酶与有机溶剂

本文阐述了酶在有机溶剂中存在的两种形式:通过表面活性剂聚集体在有机溶剂中的溶解和直接以固态酶的形式悬浮于有机溶剂中.讨论了反胶团(或w/o微乳浊液)系统在酶促反应、选择性提取蛋白质等领域的应用和固态酶悬浮于有机溶剂中的性质和特点,并展望了这些系统的发展前景.     

超滤法纯化超氧物岐化酶

研制了适合纯化猪血超氧物岐化酶(Cu.Zn-SOD)溶液的醋酸纤维素(CA)超滤膜,其截留分子量约为16 000。研究了溶液浓度、操作压力等因素对通量的影响。结果表明,自制CA膜超滤纯化SOD溶液性能优于一些市售膜。收率为86～89%,比活提高25%,纯化因子1.35。利用透析过滤法,基本上能除去溶液中游离铜离子。     

CNTs-ZAO复合粉体的制备及表征

以HCl溶液和H2SO4-HNO3的混合酸溶液作为纯化强酸溶液,采用强酸氧化法纯化碳纳米管(CNTs)。将纯化后的CNTs加入到ZnO-Al2O3(ZAO)前驱体溶液中,通过均匀沉淀法,制得CNTs-ZAO复合粉体。采用差示扫描量热仪(TG-DSC)、傅里叶红外光谱仪(FT-IR)、X线衍射仪(XRD)和扫描电子显微镜(SEM)表征纯化前后CNTs和CNTs-ZAO复合粉体。结果表明:在80℃、V(H2SO4)∶V(HNO3)=1∶1的条件下,水浴纯化反应2 h,得到纯化效果较好的CNTs。在n(CNTs)∶n(ZAO)=4∶1、ZAO前驱体反应30 min之前加入纯化CNTs,CNTs的表面负载上一层均匀、致密的纳米ZAO颗粒。     

碱性蛋白酶交联酶晶体的制备及稳定性

研究了用透析平衡法制备碱性蛋白酶晶体的过程,在硫酸铵饱和度为２５％的条件下获得了符合要求的碱性蛋白酶晶体,然后采用戊二醛进行交联,制备出了交联酶晶体,并对其在高酸碱度、高温、有机溶剂或有机溶液中的稳定性进行了研究．实验结果表明,交联酶晶体有较高的稳定性．     

猪肝线粒体F1-ATP合酶的提取及检测方法

采用超声和差速离心方法,研究了猪肝线粒体ATP合酶水溶性部分(F1-ATP合酶)的提取及检测方法.对初始提取液和纯化后的溶液分别进行酶比活力测量,并对常规聚丙烯酰胺电泳后的胶条进行胶内活性检测.结果表明,纯化后的F1-ATP合酶水解ATP比活力显著提高.     

水溶性有机介质中漆树酶催化氧化对茴香胺

采用分光光度法,考察不同水／水溶性有机溶剂体系中漆树酶的催化氧化性能,以及影响反应的因素．研究结果表明,漆树酶在醇溶剂中的活性要强于在非醇溶剂中,醇分子中羟基数量对漆树酶活性也有影响．在温度45℃,pH值为7．5,体积比为1：1的水／丙三醇溶液中,漆树酶的活力最高,活力比达150％以上,超出漆树酶在纯水中的活性．以漆树酶催化氧化对茴香胺,采用TLC和HPLC分离纯化反应产物．根据光谱分析法,鉴定主要产物为偶氮茴香醚．     

水-有机混合介质中电流型生物传感器对葡萄糖的响应

利用自组装单分子层(SAMs)/普鲁士蓝(PB)/壳聚糖(Chit)界面固定葡萄糖氧化酶(GOD),构建酶生物传感器,对传感器在极性非质子有机溶剂如乙腈(AN)、二甲基亚砜(DMSO)和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)存在条件下的电化学特性进行了研究,考察了有机溶剂体积分数对传感器响应的影响。结果表明,传感器在50%(体积分数)AN中的电流响应可达到磷酸缓冲溶液(PBS)中的73%。传感器响应速度快、重现性好、抗干扰能力强,展现了高的灵敏度(57.3mA.M.cm-2)。该传感器用于血清标本中葡萄糖的检测,测定结果与市售葡萄糖酶光度测定试剂盒测定结果相吻合。     

藿香中广藿香酮的分离及鉴定

利用有机溶剂甲醇从植物藿香的茎、叶中提取广藿香挥发油，经柱层析分离、纯化再利用碱性溶液萃取后。经TLC检测、紫外光谱分析、红外光谱分析，结果与有关文献报道的广藿香酮(Dhelwangind)的各种特性基本一致．     

长毛对虾磷酸酯酶的研究

从长毛对虾(Penaeuspenicillatus)头胸部、肌肉分别提取纯化碱性磷酸酶ALPase(EC．3．1．3．1)和酸性磷酸酶ACPase(EC．3．1．3．2),经快速蛋白液相色谱(FPLC)检测AL-Pase,聚丙烯酰胺凝胶电泳以及等电聚焦电泳检测ACPase,得到单一纯酶．ALPase紫外特征吸收峰在278nm处,荧光激发峰在282nm处,发射光谱特征峰在340nm处．ACPase在280nm处有紫外吸收特征峰,荧光激发峰在284nm处,发射峰在347nm处．分别测定了酶的相对分子质量、亚基数、氨基酸组成、等电点、酶水解对硝基苯磷酸二钠(pNPP)的最适温度,最适pH,米氏常数Km值,金属离子Mg2+、Cu2+、Hg2+,有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇,化学修饰剂BrAe、NBS、pCMB等以及蛋白质变性剂胍、脲等对酶活力的影响．比较研究健康虾和病虾ACPase酶活力及酶动力学特征常数的变化(健康虾酶Km=0．08mmol／L,病虾酶Km=0．143mmol／L)．病虾酶Km值明显增大,表现对底物亲和力下降．活化能明显增大(健康虾酶41．03kJ     

乳酸杆菌中单宁酶基因的克隆、表达与纯化

利用基因工程的方法从乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum ATCC14917T)中克隆单宁酶基因,构建重组表达载体pNIC28-Bsa4-tanLpl,转化大肠杆菌(BL21-DE3)进行表达,并对单宁酶进行了纯化及简单的性质测定.亲和层析纯化后单宁酶产量大约为80 mg/L菌液,SDS-PAGE分析在50 kD处有单一的目的条带,用五倍子酸甲酯作为酶的底物对单宁酶性质的研究显示该酶在温度为30℃,pH为8的条件下活性最高(390 U/mg).     

铀的离子交换反应——Ⅵ.在 HCI—有机溶剂混合介质中U(Ⅳ)在强碱性阴离子交换树脂与溶液之间的分配

本文对 U(Ⅵ)在201×7强碱性阴离子交换树脂与 HCI—乙醇、HCl—丙酮混合质介之间的分配进行了研究,测定了 U(Ⅳ)的分配比及 HCl 的非交换吸入;测定了达到交换平衡后树脂相及溶液相的可见吸收光谱.结果表明,分配比随着溶液中有机溶剂的含量及 HCl 的浓度增加而增加,随着 U(Ⅳ)的浓度增加而减小:HCl 的非交换吸入随着溶液中其浓度的升高而增加.随着溶液中有机溶剂的含量及 U(Ⅳ)的浓度增加而减少;证明,在此混合介质中.U(Ⅳ)在溶液相和树脂相中的化学状态,与其在纯的 HCl 水溶液介质条件下的相同.     

有机溶剂胁迫下苦草生理指标的变化

该文研究实验培养的沉水植物苦草分别暴露于1mL有机溶剂乙醇、丙酮、二甲基甲酰胺、二甲亚砜和石油醚下的生长状况,并测定了植物叶片的叶绿素含量、可溶性蛋白含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)等生理生化指标.分析结果表明,五种有机溶剂对苦草生长和生理过程均可产生胁迫作用,其中乙醇、二甲基甲酰胺、丙酮影响大,短期内可以造成植物叶片变黄或变黑,叶绿素和可溶性蛋白含量急剧下降,石油醚次之,二甲亚砜影响最小.在有机溶剂胁迫下,苦草自身的防御酶系统可产生相应抗性,从抗氧化酶的活性大小来看,丙酮处理样最高,乙醇处理样最低.研究结果表明,有机溶剂对苦草的作用与有机溶剂的种类以及性质有一紧密联系.     

链霉菌G-HD-4产黑色素的提取及理化性质

对链霉菌G-HD-4发酵液采用酸沉淀、碱性溶液提取、酸水解,以及多种有机溶剂抽提等工艺手段分离、纯化出黑色素,研究其理化性质.结果表明,该黑色素的最大吸收峰为246 nm,与标准黑色素最大吸收峰相一致.在400 nm波长下,其光密度值(D)随黑色素质量浓度的增加而增大;容易被强氧化剂所氧化,而紫外、光照、温度、有机溶剂、还原剂、各种盐,以及金属离子对黑色素的影响较小,氨基酸、淀粉等添加物对黑色素稳定性没有影响,说明该黑色素稳定性良好.     

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶的分离纯化及部分性质研究

中国黑白花优良种公牛精子透明质酸酶经硫酸铵分级沉淀和 Sephadex 柱层析分离纯化,得到一个电泳纯品,活力纯化40倍.用 sephadexG-150凝胶过滤和 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为65000.该酶的最适 pH 为3.5～4.5,最适温度为37℃～45℃,在室温下较稳定,用 Limeweaver-Burk 作图法求得 Km 值为6.06×10~(-4)mol/L.     

新型脂肪酶LipB52催化生物柴油

一种来源于荧光假单胞菌的新型脂肪酶基因lipB52在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,并且利用Ni-NTA亲和柱时脂肪酶LipB52进行纯化.采用固定化脂肪酶LipB52催化大豆油与甲醇的转酯反应生产生物柴油.实验考察了温度、底物摩尔比、酶用量、有机溶剂、酶的种类以及油的类型对于反应的影响,结果表明:转酯反应的最佳反应条件为:m(酶):m(油)=20:80,n(油):n(甲醇)=1:4、正庚烷作为溶剂、反应温度为30℃,在此条件下脂肪酶LipB52表现出很高的催化活性,反应40 h后甲酯的产率高达92%.     

苯偶酰的无溶剂催化反应合成及结构研究

采用FeC13.6H2O为催化剂,在无溶剂条件下,通过催化反应氧化苯偶姻合成苯偶酰。用红外光谱(IR)、元素分析、质谱和核磁共振谱(NMR)等手段对产物进行了表征和分析。结果表明,该方法与传统的溶液法相比较,具有无有机溶剂污染、反应速度快、反应产物易于分离、产率高和后处理简单等优点。     

果菠萝蛋白酶在有机溶剂中的变性与失活动力学的研究

测得果菠萝蛋白酶是由单亚基组成,分子量约为30k,pl为4.6,每个酶分子含一个游离疏基和二个硫硫键,甲醇、乙醇、乙二醇对酶活力有明显的抑制作用,甲醇、乙醇表现为非竞争性,乙二醇为竞争性,其抑制常数分别为:20％、16.5％和11％。在有机溶剂作用下,监测荧光(332nm)强度随时间的变化过程,作为变性的指标,测定酶在不同浓度有机溶剂中的变性动力学,并按邹氏法测定酶的失活动力学,对酶构象及催化活力关系进行比较,酶的失活速度大于变性速度,说明酶活性中心处于对有机溶剂较敏感的区域,酶的变性与失活过程均可分为快、慢两相的一级反应,这意味着可能存在着部分活力的中间态。     

两种分离纯化介质对虾肝肠胞虫孢子发芽率的影响

【目的】比较蔗糖和Percoll两种不同介质的密度梯度离心分离纯化虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)孢子的效果及对EHP孢子发芽活力的影响。【方法】取感染EHP的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺充分研磨,经3次差速离心后,设置介质质量分数为30%,60%,90%的梯度,分别进行蔗糖和Percoll密度梯度离心,比较两种介质不同分层中EHP孢子的数量和纯化效果。纯化样品分别用0.1mol·L~(-1)的KOH溶液、0.15mol·L~(-1)的HCl溶液、0.15mol·L~(-1)的NaOH溶液、0.025mol·L~(-1) pH为11.5的磷酸盐缓冲液、0.05mol·L~(-1) pH为8.8的TrisHCl溶液、0.01mol·L~(-1) pH为4.8的柠檬酸盐缓冲液等6种溶液于28℃孵育30min,比较EHP孢子的发芽率。【结果】蔗糖密度梯度离心后EHP孢子主要分布在蔗糖质量分数为90%层的底层,数量为1.53×108个。Percoll密度梯度离心后EHP孢子主要分布在Percoll质量分数为90%层的下层,数量为2.64×107个。经Percoll或蔗糖密度梯度离心分离纯化的EHP孢子再经上述6种不同溶液处理后,孢子发芽率存在差异;经0.1mol·L~(-1)的KOH溶液或0.05mol·L~(-1)pH为8.8的Tris-HCl溶液诱导时,两种介质分离纯化所得的EHP孢子发芽率之间差异具有统计学意义(p0.05)。【结论】以介质质量分数为30%,60%,90%的梯度对EHP孢子进行密度梯度离心,蔗糖的分离纯化效果比Percoll更好,对EHP孢子的发芽率影响更小;经蔗糖或Percoll分离纯化的EHP孢子再经0.05mol·L~(-1) pH为8.8的Tris-HCl溶液或0.025mol·L~(-1) pH为11.5的磷酸盐缓冲液处理,可获得较高的发芽率。     

厌氧条件下扁藻破碎方法及其对氢酶活性的影响

为了分离纯化亚心型扁藻(Platymonas subcordiformis)体内的可溶性氢酶,研究了在厌氧环境下藻细胞的破碎方法,以及各种破碎条件对氢酶活性的影响.实验结果表明,使用超声法在输出功率为400 W、超声为5 S、间歇为10 S、工作20次的条件下,破碎细胞后溶液中总蛋白含量最高,可达2.73 g/L珠磨法和体积分数为0.2%的Triton X-100法破碎的鲜细胞的氢酶提取效率较高,分别为1.44 U/g和1.27 U/g,其中使用Triton X-100法破碎后的粗提液所含其他蛋白的种类较少.实验的最终目的是获得足够量的氢酶进行下一步纯化,因此Triton X-100法是最合适的方法.     

粘质赛氏杆菌色素的研究

用有机溶剂从粘质赛氏杆菌(Serratia marcescens Bizio)中分离纯化出一种红色素。该色素经紫外光谱、红外光谱、元素分析及其它测试,表明其为含羧基的共轭多烯烃化合物,属于类胡萝卜素色素,化学式为C_(20)H_(32)O_2。它微溶于水,易溶于醇、醚等有机溶剂,对热稳定,对光敏感。金属离子、防腐剂对它无不良影响。