重组工程法敲除恶臭假单胞菌KT2440的染色体基因

恶臭假单胞菌KT2440是在生物降解环境有机物和表达异源基因等方面具重要作用的环境微生物.基因敲除是研究基因和蛋白功能的必要手段.常规的基因敲除方法往往会烦琐耗时且易引入突变的基因克隆操作.本研究采用重组工程(即重组酶催化的PCR产物与基因组上同源片段之间的同源重组)来实现恶臭假单胞菌KT2440的基因敲除.本方法高效...     

利用Cre-LoxP重组系统构建gdh1基因敲除的酿酒酵母重组菌

基于PCR介导的基因敲除原理,采用Cre-LoxP重组系统技术,对2倍体酿酒酵母的SS04菌株的gdh1基因进行敲除操作,构建gdh1基因完全缺失型的酿酒酵母重组菌SS17菌株,进而为后续重组酵母的乙醇代谢研究打下基础.     

运动发酵单胞菌RecET重组系统的构建及应用

为了提高外源基因整合到染色体的效率,在已构建的运动发酵单胞菌-大肠杆菌穿梭载体基础上,构建了RecET表达质粒pSUZM3a-RecET.选取乙醇脱氢酶Ⅰ(adhA)基因作为靶基因,四环素抗性基因(Tcr)作为筛选标记基因,检测RecET重组系统在Z.mobilis中进行基因重组的可行性.将两端带有60bp adhA基因同源臂的四环素抗性基因片段电击转化含有RecET重组系统表达质粒的运动发酵单胞菌ZM4,获得adhA基因缺失突变菌株.对突变菌株adhA基因的PCR产物进行测序发现,adhA基因已被置换为四环素抗性基因.上述结果表明:RecET重组系统在运动发酵单胞菌中具有高效、便捷和可操作性,只需60bp同源臂即可完成同源重组.     

γ辐射致S1NPV的DNA链断裂研究

提出用琼脂糖凝胶电泳法，分剂量段进行两次电泳，再利用标准ＤＮＡ将各段连接的方法，在１～１００ｋＧｙ宽剂量范围，测定６０Ｃｏγ射线辐照后ＤＮＡ单链和双链断裂频率，得出ＤＮＡ链断裂频率与吸收剂量的关系．实验表明，ＳｌＮＰＶ病毒的ＤＮＡ链断裂γ辐射响应，可以用单靶一次击中和二次击中复合模型来描述．     

同源重组敲除三角褐指藻基因的研究

为探索应用基因敲除技术研究三角褐指藻基因功能的研究体系,本文以三角褐指藻甘油激酶基因作为靶基因,构建了同源重组基因敲除载体,利用微弹轰击法将该载体成功转化至三角褐指藻中,经100μg/mL Zeocin筛选和PCR验证获得了34个阳性转基因藻株;并进一步对三角褐指藻甘油激酶基因敲除转基因藻株的甘油激酶表达量和生长两方面进行分析,结果显示胞外甘油兼养不影响转基因藻细胞生长,甘油激酶不表达或表达量降低.本文通过构建敲除载体,完成了遗传转化,筛选获得阳性转基因藻,并进一步研究了转基因藻的性状,最终建立了应用同源重组基因敲除技术靶向研究三角褐指藻基因功能的研究体系.     

改造细菌基因组的双重选择系统的构建

对细菌基因的敲除与回补可以用于基因功能的研究和基因组的改造。传统的Red同源重组敲除系统依赖于抗性标记基因的正向选择,无法实现基因回补菌株的选择。文章通过构建具有独特优势的双重选择系统,将2种选择标记基因tetA和sacB构建到一个自杀质粒中,该质粒含有tetA-sacB双基因盒,可以利用该双基因盒的双重选择作用实现细菌基因组中基因的敲除与回补。结果表明：在敲除大肠杆菌MG1655中的lacZ基因时,利用构建的双重选择系统中tetA的抗生素耐药性成功筛选到阳性克隆;利用双重选择系统的反向选择作用,在含有镰刀菌酸和蔗糖的培养基上进行筛选,实现了lacZ基因的回补。     

石油工程专业实验室的合并重组

本文分析了目前实验室现状和存在的问题,针对性地提出了搞好实验教学工作的若干项措施,结合本专业实际简述了石油工程教学实验室合并与重组的实施及效果.     

基于翻转和删除形式的染色体完美重组

研究了基于翻转和删除形式的染色体完美重组问题,并给出了多项式算法。     

小链霉菌HCCB10043敲除硫酯酶基因的工程菌株构建及其代谢产物的研究

小链霉菌(Streptomyces parvus)HCCB10043的主要代谢产物为脂肽类化合物A21978C,其基因组序列中包括了非核糖体肽合成酶(NRPS non ribosomal peptide synthetase)、聚酮合酶(PKS polyketide synthases)以及NRPS-PKS混合的多酶体系基因簇,它们的共同特点是在代谢产物生物合成簇中连接有一个硫酯酶域,即TE(thioesterase)domain.硫酯酶可以使已经合成的化合物链的合成过程终止,并且具有水解释放成熟脂肽以及环化线性脂肽链的功能.通过对联二吡啶类代谢产物合成簇中TE基因的敲除构得工程菌株,工程菌发酵结果表明联二吡啶类代谢产物产量减少.     

熔融拉锥控制系统的改进

光纤耦合器是光纤系统中的一种重要无源器件，已广泛地应用于光纤通信网、光纤传感器以及相干光检测中，因此制造符合要求的、性能可靠的、大批量的光纤耦合器越来越受到人们的重视．为了减小加工过程中操作的不一致性，提高系统稳定性和产品成品率，在当前普遍采用的熔融拉锥控制系统的基础上，提出了两点改进方案，即通过增加张力传感装置和图像处理系统，使控制系统的自动化程度更高，从而进一步减少人为因素的影响．实际生产中的结果证明，采用改进后的控制系统，无论是加工标准耦合器还是保偏耦合器，在拥有较好参数的同时，还可以获得更高的成品率．     

减刑制度完善的思考

现行减刑制度存在与罪刑相适应理念冲突、裁定机构缺失、减刑标准不够细化、监督机构和配套制度不完善等问题,需要对减刑制度进行完善。调整减刑的对象范围、建立专门的审理庭和听证程序、加强人民检察院的监督职能以及公开案件过程,是时下应当考虑的完善措施。     

提升系统自动化改进与完善

面向国产提升系统，利用可编程控制器对国产提升机的电控系统进行自动化改进与完善。     

提高《电力系统分析》课堂教学质量的研究与实践

《电力系统分析》作为电力系统及其自动化专业的核心课程之一,存在理论抽象、教学难度大、学生不易掌握等多种问题。本文针对以上的各种问题,采取理论教学、动画演示、实物实验相结合的课堂讲解,从而使学生较为轻松的掌握该课程。     

论离婚损害赔偿制度的完善

离婚损害赔偿制度在适用过程中逐渐暴露出种种问题。应从赔偿请求权主体和赔偿义务主体如何界定、离婚损害赔偿制度适用情形规定的缺陷、离婚损害赔偿具体赔偿数额如何确定以及无过错方举证难度四个方面深入探讨该制度如何完善,以期为立法机关提供参考。     

有色噪声下FSK相干解调器性能的改善

鉴于ＦＳＫ在目前仍具有较高的实用价值,且存在着改进的余地,该文根据误码率的定义及其几何意义,给出了一种对传统ＦＳＫ相干解调器有色高斯噪声信道条件下的改进方法,导出了新解调器结构,并进行了理论分析与计算机仿真试验,其所获得的结果均证明该解调器在加性高斯白噪声信道条件下与传统ＦＳＫ相干解调器的误码性能相同;在ＡＣＧＮ信道条件下其误码性能优于传统ＦＳＫ相干解调器。     

传统蜂窝系统覆盖半径的提高

通过合理假设与范例分析,表明将软件无线电中通用的可扩展硬件平台应用于传统蜂窝通信网后,可以实现快速的越区切换,而且与传统的蜂窝系统相比,能够带来更低的中断率,提高系统的覆盖半径.     

3G移动通信中的安全改进

移动通信技术的发展，对系统的安全性能提出更高的要求。2G的安全技术已经不再满足人们对安全的需要，在对比2G与3G的安全技术的基础上，具体分析了3G系统在用户身份保密，用户认证与密钥协商以及数据完整性方面的改进，能与2G兼容，并保证了2G中的安全功能。     

水力循环澄清池的系统改进探讨

阐述了水力循环澄清池的作用原理及应用现状,针对水力循环澄清池存在的能耗大、反应时间过短、运行效率低且不稳定、泥渣回流难以控制、出力小等缺点,探讨了如何对其进行技术改造。     

论我国被执行人财产报告制度之完善

德国与韩国都将财产报告视为间接执行措施,二者的区别在于德国的财产报告属于补充性措施,而韩国则将财产报告制度视为一项独立的执行保障措施。就德国与韩国的立法模式而言,后者更具借鉴价值。首先,间接执行是通过对于被执行人施加心理上的不利益来发挥其震慑作用以实现执行目的的,较之直接执行的强制性而言,间接执行过程中被执行人有着权衡利弊作出选择的自由,因此间接强制更具尊重保护被执行人的价值。其次,将财产报告制度作为一个通常的程序来规定显然更有助于实现债权人的权利。当然,我们在将财产报告视为一项独立执行保障措施的同时,对该措施的具体适用也要保持审慎的态度,避免其滥用导致对被执行人财产隐私的侵犯。因此,必须完善相应的适用条件以及程序保障措施,在保护债权人的同时确保执行措施损害最小化。