表达谱的影响

摘要：研究低功率毫米波辐射对HL60白血病细胞基因表达谱的影响。应用基因芯片检测频率41.32GHz的毫米波辐射HL60白血病细胞和未辐射毫米波HL60白血病细胞组基因表达差异,并进行RT-PCR方法验证IL-7、EGF和LGALS3基因变化。 结果与对照组比较,毫米波辐射60min后,HL60细胞增殖,基因芯片检出基因表达上调18个和下调306个,在下调的基因中,RT-PCR 检出IL-7、EGF和LGALS3基因下调与基因芯片结果一致。表明低功率毫米波可导致HL60细胞基因表达谱发生变化,这些变化的基因与HL60细胞增殖功能相关。提示基因表达变化是低功率毫米波辐射HL60细胞所致生物学反应的重要因素。     

基于SAM和GA／SVM的肿瘤基因表达谱分类算法

基因芯片技术在肿瘤分型分类的研究中得到了广泛的应用．为了处理肿瘤基因表达谱数据,建立肿瘤分类预测模型,文中采用基因表达差异显著性分析方法,支持向量机,遗传算法相结合的多步骤降维分类方法．采用该方法处理大肠癌和白血病数据集,筛选到基因数量较少并且分类准确度较高的特征基因子集．实验结果表明,文中的方法可以快速有效地筛选肿瘤特征基因,获得更好的分类效果．     

用基因芯片的方法对人酪蛋白激酶CK1γ1基因进行表达谱和聚类分析

将人酪蛋白激酶基因CK1γ1的cDNA与4096个胎脑cDNA一起点在玻璃介质的基因芯片上,用16种不同组织或细胞系的mRNA分别杂交该基因芯片,以正常人混合组织mRNA作共同对照,检测CK1γ1基因的表达谱变化,结果显示人CK1γ1基因在15种组织表达没有变化,但在肝癌组织中的表达却显著下调.采集的7例肝癌标本的cDNA与正常肝组织的cDNA重复7次芯片杂交,结果肯定了CK1γ1基因在肝癌组织中表达下调.同时,对芯片杂交结果通过聚类分析,按基因表达谱特征将CK1γ1基因与其他7种基因聚类在一起,提示CK1γ1基因可能在生物学作用方面与这7种基因有某种相关性.     

基因芯片对胃癌和食管癌基因表达谱的对比研究

目的 对比研究胃癌和食管癌的基因表达谱,筛选各自特异性基因.方法 利用基因芯片技术对两种上消化道常见肿瘤胃癌和食管癌的基因表达谱进行分析.结果 筛选出在胃癌中差异表达的基因34个.和21个在食管癌中发生差异表达的基因,最后发现在两种肿瘤组织中都发生显著变化的基因有4个.另外,对这些肿瘤相关基因的表达水平进行聚类分析,可以很清楚地将两种肿瘤组织及正常组织区分开来.结论 利用基因芯片技术可以高通量地筛选出肿瘤组织差异表达基因.通过少量特异性基因的表达水平,可以用来区分不同的肿瘤组织,对将来的基因诊断和基因治疗有一定的参考价值.     

加昧四物汤对SHR心肌组织基因表达谱的影响

本文观察加味四物汤对自发性高血压大鼠（SHR）的心肌组织基因表达谱的影响。提取实验组和对照组SHR心肌组织RNA,用Cy-5、Cy-3逆转录荧光标记制作cDNA探针与表达谱基因芯片杂交,Scan Array4000扫描仪扫描杂交信号荧光强度,ImaGENE3．0软件分析扫描结果,筛选比率在0．5至2．0之间非差异表达基因和比率在0．5到2．0范围之外差异表达基因。结果表明阳性基因重叠有18条,其中高表达的基因有4条,低表达的有14条。该方作用靶点较多,可上调或下调SHR的某些与生物酶、血管活性物质、心肌纤维化、脂肪酸代谢有关基因的表达,这可能是其产生药理作用的重要因素。     

人白血病仰制因子基因在酵母中的融合表达

用ＰＣＲ突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失，并与质粒ｐＰＩＣＺαＡ上的ｍｙｃ表位及６个组氨酸处于同一读码框，构建融合表达载体ｐＰＩＣＺαＡ－ｈＬＩＦＭ．通过氯化理化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母Ｘ－３３的基因组ＤＮＡ中。转化子经甘油增菌和甲醇诱导，实现了ｈＬＩＦ基因在毕赤酵母表达载体系统中的表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明在相对分子质量为６１ ０００处有一条人白血病抑制因子特异蛋白带．凝胶薄层扫描分析结果显示表达的目的蛋白占培养液上清总蛋白的 ３３．３％．且该表达产物具有抑制小鼠畸胎瘤细胞Ｆ９克隆形成的活性．     

人白血病抑制因子基因在酵母中的融合表达

用PCR突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失,并与质粒pPICZαA上的myc表位及6个组氨酸处于同一读码框,构建融合表达载体pPICZαA-hLIF^M。通过氯化锂化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母X－33的基因组DNA中,转化子经甘油增菌和甲醇诱导,实现了hLIF基因在毕赤酵母表达载体系统中的表达。SDS－PAGE检测和Western blot分析结果表明在相对分子质量为61000处有一条人白血病抑制因子特异蛋白带。凝胶薄层扫描分析结果显示表达的目的蛋白占培养液上清总蛋白的33．3％。且该表达产物具有抑制小鼠畸胎瘤细胞F9克隆形成的活性。     

急性白血病患者血管内皮生长因子含量的测定及意义

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）与急性白血病（AL）诊断及预后的关系.方法应用定量酶联免疫吸附实验测定25例不同病期AL患者（10例初诊未治、10例完全缓解期、5例复发患者）和9例正常对照者血清中VEGF的质量浓度.结果初诊未治、复发AL患者的VEGF含量高;完全缓解患者的VEGF质量浓度下降;VEGF高者完全缓解...     

害虫对转基因植物抗性进化的计算机模拟

采用人工生命的方法，定量模拟了不同条件下害虫对转基因植物抗性性的进化速度。结果显示只转入植物一个毒性基因常使害虫在短时间内产生抗性，若转３－４个不会产生交互抗性的毒性基因则可大大推迟到或阻止抗性的产生。     

利用相似显著性序列特征预测白血病疾病基因

研究发现新的白血病致病基因对揭示白血病机理,寻求有效治疗方法有重要意义.选取了mRNA和protein序列的330个物化特征,发现某些特征在五类白血病(T-ALL、ALL、AML、APL和JML)的已知疾病基因中表现出相似的显著性差异.基于这个特点设计了一种新的白血病疾病基因预测方法.测试结果表明该方法能够有效地从众多候选基因中预测出真实的白血病基因,效果明显优于其他预测方法.     

宁夏地区162株大肠杆菌临床分离株对磺胺类药物的耐药性分析

分析宁夏地区大肠杆菌临床分离株对磺胺类药物的耐药性,为指导临床合理用药提供参考.用PCR技术和药敏实验对宁夏地区临床分离的162株大肠杆菌进行了磺胺类药物耐药基因sul1,sul2,sul3的分子检测和耐药性研究.结果表明,在162株大肠杆菌临床分离株中,127株检测出了耐药基因,阳性率为78.4%.其中,sul1基因的阳性率最高,为65.4%,sul2,sul3基因的阳性率分别为48.1%,1.9%;106株对磺胺类药物的耐药率为65.4%,耐药菌株中有5株未检测到sul1,sul2,sul3耐药基因.药敏实验结果与基因检测结果的符合率为95.3%.宁夏地区大肠杆菌临床分离株对磺胺类药物具有较高的耐药性,应予以足够重视.     

直接免疫荧光法分析白血病及骨髓增生异常综合征患者免疫表型

目的 :检测急性白血病 (AL)及骨髓增生异常综合征 (MDS)免疫表型及其临床意义。方法 :用流式细胞仪CD4 5设门直接免疫三标记法 ,检测 4 9例AL及MDS患者免疫表型。结果 :ALL双克隆型 9例 ,其中髓系伴T -ALL 3例 ,髓系伴B -ALL 4例 ,1例为髓系伴T、B标记 (CD13 +CD7+CD19+ ) ,1例同时CD7+CD19+ ;ALL同时表达CD3 4 及HLA -DR最高 (6 0 .0 1%) ,明显高于AML、MDS(P <0 .0 0 5 )。AML双克隆型 2 0例 ,7例为髓系伴CD7+ ,2例髓系伴CD19+ ,11例为同时表达CD3 4 +HLA -DR +。MDS患者骨髓细胞表达髓系成熟抗原CD13 +及CD3 3 +增高 ,未发现淋系抗原的表达。MDS -RAEB、RAEBT及转为白血病病例均高表达CD3 4 及HLA -DR抗原。结论 :用三标记法简便易行 ,提高诊断准确性 ;单抗组合应兼顾髓、淋系同时表达 ;应加胞浆抗原检测。     

小麦新种质241主要特异性状的遗传性

为了探求小麦新种质241巨穗、粒大、结实率高等优良性状的遗传机理,应用单体分析和双端体分析方法对241材料进行遗传学研究。结果表明,小麦种质材料241的3A、5A、2B、1D和6D染色体上具有控制穗长的基因,其中2B染色体上的基因表现为强效,3A、5A、1D和6D染色体上的基因表现为弱效。控制穗长的基因定位在3AL、5AL、1DL和6DL染色体臂上,其中6DL染色体臂上可能具有控制241穗长的1个新基因。     

不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病的抗性研究

目的探索不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病(Avian leukosis,AL)的抗性差异,为建立AL抗性和易感鸡系提供实验依据。方法选择纯合G1、G5、G6鸡系及杂合G8鸡系雏鸡进行人工感染白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus,ALV-A)RAV-1毒株实验,G8系雏鸡(6羽)作为对照。攻毒后对各鸡系的死亡率、病变率、血液中抗体水平以及外周血淋巴细胞的病毒载量等与抗性相关指标进行动态评估与统计学分析,最终确定抗性较强和较弱的鸡系。结果 G5系病变率和死亡率均明显高于其它攻毒鸡系,G1系最低,G6和G8系居中;G1系在攻毒后第5周开始,抗体效价一直高于其它鸡系,而G5系则最低,并且在攻毒后第8周至11周和第15周至18周,G1系的抗体效价显著高于G5系(P0.05);G1系的病毒载量在攻毒后第7周至15周,低于其它鸡系,而G5系自攻毒后第9周至13周,极显著高于G1系(P0.01)。结论 G1系在感染ALV后,死亡率较低,病变轻微,抗体保护力较强,且病毒的增殖较慢,因而其对AL具有较强的抗性,而G5系则相反较为易感。本研究不仅为建立AL抗性较强和较易感的鸡系提供了实验依据,而且对进一步阐明鸡主要组织相容性复合体(Major histocompatablity complex,MHC)多态性与AL抗病性的关系有重要作用。     

Knockdown of <Emphasis Type="Italic">MRP4</Emphasis> by lentivirus-mediated siRNA improves sensitivity to adriamycin in adriamycin-resistant acute myeloid leukemia cells

Chemotherapy remains the standard treatment for acute myeloid leukemia;however,the emergence of drug resistance is a major hurdle in the successful treatment of leukemia.The expression of multidrug resistance-associated protein 4(MRP4)induces re- sistance in the adriamycin-resistant acute myeloid leukemia cell line,K562/ADR.The aim of this study was to investigate whether knockdown of MRP4 by lentivirus-mediated siRNA could improve the sensitivity of K562/ADR cells to adriamycin.Five lenti- virus-mediated short hairpin RNAs(lv-shRNAs-MRP4)were designed to trigger the gene silencing RNA interference(RNAi) pathway.The efficiency of lentivirus-mediated siRNA infection into K562/ADR cells was determined using fluorescence mi- croscopy to observe lentivirus-mediated GFP expression.MRP4 expression in infected K562/ADR cells was evaluated by real- time PCR and Western blot analysis.The MTS assay was used to measure cell viability and flow cytometry was used to measure apoptosis.The transfection efficiency of K562/ADR cells was over 80 percent.The gene silencing efficacy of lv-shRNA1-MRP4 was superior to the other constructs.Infection of K562/ADR cells with lv-shRNA1-MRP4 led to strong inhibition of MRP4 mRNA and protein expression.Combined treatment with lv-shRNA1-MRP4 and adriamycin decreased cell growth and increased apoptosis compared to treatment with lv-shRNA1-MRP4 or adriamycin alone.These data indicate that in K562/ADR cells MRP4 is involved in drug resistance mechanisms and that lentivirus-mediated knockdown of MRP4 may enhance sensitivity to adriamycin.     

50例急性白血病细胞电镜研究

用电镜和光镜相结合观察50例急性白血病,两者诊断符合率达90%,电镜有助于急性白血病的诊断分型,SEM 下急粒以嵴样型细胞为多,占48～90%;急单中的皱膜型细胞为70～81%;急淋白血病细胞表面特征主要有光滑型和微绒毛型两种.TEM 观察结果和既往作者报道的相似.     

质粒与基因工程

质粒是细小、环状、独立于染色体外，能自主复制的DNA，合有少量基因。原核细胞质粒合有可控制原核细胞发育，转移对药物的耐药性、毒性产物，降解碳源等基因。近代可利用质粒研究各种机体基因结构与功能的关系，作为研究基因工程的工具与技术。