人亲环素基因的克隆、表达及应用研究

亲环素(CyP)具有多种生物学功能,它是CsA的胞内受体,能和CsA特异结合;它又是人类免疫缺陷病毒(HIV)在细胞内复制的必要因子.研究首先从动物组织中提取、纯化CyP蛋白,并且克隆了CyPA基因,在Ecoli中获得高效表达.进而又克隆、表达了CyPB基因,进行了生物学活性测定,制备了CyP蛋白单克隆抗体和多抗,建立了多项检测方法.研制的CyP自身抗体及CsA血药浓度两种检测药盒已在临床应用,已取得良好的效益.     

Molecular imprinted polymer with positively charged assistant recognition polymer chains for adsorption/enrichment of low content target protein

Here, we introduce a new type of molecular imprinted polymer （MIP） with immobilized assistant recognition polymer chains （ARPCs） to create effective recognition sites and with bacterial cloned protein as template for adsorbing the low content target protein from cell extract. In this work, cloned pig cyclophilin 18 （pCyP18）, a peptidyl-prolyl cis/trans-isomerase, was used as template. The template protein was selectively assembled with ARPCs from their library, which consists of numerous limited length polymer chains with randomly distributed recognition sites of positively charged amino groups and immobilizing sites. These assemblies were adsorbed by porous microsphers and immobilized on them. After removing the template, binding sites complementary to the target protein in size, shape and the position of recognition groups were exposed, and their confirmation was preserved by the cross-linked structure. The synthesized MIP was used to adsorb the cellular pCyP18, and its proportional content was enriched more than hundred times. The extended experiment on imprinting bovine serum albumin （BSA） with ARPCs shows that this method is also suitable for large protein.     

人亲环素A单克隆抗体的制备及鉴定

制备人亲环素Ａ特异性单克隆抗体并鉴定其特性。方法：利用基因重组技术大量表达人亲环素Ａ蛋白,纯化后作为抗原免疫的ＢＡＢＬ／ｃ小鼠,经细胞融合和筛选,制备特异单克隆抗体。结果和结论;共建立三株稳定分泌抗人ＣｙＰＡ的杂交瘤细胞株,其所产生的单克隆抗体均为ＩｇＭ型,轻链为ｋ。     

小鼠腹水瘤巨噬细胞对大肠杆菌O157免疫应答的膜蛋白质组学研究

采用膜亚蛋白质组学方法研究小鼠腹水瘤巨噬细胞Raw 264.7对致病性大肠杆菌O157的免疫应答反应,筛选并鉴定到24个差异表达的膜蛋白质.这些膜蛋白质与细胞免疫、细胞周期、细胞发育、细胞骨架、细胞生长等有关.在蛋白质水平上对巨噬细胞与大肠杆菌间的相互作用关系进行了一些探索性研究,为进一步揭示机体对病原反应的作用机制提供理论基础.     

亲环素A抗原表位在三维结构中的初步定位

以抗人亲环素A单克隆抗体D4作捕获抗体，用噬菌体展示库鉴定出亲环素A模拟抗原表位的氨基酸序列为WSLQSFL，在亲环素A的一级结构中没有相同的序列，提示亲环素A抗原表位为构象型的，亲环素A的三维空间结构已测定，利用RasMol等蛋白质三维结构观察软件，可以初步确定亲环素A的抗原表位的时间位置，此抗原表位与环孢素的结合位点有重叠。     

解脂耶氏酵母yPPI基因的克隆与功能研究

用硫酸二甲酯诱变解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）野生型菌株，获得了不能在油酸作惟一碳源的培养基上生长的突变株.通过功能互补突变株在含油酸的培养基上的生长，从解脂耶氏酵母基因组文库中克隆了一个基因.同源性比较发现，该基因产物与广泛分布于各种生物体中的亲环素类的肽基脯氨酰顺反异构酶（PPI）有较高的同源性，因此将该基因命名为yPPI.电子显微镜下观察发现，yPPI基因突变株发生了一系列明显的结构变化，在其细胞核的周围出现了许多膜系结构，且细胞内没有过氧化物酶体.免疫荧光分析表明，yPPI基因突变细胞的过氧化物酶体基质蛋白能够正常地合成，但它们不是定位于过氧化物酶体内，而是均匀地分布于细胞质中.这些结果表明yPPI的存在与过氧化物体的形成和过氧化物酶体基质蛋白的正确定位有着密切的关系，证明了亲环素类肽基脯氨酰顺反异构酶对过氧化物酶体的生物合成作用.     

基于大肠杆菌蛋白质质谱鉴定的阳离子交换色谱优化研究

以大肠杆菌蛋白质的胰蛋白酶切产物为研究对象,对蛋白质的提取效率进行初步探讨,重点是对多维色谱分离中常用的强阳离子交换色谱的分离条件,包括缓冲液的种类、pH值,洗脱盐的种类、有机溶剂的比例以及上样量进行了考察和比较.结果表明:功率为400W,超声时间为15min,蛋白质的提取效率达到最高.在强阳离子交换色谱分离线性上样量范围内,10mmol/L磷酸二氢钾(pH=3.0)作为缓冲体系,在氯化钾溶液作为洗脱盐、流动相中乙腈的体积分数为30%的条件下进行梯度洗脱时,可获得最佳的分离结果.     

诸葛菜植物防御素基因克隆与原核表达研究

以从正在萌发的诸葛菜种子中提取总RNA反转录成的cDNA作为模板,进行PCR扩增,获得了160 bp的植物防御素cDNA片段.然后将该片段克隆到pMD18-T载体. 经测序后将片段酶切回收,再克隆到GTK原核表达载体中. 经0.1 mmol/L IPTG诱导表达,获得了与理论值相符的32 kD的融合蛋白质条带. 用GST单克隆抗体做第一抗体进行WesternBlot检测,获得阳性结果. 这为诸葛菜植物防御素基因功能的研究提供了基础.     

白光下拟南芥隐花素双突变体及其野生型的蛋白质组学比较分析

隐花素是植物的蓝光受体,在植物中调节多种光形态建成,包括抑制下胚轴的伸长、子叶的伸展和调节植物的开花时间等,但隐花素依赖蓝光调节光形态建成的分子机制仍然不清楚.采用双向凝胶电泳对生长在白光下的拟南芥隐花素双突变体及野生型的幼苗全蛋白进行分离,通过考马斯亮蓝染色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱.选取了55个差异蛋白质点采用MALDI-TOF-TOF-MS进行肽质谱指纹图分析,最终有33个蛋白质点得到了可靠鉴定.其中在crylcry2中相对于野生型下调的有9个蛋白,其他蛋白均表现为上调.这些在白光处理下差异表达的蛋白质主要是参与碳水化合物代谢、能量代谢、细胞组织结构、抵抗压力和解毒、蛋白质的折叠和细胞壁的形成等功能,而且亚细胞定位主要是在叶绿体和线粒体.对其中5个蛋白质点的基因进行了半定量RT-PCR分析,发现这几个蛋白质点的表达与基因的表达基本一致.这些分析结果表明光控制拟南芥的发育是通过共调节许多相关基因的表达而实现的.     

鸡、鸭卵蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳对比

以醋酸纤维素薄膜作为支持物所做的鸡、鸭蛋清的区带电泳结果表明,鸡蛋清中至少含有6种主要蛋白质,而鸭蛋清中仅发现有5种蛋白质,这些蛋白质的等电点均小于pH 8.6.     

季铵盐型双子表面活性剂18-4-18的合成

以十八烷基二甲基叔胺与1,4-二溴丁烷为原料合成季铵盐型双子表面活性剂18-4-18,并通过单因素法确定该反应的最佳工艺条件。由实验得出合成18-4-18的最佳反应条件为:反应温度70℃,将1,4-二溴丁烷加入到过量的十八烷基二甲基叔胺中,反应物摩尔比为n(十八烷基二甲基叔胺):n(1,4-二溴丁烷)=2.2:1,保温搅拌48 h,反应产率为75.6%。     

评九一八事变后数年间知识界的独裁论

"九一八"事变后,国内掀起了一场宪政运动的浪潮。与此同时,一些原本坚持民主宪政理念的知识分子却转而鼓吹独裁论。分析这一看似反常的论调的产生原因、主要内容及其结果,从一个方面揭示近代中国民主宪政进程的曲折经历。     

试论18世纪欧洲启蒙运动

提起启蒙运动,人们很自然地想起法国。事实上,18世纪的启蒙运动不只限于法国,而是一个遍及整个欧洲的思想解放运动。它的中心至少有两个,一个在法国,另一个在苏格兰。它们各自具有启蒙运动的若干特点和思想影响。     

同济18条

"如果对大学科技园定位不准确,就会陷入高科技园区发展的某些误区".在同济大学科技园大楼一赤峰路孵化基地,该大学科技园工作小组组长倪亚明副校长正激情规划科技园的蓝图.他表示,同济大学要依托同济大学的六大学科群(土木工程、海洋地质、环境科学与工程、城市建设与材料、机电与汽车、道路交通)和四大科技产业(工程信息、环保、机电与汽车、现代建筑)的优势,用不到两年的时间形成四个不同功能的科技园基地(赤峰路孵化基地、国康路创业基地、安亭汽车研发基地、南汇产业基地),为加速科技成果转化与产业化提供有利空间.     

18CrMnVB钢淬透性的研究

本文研究了硼含量、钛含量等对18CrMnVB钢淬透性的影响。实验结果表明,在硼含量达到0.002％,钛含量为0.025～0.075％范围时,18CrMnVB钢的淬透性及硼因子均高而稳定。