6种中药单体脂肪酶抑制活性及其作用机制

筛选具有胰脂肪酶抑制活性的中药有效成分，明确其作用机制。以文献报道的有减肥降脂作用的6种中药单体化合物（熊果酸、齐墩果酸、姜黄素、大黄酸、芒果苷和二氢杨梅素）为筛选对象，以市售减肥样品奥利司他为阳性对照品，采用对硝基苯酚法通过测定反应体系在405 nm下的吸光度数值来测算出其对胰脂肪酶的抑制率。同时测定抑制作用最强姜黄素的3种主要分解产物（反式阿魏酸、香草酸、香草醛）对胰脂肪酶的抑制率。结果显示：奥利司他、黄素和熊果酸的半数抑制浓度（IC₅₀）依次是0.95 μmol/L、27 μmol/L和100 μmol/L，黄素和熊果酸的抑制作用机理都是通过抑制剂和酶的相互作用，阻碍酶和底物的作用，属于非竞争性抑制。齐墩果酸和双氢杨梅素的最大抑制率是（27.45±0.04）%和23.76%，其余样品的最大抑制率均少于10%；姜黄素和熊果酸具有显著的胰脂肪酶抑制作用，其抑制作用机理属于非竞争性抑制，齐墩果酸和双氢杨梅素有一定脂肪酶抑制作用，其余单体及姜黄素分解产物均无明显脂肪酶抑制作用。     

紫外-荧光分光光度法联用测定熊果酸对胰脂肪酶的抑制作用

在pH 8.0的Tris-HCl缓冲体系中,应用紫外-荧光分光度法作为研究手段,结合酶抑制动力学,研究了熊果酸对胰脂肪酶的抑制作用、抑制类型和抑制动力学常数,并探讨了熊果酸对胰脂肪酶表面疏水性的影响。结果表明,熊果酸是一种的竞争型胰脂肪酶抑制剂(半抑制率IC50为1.87±0.05 mg/mL,抑制常数Ki为0.68±0.03 mg/mL),且失活动力学时间进程能够证明熊果酸能很快的与胰脂肪酶发生作用并迅速的降低酶的活性;荧光光谱分析显示木犀草素能显著增强酪氨酸酶的表面疏水性,使胰脂肪酶活性位点的内部疏水性区域暴露出来,诱发了胰脂肪酶的解折叠,最终导致胰脂肪酶活性的降低。     

根霉脂肪酶催化水解（R,S）—环氧丙醇丁酸酯的反应特性

对根霉脂肪酶的粗酶拆分（Ｒ,Ｓ）－环氧丙醇丁酸酯的水解反应进行了初步研究,结果表明：３０℃下ＰＨ５．３时反应初速度最大;ＰＨ５．５－６．０地酶的立体选择季最高,对映体比率（Ｅ值）为５７。４２℃下ＰＨ５．５时反应初速度最大;酶的立体选择性随温度升高而下降,酶促水解反应中未到产物和底物抑制现象,根霉发酵液中脂肪酶的反应特性与硫酸铵沉淀法所得粗酶相吻合。     

奥扎格雷对酪氨酸酶的抑制机理

奥扎格雷不仅能抑制酪氨酸酶单酚酶的活性,而且能够抑制酪氨酸酶二酚酶的活性。对单酚酶的抑制作用主要表现为抑制酶活,并且使得酶催化反应的延滞时间有明显的延长,而对二酚酶的抑制作用,主要表现为抑制二酚酶酶活。同时,讨论了酚氧化酶的催化氧化的机理:酶和底物结合后,会形成一个新的疏水性的"口袋",抑制剂奥扎格雷会嵌入这个"口袋",形成酶-底物-抑制剂复合物ESI。     

糜蛋白酶抑制剂抑制动力学研究

本文对源于微生物的Ｓ－２４糜蛋白酶抑制剂抑制糜蛋白酶的动力学进行了研究。动力学研究表 明Ｓ－２４酶抑制剂抑制糜蛋白酶，对底物酪蛋白、血红蛋白的关系均为竟争性抑制。当Ｓ－２４酶抑制 剂浓度增大时，酶水解酪蛋白的反应速度降低了。反过来，如果抑制剂的浓度保持一定，那么抑 制剂的活力则随着底物浓度的增加而降低。当以酿蛋白和血红蛋白为底物时，抑制常数Ｋｉ值分别 为４．０×１０－９和２．４×１０－９。     

凝血酶抑制剂抑制动力学研究

由Ｓ－２５４菌株产生的膜血酶抑制剂是一种多组分的肽类化合物，其中Ｒ－Ｔｈｒ－Ｔｈｒ－ａｒｇｉｎｉｎａｌ组分的活力最强。在３７℃、ｐＨ＝７．４的Ｔｒｉｓ缓冲液中，该抑制剂对凝血酶的抑制作用与抑制刑的浓度关系密切。在抑制剂浓度较小的情况下，抑制剂与酶的结合呈直线关系，随着抑制刑浓度的提高，残留活力曲线则出现漂移。根据Ｄｉｘｏｎ图和Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ－Ｂｕｒｋ图的研究，该抑制剂对凝血酶的结合与底物呈竞争性抑制，抑制常数Ｋｉ＝２．０×１０－７ｍｏｌ／Ｌ。     

酶促棕榈酸鲸蜡酯合成的底物抑制作用

对实验室自制的固定化Candida sp. 99-125脂肪酶在正己烷中催化棕榈酸和鲸蜡醇的酯化反应的动力学机制进行了初步研究,结果表明：反应为动力学控制,不存在扩散限制,底物浓度对反应速率的影响符合Ping-Pong Bi-Bi反应机制。但在不同的底物浓度范围内存在不同程度的底物抑制作用,其中以长链醇的抑制为主。本文根据底物浓度由低到高,划分了三个底物浓度范围,在不同的范围内分别研究了两个底物的抑制作用,并选择不同的动力学模型,求得了动力学常数。     

脂肪酶产生菌的筛选及基因的克隆表达

目的筛选出脂肪酶活性较高菌株,通过脂肪酶基因克隆技术获得高表达的脂肪酶,根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.方法采用透明圈法,以三丁酸甘油酯为底物筛选脂肪酶活性较高菌株;通过PCR扩增获得其脂肪酶基因Pseudomonas peli(PP)序列,构建pET-28 a表达载体,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达;通过Ni柱将脂肪酶纯化,并根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.结果筛选到一株脂肪酶活性较高的菌株,16S rRNA基因序列比对结果初步鉴定为Pseudomonas peli.PCR扩增得到的基因片段长度为801 bp,其序列与Pseudomonas peli中的脂肪酶基因序列相似性达到100%,PP基因在大肠杆菌中异源表达蛋白的分子量约29 KD,该蛋白在55℃、pH 7.0时活性最高.结论通过基因克隆表达后得到的脂肪酶Ni柱纯化后纯度达95%以上,且耐高温,为脂肪酶工业化应用奠定了基础.     

脂肪酶活力测定中终止反应方法的比较分析

【目的】寻找一种准确有效的脂肪酶活力测定中的终止反应方法,以进行脂肪酶酶学性质研究。【方法】比较分析前人研究脂肪酶常用的终止方法(无水乙醇法、EDTA法、三氯乙酸法、碳酸钠法、沸水浴法)对酶活力的抑制效果和吸光值的稳定性。【结果】无水乙醇法对酶活的抑制率为97.56%,终止反应后5min内净吸光值减少5%;EDTA法对酶活抑制率为32.94%,终止反应后10min内净吸光值增加5%;三氯乙酸法对酶活的抑制率为99.46%,终止反应后10min内净吸光值增加了0.47%;碳酸钠法对酶活抑制率为76.44%,终止反应后10min内净吸光值增加了0.53%;沸水浴法对酶活抑制率为99.51%,终止反应后10min内净吸光值减少0.77%,但沸水浴会导致剩余底物的大量分解。【结论】三氯乙酸法是一种准确有效的终止脂肪酶活力测定反应的方法,可用于脂肪酶酶学性质的研究。     

鲍鱼肌原纤维结合型蛋白酶的初步鉴定

研究了皱纹盘鲍腹足肌肉中肌原纤维结合型蛋白酶对肌原纤维蛋白的降解作用.SDS-PAGE结果显示,肌原纤维在55~60℃下,肌球蛋白重链(Myosin Heavy Chain,MHC)和副肌球蛋白(Paramyosin,PM)会发生明显的降解.金属蛋白酶抑制剂EDTA、1,10-phenathroline能够有效抑制MHC和PM的分解.EDTA以及丝氨酸蛋白酶抑制剂benzamidine共同作用几乎可完全抑制蛋白质降解,揭示鲍鱼肌肉中存在肌原纤维结合型金属蛋白酶(Metalloproteinase,MP)和丝氨酸蛋白酶(Serine proteinase,SP).通过加热、强离子浓度溶液抽提相结合的方式,从肌原纤维蛋白中初步分离出这两种酶.分别利用这两种酶对肌原纤维蛋白进行降解,发现最适温度均在60℃左右,与肌原纤维蛋白自身降解的最适温度(55~60℃)相吻合.对SP的底物特异性分析结果表明,制备的丝氨酸蛋白酶对P1位为Arg残基的荧光底物有较高的分解作用,而对P1位为Lys残基的底物分解较弱.     

荷花花瓣总RNA的提取方法

以荷花花瓣为材料,在比较CTAB-LiCl法和Trizol法的基础上,针对荷花花瓣富含多糖、多酚的特点,在RNA提取过程中加入去多糖步骤,改良了CTAB-LiCl法.结果表明,改良CTAB-LiCl法能有效地去除多糖,提取到的RNA 28 SrRNA亮度约为18SrRNA的二倍,A260/A280比值为1.98,A260/A230比值为2.36,RNA产率为685.3ng/μL,说明利用改良CTAB-LiCl法从荷花花瓣中提取的RNA质量好、产率高、完整性好.     

芦荟汁中胶原酶抑制成分的分离纯化与抑制效果测定

芦荟汁提取物对胶原酶活性具有抑制作用,经萃取、硅胶柱层析和半制备液相色谱分离出两种主要抑制成分,化学结构鉴定为芦荟素和异芦荟素;羟脯氨酸化学比色法测定胶原酶抑制效果,两者具有相似的抑制效果并随质量浓度的增大而近似线性升高:芦荟素1 mg/mL时百分抑制率达到42%,低质量浓度下的抑制作用高于四环素.芦荟素、异芦荟素的抑制作用可能与其对胶原酶活性位点上Zn2 的螯合有关.     

提取脂肪酶的一种新方法[CD2]纳米机破碎法

采用纳米颗粒机提取脂肪酶, 其比活较传统超声方法约提高3倍,且具有快速、 高效、 可大量生产等特点, 适于工业化生产. 对脂肪酶活力检测乳化液的制备方法进行优化, 得到了较稳定的活力数据.     

桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的抑制作用

研究桑黄素(Morin)对蘑菇酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响和抑制效应的结果表明:桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶和二酚酶活性均有抑制作用;导致单酚酶活力和二酚酶活力下降50%的抑制剂浓度(IC50)分别为0.08和1.02 mmol/L;桑黄素对蘑菇酪氨酸酶的单酚酶的迟滞时间有明显的延长效应,0.175 mmol/L桑黄素使得单酚酶的迟滞时间从24 s延长到362 s,迟滞时间增加了14倍,酶的稳态活力下降了61.9%;桑黄素对二酚酶的抑制作用表现为竞争性可逆抑制作用,抑制常数为0.55 mmol/L.     

肾茶水浸液抑菌作用研究

目的：研究肾茶水浸液的抑菌作用。方法：通过滤纸扩散法测定抑菌作用,对于有抑制作用的菌种测定其最小抑菌浓度。结论：肾茶水浸液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌均有抑制作用,对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强,其次是铜绿假单胞菌和白色念珠菌。对上述3种供试菌的最低抑菌浓度分别为0．08g／mL、0．10g／mL、0．10g／mL,而对黑曲霉菌、青霉菌、酿酒酵母菌无抑制作用。     

20个荷花品种花粉活力测定及贮藏研究

为研究荷花花粉的生活力,选择了20个荷花品种分别用TTC染色法、亚甲基蓝染色法和离体萌发法测定了花粉的染色率和萌发率,并研究了不同温度贮藏条件对花粉生活力的影响.结果表明,亚甲基蓝染色法不能作为荷花花粉生活力的测定方法,离体萌发法结果更直观和准确;20个荷花品种间的离体萌发率差异明显,最高为13.1%,最低为0;不同品种在三种贮藏温度下萌发率变化趋势相同,4℃条件下贮藏较有利于荷花花粉生活力的保持.     

黔产金银花提取物抑菌作用的初步研究

研究黔产金银花醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性,结果表明,黔产金银花醇提物和水提物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有一定的抑菌作用,其中,醇提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为250mg/mL、250mg/mL,水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的最低抑菌浓度分别为62.5mg/mL、125mg/mL。     

荷叶蜡质层处理与荷梗品质及抗氧化性

为了探索荷叶蜡质层是否影响荷叶品质,明确荷梗的品质及其抗氧化性,主要研究了打磨荷叶、无打磨荷叶和荷梗的活性成分、营养成分和抗氧化性.实验结果表明:无打磨荷叶的活性成分和营养成分含量(维生素C含量除外)显著高于打磨荷叶的活性成分和营养成分含量,而打磨荷叶的抗氧化性显著高于无打磨荷叶的抗氧化性.荷梗的生物碱含量较高,同时抗氧化性也较强.因此,荷梗具有重要的开发潜能.     

不同产地雪莲花中重金属含量分析

雪莲花是一种名贵的藏药,也是青藏高原最受国内外游客青睐的土特产之一。雪莲花作为一种药用植物,其中有毒有害的重金属含量也是广大消费者关注的问题之一,更是该药材出口销售的绿色标准指标之一。本研究采用ICP-MS和氢化发生—AFS法,对西藏拉萨市场内来自西藏、青海和新疆3个产地的雪莲花样品进行了重金属含量分析。结果表明：①3个产地中西藏雪莲花重金属含量较高,青海次之,新疆最低;②雪莲花药材重金属含量由高到低的顺序为：Cr〉As〉Pb〉Cd〉Hg,按照《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,重金属As超标较明显。