拟穴青蟹抗菌肽CrusSp基因克隆表达及抑菌活性分析

从拟穴青蟹血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增编码CrusSp成熟肽的cDNA序列,克隆至pET-32a(+)表达载体中,转化至王coli OrigamiTM(DE3)中表达CrusSp蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化获得CrusSp蛋白,表达出的CrusSp蛋白相对分子量约10.27 ku,等电点为8.54,滤纸片扩散法结果显示CrusSp蛋白抑制绿色木霉.     

粉纹夜蛾离体细胞抗菌肽的诱导和抗菌活性测定

以每细胞１０００个灭活的大肠杆菌诱导粉纹夜蛾传代细胞，诱导细胞的上清液经三氧醋酸沉淀的取诱蛋白，抗菌活性用液体培养抑制测定法进行检测，试验证明，细胞诱导后第８ｈ开始产生抗菌物质，第１２ｈ达最高峰，提取的抗菌物质经１００℃处理４ｈ保持抗菌活性。     

拟穴青蟹CrusSp的克隆表达纯化及抑菌活性测定

从拟穴青蟹血淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增编码CrusSp成熟肽的cDNA序列,将其克隆至pMD18-T载体进行扩增,然后克隆至pET-32a(+)表达载体中,转化至E.coli OrigamiTM(DE3)中表达CrusSp蛋白,通过Ni2+亲和层析柱纯化获得CrusSp蛋白,表达出的CrusSp蛋白分子量约10.27 kDa,等电点为8.54,采用滤纸片扩散法检测该蛋白的抑菌活性.滤纸片扩散法显示CrusSp蛋白对绿色木霉具有抑制活性.     

两种杂合抗菌肽在毕赤酵母中的表达及活性测定

参照毕赤巴斯德酵母(Pichia pastoris)的偏好密码子,改造克隆杂合抗菌肽CA(1～7)M(4～11)和CB(1～7)M(4～11)基因,将改造后的基因克隆到pPICZα-A 载体中,构建分泌型表达载体pPICZα-A-CAM和pPICZα-A-CBM,转化宿主菌Pichia pastoris X-33,在甲醇的诱导下进行表达.实验结果表明,杂合抗菌肽获得表达,两种表达产物具有明显的抗菌活性.此外,本文还比较了二者的抗菌谱,分析了杂合肽的性质,优化了酵母电转化条件.     

几种离体动物细胞抗菌肽的诱导及抗菌活性的初步研究

分别选取几种离体培养的昆虫细胞、哺乳动物细胞和肿瘤细胞,用热灭活的大肠杆菌DH5a诱导细胞产生抗菌肽,诱导的上清液经三氯乙酸沉淀提取诱导蛋白,采取抑菌圈法测定其抗菌活性．对从不同种细胞中诱导产生的抗菌肽的抗菌活性进行比较,发现581、SF-9、Vero、293、PK-15和IBRS-2细胞均能产生抗菌活性物质,其中Vero细胞产生的抗菌肽活性最强．经Tricine—SDS—PAGE、银染后发现,各种细胞产生的抗菌肽分子量为7000左右．     

猪小肠抗菌肽的提取及部分生物学活性研究

将新鲜猪小肠超声破碎,经高温处理、乙酸浸提后,再经Sephadex G100和Sephadex G25凝胶柱过滤层析,收集各组分并用琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性。收集具有抗菌活性的组分,经Tricine SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色后分析为一条蛋白带,分子量约为5972Da左右,得到电泳纯的猪小肠抗菌肽。该抗菌肽对大肠杆菌C84008株、金黄色葡萄球菌ATCC25923株、绿脓杆菌ATCC27853株均表现出较强的抗菌活性;并能灭活鸡传染性支气管炎病毒。     

苦楝的提取及其抑菌活性研究

采用超声波技术提取苦楝的有效成分；琼脂稀释法测得苦楝对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度(MIC)，分别为30mg／mL，7．5mg／mL，7．5mg／mL，最小杀菌浓度(MBC)分别为30mg／mL，15mg／mL，15mg／mL；用抑菌圈和抑菌百分率分别对不同浓度的苦楝对受试菌的抑制作用进行了比较。结果表明苦楝是一种理想的抑菌剂。     

KGM的乙醇沉淀法提取及体外抑菌活性

以魔芋粉为原料,研究其葡甘露聚糖(KGM)的乙醇沉淀法提取条件与抑菌活性.采用单因素实验探讨魔芋粉料液比、调浆温度、乙醇(沉淀剂)体积分数和洗涤次数对KGM得率的影响,通过正交试验得出最佳提取条件.用试管二倍梯度稀释法分析KGM的体外抑菌活性.结果表明,提取KGM的最优条件为料液比1∶175(g∶mL)、调浆温度60℃、乙醇体积分数50%、洗涤2次,得率高达65.7%.KGM提取物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌表现出一定的抑菌效果,可广泛应用于医药与食品工业.     

α-螺旋抗菌肽YHX-1的从头设计及抑菌活性研究

抗菌肽因其高效的抗菌活性和独特的抗菌机制,不仅可作为生物防腐剂预防食品加工贮藏中的微生物腐败,还有望缓解抗生素滥用引起的耐药性问题。为得到一种高效安全的新型抗菌肽,以现有抗菌肽数据库为基础,确定优化了新型抗菌肽的序列长度、电荷数、氨基酸组成,并结合生物信息学预测及分析工具,从头设计得到了序列为GKLLSKLLKKLLK的新型抗菌肽YHX-1;通过琼脂扩散法、最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度及杀菌动力学曲线评价了其对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌活性,并进一步测定了YHX-1在盐离子、血浆和微酸性环境中的稳定性、二级结构、溶血活性及细胞毒性。结果表明:YHX-1对6株指示菌均有良好抑菌活性,其中对单增李斯特菌和鼠伤寒沙门氏菌的MIC为4μg/mL,在2h内对单增李斯特菌的致死率为99.99%。YHX-1在盐离子(200mmol/L Na⁺、2mmol/L Ca²⁺)和10%~25%血浆环境中均表现出一定的敏感性,MIC增至原来的2~8倍,而微酸性环境(pH值5.4~7.4)对YHX-1的MIC不会产生显著影响。圆二色光谱表明,YHX-1在细胞膜模拟环境中呈现典型的α-螺旋构象。溶血活性和细胞毒性实验表明,YHX-1具有较好的细胞选择性。YHX-1不仅抑菌谱广、抑菌活性明显,而且具有良好的安全性,有望作为新型抗菌剂应用于食品防腐保鲜,其从头设计策略旨在为新型抗菌肽的发掘提供参考。     

新疆天仙子总黄酮的提取及抑菌活性研究

文章用不同浓度的乙醇作为浸提剂,对药用植物新疆天仙子茎段部分的总黄酮成分进行分离提取,并运用分光光度法对总黄酮进行了含量测定。实验结果表明,温度在40℃,量液比为1:10之下,用70%乙醇浸泡2小时左右能对总黄酮有较理想的提取(1.32%)。滤纸片扩散法进行的抑菌试验结果显示,新疆天仙子的总黄酮提取物对大肠杆菌具有一定的抑菌活性(抑菌圈直径12.5mm),而对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌和短小杆菌没有表现出明显的抑菌作用。     

9种金属离子对黄粉虫纤维素酶活性及其生长发育的影响

研究了9种金属离子对黄粉虫纤维素酶活性及幼虫生长发育的影响,在外源性金属离子对纤维素酶活性的影响上,Fe2+对黄粉虫纤维素酶的活性表现出了激活作用,Mg2+在高浓度下对纤维素酶表现出了一定的抑制性.其余各种金属离子对纤维素酶的活性全部表现为抑制作用,其中以Hg2+的抑制作用最强,即使在最低的浓度下也能表现出很强的抑制效果.不同金属离子对黄粉虫的生长表现出同对纤维素酶活性的影响相似的作用.     

兔圆小囊组织中抗菌肽类物质的分离纯化及抗菌活性研究

成年健康家兔,经腹腔注射猪大肠杆菌刺激后,取圆小囊组织以捣碎机捣碎,沸水浴处理后,以5％乙酸提取,调整pH值后,经SephadexG100凝胶柱过滤层析,收集各组分并用琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性,获得纯化的抗菌肽类物质。纯化物经Tricine SDS-PAGE,银染后分析为一条蛋白带,分子量约为7000Da左右,经超滤分析,纯化物的分子量大于3000Da。抗菌肽粗提物和纯化物经体外抗菌实验,对大肠杆菌（078）、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均表现出较强的抗菌活性。     

黄粉虫桃酥的工艺配方

以传统桃酥配方为基础加入黄粉虫脱脂粉,通过对不同原料配比的研究,使桃酥形态、色泽、组织状态、滋味各指标最佳,以丰富桃酥品种。试验时以感官评分为评价指标,主要考虑黄粉虫添加量、水的添加量、糖的添加量、烤箱温度对桃酥品质的影响,在单因素试验的基础上采用正交分析的方法,确定最佳工艺配方：面粉量为900 g,黄粉虫脱脂粉添加量100 g,水的添加量110 g,白糖400 g,植物油450 g,膨松剂20 g（碳酸氢钠8 g,碳酸氢铵12 g）,烤箱温度180/150℃（面火/底火）。     

黄粉虫的营养保健作用

为了解黄粉虫油脂和去油虫渣的营养保健作用,将黄粉虫油脂和去油虫渣掺入饲料,饲喂初成年的ICR小鼠,测定了其对小鼠的学习记忆能力和抗疲劳能力的影响;同时研究了黄粉虫全虫干粉对皮下注射了D-半乳糖致衰老模型小鼠的影响。结果表明:分离后的黄粉虫油脂和油渣均能提高小鼠的抗疲劳能力;但仅黄粉虫油渣可促进其学习能力。饲料中掺入黄粉虫幼虫干粉,使其在饲料中的质量分数为0.05和0.10,可抑制D-半乳糖致衰老小鼠体重的降低,显著提高其脾脏和胸腺的脏器重量,增强免疫力;但对血清抗氧化能力无明显的改善作用。     

黄粉虫抗冻蛋白基因TmAFP84的克隆和序列分析

对黄粉虫抗冻蛋白(AFPs)基因进行RT-PCR扩增后,构建克隆重组质粒pUCm-T-TmAFP84,经双酶切、PCR和测序鉴定,克隆出了与GenBank中公布的编码84个氨基酸基因(注册号AF159114)基本相一致的抗冻蛋白基因TmAFP84,其同源性高达98.81%.与其他编码84个氨基酸的抗冻蛋白基因的同源性为95.92%.进而构建了表达重组质粒pMAL-p2X-TmAFP84.     

黄色型黄粉虫不同发育时期酯酶和过氧化物酶同工酶的比较

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对黄色型黄粉虫的不同发育时期各虫态进行了酯酶和过氧化物酶同工酶的比较.结果表明：黄粉虫各种虫态的酯酶和过氧化物酶同工酶有着较大的差异,而在同一虫态的酯酶和过氧化物酶同工酶也有所不同.     

人工合成绿蝇防御素及其活性研究

采用人工合成的方法研究绿蝇防御索（phormicin A）对细胞及肿瘤作用效果，实验结果发现，人工合成的绿蝇防御素可以在较低浓度下抑制革兰氏阳性菌的生长（MIC＝5－75μg/mL），其中以金黄色葡萄球菌的反应最为敏感，MIC为5μg/mL，而且当人工合成的绿蝇防御素浓度升至300μg/mL时可以抑制大肠杆菌的生长，但无法抑制绿脓杆菌的生长，此外，它还能抑制MDA435乳腺癌细胞及TSU前列腺癌细胞的体外增殖，抑制率分别为22．21％（P＜0．05）和35．53％（P＜0．01）。     

林蛙皮抗菌肽的纯化

从吉林林蛙干皮中提取的抗菌剂进行浓缩、除盐后,上CM-52阳离子交换纤维素柱淋洗,收集透过峰,然后用不同离子强度的缓冲液进行阶段性洗脱,收集洗脱峰。用半制备型反相高效液相色谱(RP HPLC)对收集到的各峰进行纯化,得到抗菌肽纯品。     

印楝细胞培养物控制黄粉虫幼虫的研究

为了探究印楝细胞培养物控制害虫的效果,本文通过诱导幼叶、继代培养获得印楝的松散型愈伤组织,再经振荡培养获得悬浮细胞培养物;然后采用二氯甲烷溶剂浸提愈伤组织、悬浮培养物及悬浮培养细胞,制备相应的浸提液;用二氯甲烷分别将这些浸提液稀释成含0.003%印楝素A的控虫工作液,用其分别处理黄粉虫幼虫,在12d内,考察其控虫效果.结果表明:3种浸提液的致死效应明显高于阴性对照,其中,第9天的最大致死率达到20%,但它们要明显低于0.003%印楝素乳油农药的处理;3种浸提液对幼虫的虫体质量、拒食和趋避作用等方面效果较好,均达到印楝乳油杀虫剂的控虫水平.印楝细胞培养物经一步浸提后,直接用于控虫制剂的生产,可以节约分离、提纯印楝素等生产性成本.     

蚯蚓抗菌肽40 kD Fetidin基因的原核表达与复性

40 kD的fetidin是存在于蚯蚓体腔液中的一种具有较好抗菌活性的蛋白.为了获得大量fetidin,从蚯蚓(Eisenia fetida)中调取fetidin的基因,分别克隆到pKW32和pMXB10中,构建了融合和非融合表达载体,并转化大肠杆菌进行诱导表达.结果无论是融合还是非融合表达,产物均以包含体形式存在.融合表达产物通过亲和层析获得复性,复性产物对粘质沙雷氏菌具有抗菌活性.