结核分枝杆菌Rv1009基因的克隆、表达及亲和层析纯化

克隆表达结核分枝杆菌Rv1009基因,序列测定正确后进行融合表达、纯化。采用聚合酶链反应（PCR）从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增了Rv1009编码基因,用限制性内切酶消化后插入到pGEM—Teasv中,序列测定正确后．再亚克隆到融合表达载体pPro—EX HT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rv1009蛋白,在变性条件下对目的蛋白进行纯化。获得了结核分枝杆菌H37Rv株Rv1009蛋白基因．得到融合6个组氨酸残基的Rv1009蛋白纯度大于80％。证实构建了结核分枝杆菌Rv1009基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白．为以后的深入研究奠定了基础．     

镍化磁性琼脂糖凝胶微球的制备及其在蛋白纯化中的应用研究

以自制磁性琼脂糖微球为基质,环氧氯丙烷为活化剂,亚氨基乙二酸作为螯合剂,制备了表面螯合Ni2＋的磁性凝胶微球（Mag—Agarose—Ni）．IR结果表明Ni2＋成功螯合到了磁性凝琼脂糖胶微球上;SEM结果显示在螯合Ni2＋后,Mag—Agarose-Ni形貌没有发生明显变化,且平均粒径为23btm;原子吸收光谱结果表明Mag—Agarose-Ni表面螫合的Ni2＋的量为2．12×10mol／mg;磁性能测试表明Mag—Agarose-Ni具有超顺磁性,其磁饱和强度为20．8emu／g,具有良好的磁响应性．将Mag—AgaroseNi用于六聚组氨酸融合蛋白K8的纯化研究,SDS-PAGE结果表明Mag—Agarose—Ni较市售Ni—NTA对K8具有更优的亲和分离效果,经15min的孵育后,Mag—Agarose—Ni对K8的吸附容量可达到8．8μg／mg．     

纯化组氨酸标签蛋白金属螯合亲和色谱填料的制备与性能

以琼脂糖（agarose）凝胶的珠状产品SepharoseC1—6B为基质，以环氧氯丙烷为活化剂，将天冬氨酸固定在琼脂糖凝胶微球上，在经与溴乙酸修饰后，最终得到含有羧甲基天冬氨酸结构的琼脂糖凝胶微球，以凝胶微球负载的多羧基为配体分别与Co^2＋及Ni^2＋配位分别得到两种金属螯合亲和层析介质．依照上述方法制备了具有不同负载羧基含量的色谱介质，以六聚组氨酸融合蛋白为分离样品，研究了所制备的色谱分离介质的分离纯化性能，并与商品化色谱分离介质Agarose—NTANi进行了比较．结果表明，目标介质蛋白结合容量大，与蛋白结合快、易洗脱、选择性高，金属离子不易脱落。     

泡沫镍/硅烷膜/ZnO复合材料的制备及其光催化性能

采用水热法制备氧化锌(ZnO)微球,并以水基硅烷膜为黏结层、以泡沫镍为基底负载ZnO微球,得到泡沫镍/硅烷膜/ZnO复合材料.采用扫描电子显微镜(SEM)对泡沫镍/硅烷膜/ZnO复合材料的表面微观形貌进行观察.同时研究经多次负载ZnO微球的复合材料和负载纳米二氧化钛(TiO2)的复合材料对甲基橙的光催化降解效果.研究结果表明:ZnO微球的粒径约为5 μm,表面由厚度约为10nm的多孔鳞片组成,水基硅烷膜厚度约为1 μm,与泡沫镍基体结合紧密,负载的ZnO微球部分嵌入硅烷膜.经一次负载ZnO微球的复合材料降解性能最佳,负载ZnO微球的复合材料对甲基橙的降解效果优于负载纳米TiO2的复合材料.     

GST和His标记的重组蛋白制备及吸附纳米ZnO的研究

以pET-28a(+)载体为模板人工设计引物,通过PCR反应扩增带有质粒上游6聚组氨酸(6×Histidine)序列的目的基因片段,克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,筛选及鉴定阳性重组子pGEX-His,转化E.coli BL21细胞后通过IPTG诱导表达.由谷胱甘肽(GST)和6聚组氨酸标记的重组蛋白GST-His得到表达,利用Ni-NTA系统进行纯化.通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析鉴定,由LC-MS/MS质谱分析确定所得蛋白为目标产物.通过蛋白结合纳米无机材料的亲和吸附实验结果证实,重组的新蛋白表现出对纳米ZnO特异吸附的生物活性.     

睾丸特异表达蛋白质RNF138的表达纯化及抗体制备

目的:制备RNF138的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA文库中扩增mRNF138的开放阅读框,并克隆至原核表达载体pET-30a中;将测序正确的pET-30a(+)/mRNF138重组质粒转化大肠杆菌Rosseta菌株,经IPTG诱导表达后通过镍离子螯合柱(Ni-NTA)...     

hCuZn-SOD基因的克隆、表达及其产物的初步纯化和表征

为获得hCuZn-SOD基因,根据GenBank中人铜锌超氧化物歧化酶(hCuZn-SOD)基因碱基序列,设计扩增引物,用RT-PCR方法从人的肝细胞中克隆出hCuZn-SODcDNA序列,并将它插入pUCm-T载体中,经过DNA序列测定证实,该片段序列的一个碱基发生突变(与报道基因相比),引起其编码第116个氨基酸由G变为D.采用定向克隆的方法将hCu Zn-SOD的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-2T上,构建表达质粒pGEX-SOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3).SDS-PAGE分析证实,经IPTG诱导,融合蛋白GST-SOD获得高效表达.破碎菌体、上清经谷胱甘肽亲和层析初步纯化后,得到纯度达90%的目的蛋白.活性实验表明,GST-SOD具有生物活性.     

钕离子对镍电沉积层择优取向及其性能的影响

对１．０ｍｏｌ／ＬＮｉＳＯ４，０．５ｍｏｌ／ＬＨ３ＢＯ３，１．１×１０－３ｍｏｌ／ＬＮｄＣｌ３体系，在宽电位范围内，控制电位沉积可得到高择优取向镍沉积层，控制电位为－１．２５Ｖ，沉积９０ｍｉｎ，得到高择优取向（２２０）镍沉积层，对该镍沉积层的织构度采用Ｘ射线衍射进行测定，其织构度ＴＣ２２０为９４％，测定了高择优取向（２２０）镍沉积层在１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液中的析氢电催化性能，与多晶镍电极相比具有良好的电催化活性，使析氢过电位降低，交换电流密度提高．     

海藻酸钠微球制备工艺优化及其对球形及粒径的影响

选用相容性好、无毒且可降解的海藻酸钠作为基质材料,采用W/O乳化-离子交联法制备海藻酸钠微球。考察了内外部固化方法、油/水相体积比、乳化剂用量、搅拌速度以及海藻酸钠溶液质量分数等主要工艺参数对微球形貌、粒径大小及分布的影响,从而确定较为理想的微球制备工艺。实验结果显示,当油/水相体积比1∶1、乳化剂用量为6滴司盘-80和2滴吐温-80、搅拌速度500 r/min、海藻酸钠溶液质量分数为2%以及使用外部固化法时,制备得到的海藻酸钠微球球形度较好,粒径分布较窄,主要在7μm~40μm范围内,其在水中分散性良好。在所有工艺条件中,水相中海藻酸钠的质量分数对微球粒径和分散性起主要作用。     

谷胱甘肽亲和层析介质的制备条件及其层析特性研究

以琼脂糖凝胶4FF(Sepharose 4 Fast Flow)为基质,1,4-丁二醇二缩水甘油醚(BDGE)为活化剂,通过活化、偶联谷胱甘肽(GSH),得到GSH亲和层析介质.实验结果表明:活化及偶联的优化条件为10,m L基质加入0.42,g Na OH、15,m L二甲基亚砜(DMSO)、15,m L BDGE,反应温度为40,℃,反应时间为6,h;偶联溶液p H 6.5,反应温度为37,℃,反应时间为24,h.在此条件下,环氧基修饰密度可达60~65,μmol/m L;所制备的介质载量为(14.19±0.98)mg/m L.以此介质对谷胱甘肽S–转移酶(GST)、融合蛋白GST-Bcl-2、GST-Ald、GST-PTPN12进行纯化,结果表明,该介质纯化效果较好、载量高、稳定性能较好,可重复使用.     

新型固定金属离子亲和吸附剂的制备及对蛋白质的吸附研究

以β-环糊精(β-CD)键合硅胶为载体,亚氨基二乙酸(IDA)为螯合基,制备了新型固定金属离子亲和吸附剂.通过13C固体核磁、元素分析对其进行了表征.研究了吸附剂对牛血清蛋白(BSA)的吸附特性,25℃时吸附剂对BSA的最大吸附量达35 mg/g吸附剂.     

耐盐性层析吸附剂的制备及性能

以再生纤维素钛白粉复合微球作层析基质,经环氧活化后实施两步功能基化反应,同时引入疏水基团和离子交换基团,制备了一种耐盐性层析吸附剂。其蛋白质吸附性能研究表明:吸附剂的吸附能力不依赖于盐浓度,对含有0.25 m o l/L N aC l的蛋白质溶液的平衡吸附容量分别为:牛血清白蛋白27 m g/mL,溶菌酶40 m g/mL。     

一种负载型重金属离子富集剂的制备及初步应用

将邻菲口罗啉吸附负载于６０～８０目活性碳上，制成金属离子富集剂。在ｐＨ＝４时，富集剂对Ｐｂ２＋，Ｃｕ２＋，Ｃｄ２＋，Ｚｎ２＋，Ｃｒ３＋５种金属离子的吸附量分别为４４，２４，１６，１２，１０ｍｇ／ｇ。富集废水中Ｐｂ２＋时的加标回收率为８７％～９１％。     

固定化金属螯合亲和膜制备及其性能研究

将纤维素滤纸经碱处理,环氧活化,配基偶联和固定化Cu2 后制得了大 孔纤维素亲和膜,检验了亲和膜的流速与负压,等温吸附,保存方法及使用次数等亲和膜性能指标,设计了一种解决金属离子泄漏问题的新方法,得到的结果明显优于传统的凝胶柱,以上结果表明,普通纤维素滤纸可以制成性能优良的亲和膜色谱介质。     

固相红细胞凝集素（E—PHA）的制备及其应用

用江苏莱豆(Phaseolus vulgaris)E-PHA制备固相吸附剂。交联率87.7%。交联E-PHA量为0.59mg/cm~3胶,与肝癌血清γ-GT天冬酰胺连接的低聚糖的亲和反应,类似于进口同类产品。     

腐植酸钠复合吸附剂的制备及其脱硫性能

采用浸渍法,制得腐植酸钠/氧化铝复合脱硫剂,研究其负载氨水前后的脱硫性能.利用傅里叶红外变换光谱仪、扫描电镜、X射线能谱仪、X射线衍射仪对吸附剂样品的表面成分和结构、晶相组成进行了分析.结果表明,负载腐植酸钠后,在氧化铝纤维表面会形成一层腐植酸钠膜,可以提高载体氧化铝的脱硫性能.腐植酸钠/氧化铝浸渍氨水后,腐植酸钠膜在脱硫过程中起重要作用,对氨水有较强的吸附和保持力,可以减少氨损,长时间保持较高的SO2转化率.脱硫后的产物可以从氧化铝上洗脱,制成以硫酸氨、腐植酸铵、腐植酸钠为主要成分的复合肥,同时氧化铝纤维也可实现循环使用.     

活性碳纤维的制备及其吸附性

耐熔性沥清基纤维经过碳化处理后,在一定温度下的CO_2气流中进行活化处理,得到的活性碳纤维具有良好的吸附性和再生性。     

GD-46大网格聚合物吸附剂的研制和应用

本文介绍苯乙烯-二乙烯苯系列非极性大网格聚合物吸附剂GD-46的合成规律、物理性能、它对赤霉素(920)、螺旋霉素等生物活性物质的吸附能力。结果表明,吸附能力比日本的Diaion HP-20高4%(静态吸附容量)和10.5%(动态吸附容量),在选择性吸附性能上也优越。为吸附法提取有关生物活性物质(赤霉素、螺旋霉素等)提供了优良分离介质。     

3,4-(二丁基锡)二氧基苯甲醛与苯胺希夫碱的合成及表征

３，４－二羟基苯甲醛与二丁基氧化锡反应制备了新化合物３，４－（二丁基锡）二氧基苯甲醛，后者与芳伯胺缩合，合成了４种未见文献报道的希夫碱，通过元素分析、ＩＲ以及１ＨＮＭＲ进行了表征