枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的发酵条件优化分析

为获得枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的最佳发酵条件,分别对碳源、氮源、碳氮质量比、发酵时间和培养温度进行了单因素实验,在此基础上对发酵温度、接种量、培养基初始pH值和发酵时间四因素进行了L9(34)正交优化试验.结果表明枯草芽孢杆菌分泌β-甘露聚糖酶的最佳碳源为40 g/L魔芋精粉,最佳氮源为5 g/L酵母抽提物,两者最佳质量比为5∶1,最佳发酵条件为30℃的条件下摇瓶培养28 h;最佳发酵参数组合为发酵温度30℃、接种量5%、培养基初始pH6.5、发酵时间28 h;各因素对枯草芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的影响程度大小依次为发酵时间>发酵温度>接种量>培养基初始pH,其中发酵时间对产酶的影响最为显著.     

高温α-淀粉酶产生菌株的选育

从西藏当雄温泉附近的土壤中，分离到一株能在55℃生长并分泌高温α－淀粉酶的菌株，经初步鉴定为凝结芽孢杆菌，命名为Bacillus coagulans LS-1。该菌株用紫外线和亚硝基胍诱变，在55℃摇瓶培养条件下，筛选到一个发酵液酶活达到100U／mL的突变株，较出发菌株的酶活提高了约25倍，发酵液经90℃处理60min，酶活性保持在90％以上。     

嗜碱细菌NTT33碱性β—甘露聚糖酶的纯化与性质研究

根据了嗜碱芽孢杆菌ＮＴＴ３３产生的碱性β－甘露聚糖酶经纯化后,在ＰＡＧＥ电泳上呈现一条蛋白带,分子量为３．８９×１０＾７,等电点为３．０￣４．０,酶反应最适ｐＨ为９．０￣１０．０,最适作用温度为８０℃,稳定ｐＨ为６．０￣９．０,稳定温度为６０℃以下,金属离子Ｃｕ＾２＋,Ｍｇ＾２＋,Ａｌ＾３＋,Ｃｏ＾２＋对该酶有一定的激活作用,而Ａｇ＾＋,Ｈｇ＾２＋,Ｍｎ＾２＋对该酶有明显抑制作用,经薄层层析鉴定,     

多轮复合诱变选育抗真菌抗生素高产菌株及其发酵条件研究

对抗真菌抗生紊Terreicacid—179M(简称179M)产生菌黄柄曲霉(Aspergillus flavipes)进行紫外线、亚硝基胍、紫外线加亚硝基服多轮复合诱变，以对自身次生代谢产物抗性作为筛选策略，选育到对自身抗生素抗性提高且发酵相对效价提高到383％的高产菌株。菌落形态观察发现在SabauraMd(SBD)培养基上产孢子丰富且形成黄色孢子和黄色菌丝的179M产量较高。179M最佳发酵温度为28℃，培养基最适起始pH值为6。     

微波-吖啶橙复合诱变选育Vc发酵伴生菌

采用微波对Vc二步发酵伴生菌苏云金芽孢杆菌进行照射,然后将其涂布到含有15mg/mL吖啶橙的平板中。经过微波和吖啶橙的复合诱变作用,筛选到一株高效伴生菌F328。在pH6.8的发酵培养基中与氧化葡萄糖酸杆菌混合发酵,糖酸转化率提高了7.77%,达到91.55%,2-酮基-L-古龙酸的质量浓度达到90.2mg/mL。菌株F328经过连续传代5次,遗传性状稳定。     

D-核糖产生菌的选育及发酵

以枯草芽孢杆菌Ｄ－２为出发菌株,经紫外诱变,得到一株莽草酸缺陷型突变株Ｄ－２０２,摇瓶发酵Ｄ－核糖产量可达到５２．６ｇ／Ｌ。该菌遗传稳定性良好。通过发酵条件的优化,最高产量可达６５ｇ／Ｌ。经２ｔ发酵罐中试,发酵单位达到５０ｇ／Ｌ。     

内生枯草芽孢杆菌HD-1β-甘露聚糖酶基因的克隆及结构生物学分析

采用PCR技术从一株内生枯草芽孢杆菌HD-1基因组DNA中扩增出β-甘露聚糖酶基因核苷酸编码序列.序列分析表明,该基因全长1 089bp,编码362个氨基酸和一个终止密码子,N端前27个氨基酸为其信号肽.该酶氨基酸序列与相同来源的β-甘露糖苷酶同源性最高达98.34%,具有ManB保守结构域,属于糖苷水解酶家族26的一员.通过对该酶分子三维结构的预测分析,该酶的催化域形成TIM桶状结构,Cys92和Cys112形成二硫键,它们之间的部分构成该酶的氧化还原反应的活性中心,Glu100和Glu292分别为该酶的酸碱催化位点和亲核催化位点.三维结构的分析为提高酶的催化活性的和功能方面的定向改造提供了依据.     

鸟苷生产菌的诱变育种及摇瓶发酵条件优化

以枯草芽孢杆菌T1001为出发菌株，经硫酸二乙酯(DES)诱变处理，定向选育出具腺嘌呤缺陷(Ade^-)、蛋氨酸亚砜抗性(MSO^r)、8．氮鸟嘌呤抗性(8-AG^r)等遗传标记的目的突变株TA208．通过正交试验对TA208菌株进行发酵培养基的优化，同时对发酵温度、pH和装液量等条件进行了研究。在最佳条件下，该菌株能积累鸟苷最高可达25．0g/L。     

枯草芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的三种纯化方法研究

分别采用硫酸铵盐析法,丙酮沉淀法,聚乙二醇沉淀法对枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｋ３－１４菌株发酵产生的β－甘露聚糖酶（β－ｍａｎｎａｎａｓｅ）进行提纯．其中硫酸铵盐析法在６０％饱和度时提纯９．１８倍,比活力为１６９．２０Ｕ／ｍｇ;丙酮沉淀法在用量体积分数１．０∶１时提纯１０．４３倍,比活力为１９２．３１Ｕ／ｍｇ;聚乙二醇沉淀法在０．３５ｇ／ｍｌ浓度时提纯１４．６８倍,比活力为２７０．６９Ｕ／ｍｇ．提纯后的β－甘露聚糖酶制品经电泳鉴定呈四条蛋白带．     

离子注入选育α—乙酰乳酸脱羧酶菌株

采用离子注入技术对一株产α-乙酰乳酸脱羧酶的地衣芽孢杆菌(Bacillus     

芽孢杆菌乳酸高产菌株UZ3-15的紫外线诱变选育

为了获得乳酸的高产菌株,以实验室前期筛选获得的产乳酸芽孢杆菌Z-3-1为出发菌株,通过紫外线诱变来选育乳酸高产菌株,紫外线诱变条件为30 W紫外灯,30 cm辐照距离,诱变时间为150 s.采用溶钙圈法对诱变后的菌株进行初步筛选,得到在MRS-CaCO3培养基上产生透明圈直径较大的菌株19株.通过对菌株的发酵液进行乳酸...     

丙酮沉淀法提取中性β-甘露聚糖酶的条件研究

利用丙酮沉淀提取枯草芽孢杆菌Ｋ３－１４发酵产生的中性β－甘露聚糖酶－２０℃时Ｖ（发酵液）：Ｖ（丙酮）用量为１：１．０时,提取率为８２．５７％,固体酶制酶活力为１９．４３万Ｕ／ｇ,１：２．０时提取率为９５．４０ｇ,所得固体酶净重增加此工艺在工业上是可行的。     

γ-聚谷氨酸高产菌株的选育和发酵培养基的初步优化

以实验室保藏的一株枯草芽孢杆菌为出发菌株,采用紫外、亚硝基胍以及60Coγ射线对其进行复合诱变,获得一株γ-聚谷氨酸高产突变株,在基础培养基中产量是出发菌株的3.11倍,并且突变株经过传代10次,发酵能力稳定;通过正交试验对突变株的发酵培养基进行了初步优化,突变株在一组培养基上的γ-聚谷氨酸产量可达到33.81g/L,是优化前的1.11倍。该突变株的摇瓶发酵产量较高,值得深入开发研究。     

紫外线诱变魔芋软腐菌抑制菌枯草芽孢杆菌的选育

利用紫外线对枯草芽孢杆菌进行诱变。紫外线处理150s时致死率为89.3%,正突变率为104%。筛选出1株菌株对欧文氏杆菌属胡萝卜软腐菌亚种(Erwiniacarotovora var. carotovora,Ecc),的抑菌效果明显。     

椰果内生枯草芽孢杆菌YZ-21产β-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质研究

[目的]分离纯化来源于内生枯草芽孢杆菌YZ-21的β-甘露聚糖酶,并研究其酶学性质.[方法]采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系进行分离与纯化,在此基础研究它的酶学性质.[结果]比较3种纯化方法,最优方法为双水相萃取法,在双水相体系为16%(NH_4)_2SO_4、18%PEG2000、2%NaCl条件下,纯化倍数最高可以达到3.06,酶回收率达到99.26%;酶学性质研究表明,β-甘露聚糖酶的最适反应pH为7.0,最适的反应温度是40℃,pH稳定性在3.0～7.0,热稳定范围在35～55℃之间;Ca~(2+),Ba~(2+),Mg~(2+),K~+,Co~(2+)对酶都有激活作用,而Ca~(2+)激活作用最强,Cu~(2+),Na~+,Zn~(2+),Mn~(2+),EDTA对酶有抑制作用.[结论]利用双水相萃取法较好纯化了β-甘露聚糖酶,酶学性质良好,可以广泛应用于饲料添加剂、纸浆漂白和食品加工等领域.     

嗜碱芽孢杆菌NTT33β-甘露聚糖酶的特性研究

本文研究了嗜碱芽孢杆菌（ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｉｃ） Ｎ Ｔ Ｔ３３β－ 甘露聚糖酶的产生条件和酶学性质．其产酶的最佳碳源为 １％ 槐豆角,最佳氮源为 １％ 蛋白胨＋ ０．２％ 酵母膏,发酵培养３６ｈ 产酶量最高（达 ６１．３ｕ／ｍ ｌ）．甘油、葡萄糖、甘露醇等对产酶有强的阻遏作用．经分离纯化后测得纯酶的分子量为３８．９ Ｋ Ｄ,等电点 ｐ Ｉ为３．０,酶反应最适 ｐ Ｈ 为 ９．０～１０．０,最适温度为８０℃,稳定 ｐ Ｈ 为６．０～９．０,稳定温度为６０℃以下,金属离子中 Ｃｕ２＋ , Ｂａ２＋ , Ｍ ｇ２＋ , Ａｌ３＋ , Ｃｏ２＋ 对该酶有一定的激活作用,而 Ａｇ＋ , Ｈｇ２＋ , Ｍｎ２＋ 对该酶有明显抑制作用     

点突变对枯草芽孢杆菌甘露聚糖酶结构和功能的影响

目的研究定点突变对枯草芽孢杆菌B23所产生的甘露聚糖酶活性及蛋白结构的影响,深入了解该酶结构与功能间的关系,为其分子改造提供理论依据。方法通过与同源酶蛋白序列的比较和分析,在同源性较高的色氨酸第196、198和199位点上,天冬氨酸第91位点上和谷氨酸第191位点上通过特异引物引入突变,PCR扩增获得甘露聚糖酶的突变基因,B.subtilis WB800为表达载体,纯化相应的诱变蛋白,测定其酶活性及荧光光谱变化。结果三个色氨酸突变体蛋白[Man(W196H)、Man(W198H)、Man(W199H)和Man(W199A)]核的活性均有所下降,其中Man(W199H)突变体酶活力几乎丧失,为突变前的4%。Man(D91N)和Man(E191Q)的酶活力也分别降至突变前的10%和12%。结论W199、D91和E191是酶活性的必需基团,对其造成的突变对甘露聚糖酶的结构和活性有显著影响。     

井冈霉素产生菌的诱变选育及发酵条件优化

本研究以一株能产生井冈霉素的吸水链霉菌井冈变种(Strepto myces hyroscupicusvar.Jingganggensis yen)J1为研究对象,通过紫外线(Uv)及硫酸二乙酯(DES)两次诱变,经平皿初筛,摇瓶复筛,获得茵株j1-U-D,效价达25874×10-6g/mL,比出发菌株提高29%.菌株经过5次传代,代间效价差异不明显,遗传性能较稳定.通过单因素实验和正交实验分析研究了摇瓶产井冈霉素的最适发酵培养基,该茵的最适发酵培养基为(%):淀粉12%、酵母粉4%、KH2Po4o.05%、NaCl 0.15%.最适发酵条件为:发酵起始pH值7.2,接种量8%,发酵温度37℃,发酵时间96 h.茵株最终效价达30610×10-6/mL,比出发茵株提高53%.     

D-核糖高产菌株的选育

以枯草芽孢杆菌为出发菌,经紫外线诱变处理,选育出莽草酸营养缺陷型突变株Ｂｓ－０９,其发酵产物经物理和化学鉴定为Ｄ－核糖。经碳源和氮源试验发现,该菌株在葡萄糖或山梨糖为碳源,酵母粉或玉米浆为有机氮源,硫酸铵为无机氮源,碳氮比为６的发酵培养其中生长良好。     

高效溶栓菌株的筛选鉴定及发酵条件优化

采用酪蛋白平板法,从纳豆激酶胶囊、纳豆及多种发酵食品中筛选出了146株产溶栓酶菌株;然后利用纤维蛋白平板法比较发酵后溶栓酶活力,并从初筛菌株中筛选出1株溶栓酶活达1 637.6 IU/mL的高产菌株HT8;依据菌种形态和生理生化特征以及16S rRNA基因序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).在此基础上,对此高效溶栓菌株的液体培养条件进行了单因素初步实验,方差分析后设计正交试验L18(37),通过软件SPSS分析确定该菌最佳发酵条件为初始pH值8.0、温度40 ℃、培养体积90 mL(容量为500 mL的三角瓶装90 mL的培养液)、0.5％牛肉膏和2％大豆蛋白胨;优化后的相对酶活力达1 804.08 IU/mL.研究结果为进一步开发纳豆等保健食品提供理论基础.