重组人骨形成蛋白-4的大规模制备

含有能够高表达重组人骨形成蛋白成熟肽（recombinant human bone morphogenetic protein 4 mature peptide,rhBMP-4m）质粒的工程菌株,导人15LNBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵和诱导表达,测定发酵菌液OD600值为30．8。离心收集菌体,PAGE电泳后光密度扫描表明hBMP-4m占细菌总蛋白量的42％。悬浮所收集的菌体,裂菌,洗涤4次后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的83．2％。预先取少量样品进行探索实验后,全部包涵体用8mol尿素缓冲液溶解,上SP-Sepharose FF阳离子柱．以0.35mol NaCl洗脱．获得纯度为96％的hBMP-4m。其收获量为1．34s／L发酵液;收得率为36.4％。结果表明：使用这套工艺流程大规模制备hBMP-4m,能够得到较好的收得率、较高的收获量和纯度。     

毕赤酵母密码子用法对人骨形成蛋白6表达的影响分析

对已筛选出的毕赤酵母阳性转化子菌株（His＋Mut＋）和（His＋Muts）进行PCR验证,用SDS-PAGE和Western blot方法检测重组骨形成蛋白6的表达情况,为了解释无表达的结果,对酵母的密码子与重组骨形成蛋白6的密码子兼容性进行了理论上的初步分析。     

人胎盘催乳素的性质分析

本文对自行纯化的人胎盘催乳素(hPL)分别进行了高效液相分析、紫外扫描、SDS-PAGE测定分子量以及等电聚焦电泳等分析手段证明了我们提纯的hPL已经达到了高纯度,在分析时,发现其等电点和以往文献报道不一致,我们认为这对深入了解探讨hPL的结构和功能有一定的参考价值。     

基因工程菌株产生人类绒毛膜促性腺激素抗原的研究——Ⅰ.β-Galactosidase-hCG的分离纯化与鉴定

通过寡核苷酸合成仪,用化学方法合成相当于hcGβ链C末端36肽基因的片段,成功地克隆到噬菌体载体λgt11中,并在宿主菌株E. coli y_(1089)中得到表达。含λgt11 hCG重组体的E. coli y_(1089)所合成的含人类绒毛膜促性腺激素β链c末36肽的杂交蛋白(下称:β—galactosidase—hCG),通过硫酸铵沉淀、亲和层析和制备性聚丙烯酰胺凝胶电泳,可得电泳纯单一色带的β—gaIactosidase—hCG。蛋白质转印(Western Blot)技术证实β—galactasidase—hCG具有hCGβ链c末端36肽的免疫特性。对流免疫电泳和免疫双扩散试验结果表明β—galactosidase—hCG具免疫原性。从一立升培养液的菌体中可分离纯化约3.8毫克的β—galaetosidase—hCG。     

辣椒疫霉菌蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定

本文以辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)A~1和A~2两个交配型及寄生疫霉菌(P.micotianae Var.parasitica)A~1和A~2两个交配型为标准菌株,对从新疆石河子、塔城、吐鲁番、伊犁、哈密和昌吉六个不同地区辣椒病株上分离的疫霉菌株(分别编号为Ph—2、Ph—11、Ph—14、、Ph—15、Ph—16、Ph—17)的蛋白质,用聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行了分析和比较。结果证明,这6个菌株的蛋白质电泳图谱与辣椒疫霉菌标准菌株一致,它们都有相同的5条重带和基本相同的3～4条弱带,而与寄生疫霉菌完全不同。说明该法可做为疫霉菌鉴定的重要辅助手段之一,实验中同一菌种不同交配型间的蛋白质电泳图谱完全相同,但6个菌株中Ph—2、Ph—14和Ph—16的弱带与标准菌株间稍有差异,是属于菌株间的差异还是其它原因有待进一步研究。     

管藻目绿藻叶绿素蛋白复合物PAGE分离方法的优化

以高等植物菠菜为对照，对管藻目绿藻刺松藻和假根羽藻叶绿素蛋白复合物的ＰＡＧＥ分离方法进行了优化。选择ＳＤＳ，ＤＯＣ，ＤＭＧ和ＴｒｉｔｏｎＸ－１００４种去污剂在不同的浓度、比例及增溶时间条件下，对色素蛋白复合物的分离效果进行了比较，并对电泳分离条件做了部分改进，提高了分辨率。     

BSA-SDS-Ag聚合物水凝胶性质的研究(Ⅲ)

报道影响水凝胶性质的因素及生色过程。研究表明，BSA－SDS－Ag聚合物水凝胶的吸光度A和电导率δ均随体系pH.Ag(NH3)2^ 浓度，反应温度和时间而变化。A除随温度升高而急剧增加之外，其它因素无前一平台；但δ的变化确较复杂。显色过程表明随Ag(NH3)2^ 浓度增加而加深，亦随反应时间的增加而加深，说明该体系为化学键合的凝胶体系，微粒的粒径亦随之变大。     

青海高原春小麦醇溶蛋白电泳分析

采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Ａ－ＰＡＧＥ）法,分析了青海省不同地区同一品种和同一地区不同品种（系）的春小麦籽粒醇溶蛋白电泳图谱。结果表明：不同地区同一品种的电泳图谱一致;同一地区不同品种（系）间的电泳图谱差异显著,并显示出各自特独的谱带组合。证明麦醇溶蛋白的组成完全的组成完全由遗传决定,不受外界环境条件的影响。     

基因重组融合蛋白的纯化

本文论述了基因重组融合蛋白纯化过程和存在的问题.     

用种子醇溶蛋白电泳技术鉴定外源DNA导入春小麦变异后代

采用醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对外源DNA导入技术选育的春小麦变异株系的单株及其受体种子的分析结果:小麦各变异后代电泳谱带在15～19条之间变动,受体谱带为16条.多数谱带与受体相似,也出现了受体所没有的新谱带.各后代的谱带着色深度、谱带宽度均存在显著差异,其差异的出现与外源DNA导入有关.同时说明,种子醇溶蛋白电泳技术可用于外源遗传物质导入小麦变异后代的鉴定.     

曙红Y在牛血清白蛋白表面上的Langmuir吸附反应研究

应用微相吸附-光谱修正技术研究了曙红Y(EY)与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用,并讨论了反应时间、离子强度、温度,以及金属离子干扰等因素对该作用产生的影响.结果表明,EY与BSA间的作用符合Langmuir单分子层吸附,结合产物最大结合数NEY∶NBSA=5∶1;计算了不同温度下(30,45和60℃)反应的结合常数K,发现K随温度的升高而减小;并测定了蛋白质的工作曲线,该方法的检出限为20 mg/L.     

重组Hepcidin融合蛋白的金属螯合亲和层析纯化

在大肠杆菌中表达的重组Hepcidin融合蛋白以包涵体形式存在,其N端带有6个组氨酸。以Ni²⁺-IDA-Sepharose Fast Flow为层析介质,在变性条件下以不同的咪唑和pH值洗脱方式对Hepcidin融合蛋白的纯化效果进行了比较,确定了该融合蛋白的金属螯合层析纯化条件。以60mmol/L咪唑洗脱杂蛋白,然后将pH值降至4.0洗脱融合蛋白,纯化后的融合蛋白纯度大于95%,而且不含咪唑,有利于下一步Hepcidin的制备。金属螯合层析中融合蛋白收率不低于90%。Ni²⁺-IDA-Sepharose Fast Flow对该融合蛋白的吸附量为30.4mg /mL。     

十二烷基硫酸钠增敏动力学光度法测定间苯二酚

在pH=11.39的NH3-NH4Cl缓冲溶液及90℃水浴加热12min的条件下,阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)存在时,间苯二酚对KIO4氧化间甲酚紫(m-CP)的褪色反应具有强烈的阻抑作用。据此建立了催化动力学光度法测定痕量间苯二酚的新方法。该方法线性范围为0.08～0.36μg/mL,检出限8.13×10-3μg/mL,可直接用于水样中痕量间苯二酚的测定,结果满意。