流式细胞仪检测技术在食源性致病菌检测中的应用

流式细胞术是一种灵敏度高,耗时短,程序简便的定量细胞分析分选方法,广泛应用于微生物检测、环境监测、临床医学等领域,尤其在微生物检测中表现突出.流式细胞术正逐步应用于食源性致病菌的检测,研究并介绍了流式细胞术在几种食源性致病菌检测中的应用,该方法具有广阔的发展前景.     

基于CRISPR/Cas9技术建立敲除Plac9基因的人胚肾细胞株

目的:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术和流式细胞术相结合,获得可编辑Plac9基因敲除的人胚肾细胞株(293T).方法:根据Plac9外显子设计了4个sgRNAs(S1,S2,S3,S4),分别将其与PX458载体连接,构建了PX458-S1(S2/S3/S4)载体.通过转染试剂lipo2000将表达载体分别转染至293T细胞中,并以流式细胞术对带绿色荧光蛋白标记的细胞进行单细胞分选,分选后的细胞培养一段时间后,用基因组测序和错配酶酶切进行筛选.从筛选好的细胞中提取蛋白,进行Western Blot检测敲除效率.结果:采用CRISPR/Cas9和流式细胞术结合技术成功构建了Plac9蛋白表达缺失的人胚肾细胞株.结论:该方法简便快捷、效率高,可广泛地用于编辑各种细胞和细胞功能研究.     

流式细胞术检测二甲亚砜对内皮细胞周期的影响

流式细胞术检测二甲亚砜对内皮细胞周期的影响张利华，李方勇，王耀发（华东师范大学河口海岸国家重点实验室上海２０００６２）流式细胞术（ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）是７０年代末发展起来的一种快速高效的单细胞分析及分选的新技术。它在细胞生物学上的一个...     

“流式细胞术的建立和应用”获国家级科技进步奖

流式细胞术是国外70年代初发展起来的一种对单个细胞的物理特性、化学成分、生物学特性进行快速定量测定和分选的新型技术.它目前已在生物、医学领域的临床和基础研究中得到广泛的应用.北京师范大学生物系薛绍白、宋平根等同志,在1978年利用自制的简易设备开展了“流式细胞术的建立和应用”的研究。1981年在国内首次引进了流式细胞术分选仪后,逐步在北京师大建立起引进、消     

利用CRISPR/Cas9技术构建GLUT4基因敲减的A549细胞系

目的:为探究GLUT4基因在肺癌细胞中的功能及影响.方法:在GLUT4外显子上设计了4个sgRNAs(S1、S2、S3、S4),分别与PX458载体连接形成重组表达载体后,借助转染试剂lipo3000将表达载体转入生长态势良好的A549细胞中,再利用流式细胞仪分选技术对转入重组载体发出绿色荧光的细胞进行单细胞分选.利用基因组测序筛选突变株,提取突变株的RNA和蛋白,进行Real-time PCR及Western Blot检测敲减效率,并利用激光共聚焦显微术检测突变株葡萄糖摄取量的变化.结果:突变株细胞在mRNA及蛋白水平均表现出GLUT4基因敲减效果,并在葡萄糖摄取上表现出明显的降低趋势.结论:利用CRISPR/Cas9系统成功建立了GLUT4基因敲减A549细胞系.     

应用流式细胞分选技术分离人外周血原代单核细胞

巨噬细胞是机体重要的免疫细胞,具有免疫调节、抗感染和抗肿瘤等重要功能。快速、有效地分离得到高纯度的人外周血单核细胞,是研究巨噬细胞功能的前提。本文利用细胞大小及胞内颗粒度属性对单核细胞与其他白细胞组分进行区分,通过流式细胞分选,获得了较高纯度单核细胞。单核细胞表面标志物CD14染色分析显示,该方法对单核细胞的分选效率达85%以上。进一步实验证明,分选得到的单核细胞能够在体外正常分化为巨噬细胞。     

稳定表达Cytoglobin的肝细胞株LO-2的建立及生长增殖的变化

目的:建立过表达细胞珠蛋白Cytoglobin(CYGB)的人肝细胞LO-2稳定株,初步探究CYGB对LO-2细胞生长增殖的影响.方法:采用PCR法扩增CYGB编码基因,并通过GATEWAY克隆技术构建慢病毒重组表达载体Plenti-N-GFP-CYGB;酶切、测序鉴定后,与包装质粒三质粒共转人肾上皮细胞(HEK293T),收集、浓缩含病毒上清,获得病毒颗粒;感染LO-2细胞并采用流式细胞分选技术筛选稳定细胞株,Western blot检测表达情况;使用CCK-8试剂盒检测过表达CYGB对LO-2细胞增殖的影响,通过流式细胞技术检测过表达CYGB对LO-2细胞凋亡的影响.结果:慢病毒重组表达载体Plenti-N-GFP-CYGB双酶切鉴定以及基因序列比对鉴定均正确.三质粒共转HEK293T细胞后,荧光显微镜下观察大部分细胞出现绿色荧光;收集病毒颗粒并感染LO-2细胞后,经流式细胞分选技术筛选获得稳定表达CYGB的细胞,Western blot鉴定显示,LO-2稳定株组的CYGB表达条带明显,阴性对照组未出现条带.CCK-8法绘制的细胞生长曲线显示,稳定表达细胞组的细胞生长速率低于阴性对照组,有统计学差异(P0.01).流式细胞技术检测各组LO-2细胞凋亡情况结果显示,稳定表达细胞组的细胞凋亡百分比高于阴性对照组(P0.05).结论:成功构建慢病毒重组表达载体Plenti-N-GFP-CYGB;建立稳定表达CYGB的人肝细胞株LO-2-GFP-CYGB以及阴性对照组细胞株LO-2-GFP;稳定表达CYGB的肝细胞生长速率较阴性对照组肝细胞降低,稳定表达CYGB的肝细胞凋亡百分比高于阴性对照组肝细胞;为CYGB与其蛋白的相互关系研究提供了细胞模型.     

BD-FACS Calibur流式细胞仪在药理学中的应用与管理

流式细胞仪(flow cytometry,FCM)是采用激光束激发单行流动的细胞,对它的散射光和携带的或自发的荧光强度进行探测,从而完成细胞分析和分选的重要仪器。结合工作实际,从分析FCM在药理学中的应用入手,探讨实验中心大型仪器的科学管理问题。在管理上引入统一、有偿、共享等方式,重视操作人员的培训,将有利于充分发挥大型仪器的作用,使之更好地服务于教学、科研和社会。     

检测植物倍性时流式细胞仪参数设置的体会

流式细胞仪已广泛用于植物倍性的检测,通过检测拟南芥叶片的倍性,对BD LSRFortessaTM型流式细胞仪在用于植物倍性检测时的参数选择和设置进行了研究。结果表明:当建立双参数FSC/SSC散点图圈定目标植物细胞核时,设定FSC-A、SSC-A为对数放大;以DAPI为"阈"进行阈值的设定,能有效地排除细胞碎片等大量非目标细胞核和噪音的干扰信号,且最大限度地保留了靶细胞核;建立DAPI-W/DAPI-A双参数散点图能有效排除黏连细胞核。     

流式细胞术在高等植物细胞学研究中的应用

流式细胞术作为一种快速、灵敏的细胞分析技术,目前已广泛应用于细胞生物学、发育生物学、细胞动力学、分子生物学等植物学研究的多个领域。本文简要论述了流式细胞仪的工作原理,并对其在高等植物细胞学研究中的应用做了综述。