浅谈如何提高小鼠受孕率

为提高小鼠受孕率,对Balb/c小鼠生殖系统进行了解剖学和细胞学研究.结果表明:性周期发情期的鉴定是提高小鼠受孕率的关键.光照、温度、湿度、噪音及营养等因素对小鼠性周期影响很大.自然交配的受精卵质量远比超数排卵的好,但超数排卵仍不失为一种良好的获得更多卵子的辅助办法.     

基因工程小鼠制备和保种、育种技术研究

摘要: 本文从小鼠的超数排卵、采集胚胎、原核受精卵显微注射、胚胎移植、基因型鉴定等多个环节,详细阐述制备基因工程小鼠的技术操作要领; 通过实施辅助生殖技术IVF( 体外受精) 、精子和胚胎的冷冻、复苏技术实现了基因工程小鼠的保种和育种,涉及相关技术的要点改进和操作体会,成功建成了基因工程小鼠的制备和保种、育种平台,提供了良好的技术服务。     

雌性Wistar大鼠、NIH小鼠性周期血清激素含量分析

目的通过测定Wistar大鼠和NIH小鼠性周期各期及超排后血清生殖激素雌二醇(E2)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)的含量,比较不同性周期实验动物的血清性激素水平,研究动物血清性激素随性周期变化的规律。方法用阴道涂片法判定动物的性周期阶段并进行分组,用放射免疫分析法测定各组动物血清E2、LH和FSH的含量,进行统计学处理和分析。结果Wistar大鼠和NIH小鼠E2各时期间无显著差异;LH以超排组最高,与其他各组比较有极显著差异(P<0.01);FSH在动情后期最高,与各组比较有极显著差异(P<0.01)。结论雌性大、小鼠的血清生殖激素在性周期的不同阶段其含量呈规律性变化,超排后动物血清LH的分泌增加,以促进卵子的排出和黄体的形成。     

昆明小鼠胚胎移植技术的研究

目的研究不同时期胚胎对胚胎移植成功率的影响,以提高胚胎移植率。方法采用经超数排卵的KM雌鼠与正常615雄鼠交配,取受精卵,分别将1-细胞胚、2-细胞胚和桑椹胚、囊胚分别移入发情的假孕KM雌鼠的输卵管和子宫中,妊娠产仔。结果移入1-细胞胚、2-细胞胚、桑椹胚和囊胚的假孕母鼠妊娠率分别为36.36%、42.86%、10%、27.27%,产仔率分别为46.58%、38.46%、58.33%、60%。结论2-细胞胚的移植可提高小鼠的胚胎移植成功率,子宫移植可提高小鼠的产仔率。     

热应激对 ICR 雌性小鼠超数排卵及卵泡发育的影响

摘要:目的 探讨短期热应激对小鼠超数排卵和卵泡发育的影响。 方法 取超数排卵处理后体质量近似的 7 ~ 8 周龄 ICR 雌性小鼠 20 只,随机分为对照组和热应激组,每组 10 只,饲养于屏障环境内。 热应激组小鼠放入 38 ℃ 的生化培养箱中,热应激处理 10 h,期间自由采食和饮水。 热应激结束后,将小鼠放回屏障设施内饲养,持续 6 d,6 d后,进行超数排卵处理并处死小鼠,获取小鼠输卵管内卵子以及卵巢。 结果 热应激组小鼠超排卵数高于对照组( P<0. 05) 。 对卵巢切片进行苏木素-伊红( HE)染色后,观察发现热应激组小鼠的总卵泡数和黄体数均明显高于对照组( P<0. 01) 。 热应激组小鼠的卵泡闭锁率高于对照组,但无明显差异( P> 0. 05) 。 结论 热应激严重影响小鼠的繁殖机能,尤其是卵泡的发育过程。     

受精卵、胚胎的法律地位初探

人工辅助生殖技术的出现导致双轨生殖体制的形成,受精卵、胚胎这些遗传物质的法律地位问题对传统民事法律制度的相关规定提出了挑战。受精卵、胚胎这些遗传物质的法律地位如何?笔者认为,受精卵和胚胎不宜被视为民法上的"人",不能享有法律上的民事主体地位;受精卵和胚胎亦不同于民法上一般的物,不能成为物权或债权等财产权的对象;但理论和立法上可以把受精卵和胚胎纳入民法客体的范畴进行调整,完善其在控制权方面的法律规定。     

小鼠胚胎移植实验方法

目的在小鼠胚胎移植实验中除了胚胎的质量外,希望从受体状况及胚胎移植的技术和方法上摸索出最佳胚胎移植的条件,提高胚胎移植率,为临床胚胎移植提供实验和理论数据。方法从超数排卵或自然发情怀孕3.5 d的母鼠子宫内收集胚胎,在显微镜下观察,以最快的速度将发育与胚龄一致并且形态完好的胚胎捡出,并移植到自然发情2.5 d的小鼠子宫内。结果超数排卵的胚胎质量比自然发情的胚胎质量差,在12个自然发情的受体中有3个怀孕并产下12只仔鼠。结论小鼠胚胎移植与供受体的准备、小鼠的超数排卵、胚胎品质有着密切的关系,胚胎移植的技术和方法对胚胎移植有着至关重要的关系。     

小鼠转基因及传代研究

综述了湖北省农科院生物技术研究所近年来有关转基因小鼠的主要研究进展。应用原核注射技术 ,将POMT PGH、hDAF、pBHSA、pSHSA、PT HBV 1 3、Bcl xL、hCD5 9、hCD5 9+hMCP等 8种外源基因 ,注入并移植 4 874枚小鼠的受精卵 ,得到 5 5 6只小鼠 ;经PCR和Southern杂交检测 ,确认原代转基因小鼠 10 8只。基因整合率平均 19.4 % ,转基因效率平均 2 .2 %。应用混合注射的方法得到了转双基因小鼠 ,双基因共整合率 2 2 .2 %。表达外源蛋白的转基因小鼠在 5 0 %～ 10 0 %之间。研究了小鼠的超数排卵和影响转基因效率的几个因素。通过转Bcl xL小鼠与非转基因小鼠连续五个世代的传代交配和检测 ,研究了转基因小鼠外源基因的遗传规律 ,表明四只原代小鼠中 ,只有一只能稳定地将外源基因传递给后代。并非所有的转基因小鼠都具有遗传的稳定性 ,欲建立小鼠的转基因品系 ,尚需对原代转基因小鼠进行筛选。     

几种常用实验动物的超排比较

随着对动物胚胎研究的不断发展,哺乳动物的卵及早期胚胎获取,以及包括体外培养在内的各项实验技术也已日趋成熟和完善。目前,能够获得大量胚胎来源的方法仍为超数排卵,完善的超数排卵技术依然是胚胎移植成功的先决条件。本实验应用国产激素PMSG+HCG的组合对8只家兔、20只短尾仓鼠和25只昆明小鼠进行了超数排卵处理。以昆明小鼠为主,通过比较,系统研究了不同动物、激素剂量、发情周期以及动物本身体质、季节、人工饲养环境等因素对超排效果的影响。     

胚胎移植

1890年英国人希普移植兔胚胎成功后,开创了动物繁殖的新领域,其后,牛、绵羊、山羊、猪以及其他试验动物的胚胎也都先后移植成功。最近,胚胎移植成功率可达70％左右,有的甚至更高。我国近几年也有许多单位搞了大量试验,在牛、羊等家畜身上胚胎移植获得了成功,产下了健壮的羔羊、犊牛。家畜胚胎移植,就是用生殖激素处理良种母畜,使之超数排卵,如牛、羊一次可挑出成熟卵子10～15个,然后进行配种或人工授精。再用手术或非手术的方法从良种母畜(供体)体内取出多个受精卵,用手术或非手术方法,把受精卵分别移植到和它同期发     

激素剂量、小鼠品系及周龄对超数排卵的影响

目的采用孕马血清促性腺激素（PMSG）和人促绒毛膜性腺激素（hCG）对不同品系和周龄小鼠进行超数排卵处理,比较激素（PMSG/hCG）注射剂量、小鼠品系和周龄对超排效果的影响,以便获得比较优良的超排方法。结果 1）激素剂量为PMSG（10 IU/只）＋hCG（10 IU/只）的超排效果优于PMSG（5 IU/只）＋hCG（5 IU/只）,但无显著差异（P〉0.05）;2）相同剂量时I,CR小鼠和C57BL/6J小鼠的超排效果显著优于BALB/c小鼠和FVB小鼠（P〈0.05）;3）5周龄与8周龄的小鼠比较,8周龄超排效果较好,但差异不显著（P〉0.05）。结论采用10 IUPMSG＋10 IU hCG的组合对8周龄的ICR、C57BL/6J进行超排处理效果相对较好。     

Effects of different nuclear recipients on developmental potential of mouse somatic nuclear transfer embryos

Somatic cell nuclear transfer has been succeeded in procedures of nuclear transfer. One is single nucleartransfer, the other is serial nuclear transfer. Viable animals have been cloned in different species using both me-thods[1—6]. Different nuclear recipients and donors wereused in serial nuclear transfer, namely, transferring thenuclear of reconstructed embryo into enucleated MⅡoocytes[7], transferring the nuclear of reconstructed em-bryos at one cell stage into enucleated zygote[4] and t…     

小鼠胚胎移植技术优化及对巨细胞病毒净化研究

目的 建立小鼠巨细胞病毒净化方法,以获得无MCMV感染的小鼠。方法 利用胚胎移植技术,通过使用不同激素、不同发情周期注射激素、受体鼠品系、不同的移植方法、不同时期胚胎移植,以及移植胚胎数量等对比试验,优化了净化条件。利用优化的胚胎移植净化方法,对供体鼠进行了净化。结果 SIGMA生产的激素,在10 IU剂量下超排得到的可用胚胎数量约为17枚/只;在小鼠发情间期超排得到的可用胚胎最多,超排的可用胚胎数约为23枚/只;选取C57雄性小鼠与ICR雌性小鼠交配的子一代作为受体鼠,产仔率达44.5%;输卵管移植较子宫移植效果好,产仔率为40.64%;移植2细胞胚胎的妊娠率为80%,明显优于单细胞和8细胞;受体鼠移植24枚胚胎时,产仔率达到了43.75%。利用优化的小鼠巨细胞病毒胚胎移植净化方法,净化得到了无MCMV感染的小鼠。结论 建立了小鼠巨细胞病毒净化方法,为获得无MCMV感染的小鼠种群提供了可靠的保障。     

Developmental reprogramming after chromosome transfer into mitotic mouse zygotes

Until now, animal cloning and the production of embryonic stem cell lines by somatic cell nuclear transfer have relied on introducing nuclei into meiotic oocytes. In contrast, attempts at somatic cell nuclear transfer into fertilized interphase zygotes have failed. As a result, it has generally been assumed that unfertilized human oocytes will be required for the generation of tailored human embryonic stem cell lines from patients by somatic cell nuclear transfer. Here we report, however, that, unlike interphase zygotes, mouse zygotes temporarily arrested in mitosis can support somatic cell reprogramming, the production of embryonic stem cell lines and the full-term development of cloned animals. Thus, human zygotes and perhaps human embryonic blastomeres may be useful supplements to human oocytes for the creation of patient-derived human embryonic stem cells.     

致病疫霉菌株交配型的检测及其检测方法的比较

致病疫霉(Phytophthora infestans)是马铃薯晚疫病的病原体,可导致马铃薯大面积减产。致病疫霉的有性生殖可以产生卵孢子,由于其抗逆性较强,利于致病疫霉渡过不利的生存环境,给马铃薯晚疫病的有效防治带来巨大的困难。致病疫霉的有性生殖属于异宗配合,即A1、A2交配型同时培养时才会产生卵孢子。因此,快速而有效地检测致病疫霉菌株的交配型将为致病疫霉有性生殖分子机理的研究及致病疫霉的防治奠定基础。通过直接配对法、纸盘法和分子标记法三种方法,对5株来源不同的致病疫霉菌株进行了交配型检测。三种方法的检测结果均表明,菌株HQK8-3、2PO-D、USA1的交配型与ATCC标准菌株64093的交配型一致,为A1交配型,而菌株2PO82001、P7723的交配型与ATCC标准菌株32835的交配型一致,为A2交配型。说明三种方法均可有效鉴定致病疫霉交配型,但三种方法各有优缺点,应根据实验条件,采取合适的方法进行菌株交配型测定。     

Sympatric speciation by sexual selection

There is increasing evidence for the process of sympatric speciation, in which reproductive isolation of species occurs without physical isolation. Theoretical models have focused on disruptive natural selection as the crucial pressure for splitting a species. Here we report the theoretical finding that sympatric speciation may be caused by sexual selection even without disruptive natural selection. Specifically, we show that variation in a male secondary sexual character with two conspicuous extremes and the corresponding variance in female mating preference around no preference may jointly evolve into bimodal distributions with increasing modal divergence of the male and female traits, pulling a population apart into two prezygotically isolated populations. This mode of speciation, driven by two runaway processes in different directions, is promoted by an increase in the efficiency of females in discriminating among males or a decrease in the cost of male conspicuousness, indicating that sympatric speciation may occur more readily if barrier-free or predator-free conditions arise. Although even a slight cost of female preference would cancel the runaway process of sexual selection, it would not cancel the divergent runaway processes of sympatric speciation.     

基于SSR分子标记检测褐飞虱交配次数及性选择

为探明褐飞虱交配次数和性选择的生殖行为特征,构建了褐飞虱生物型1和生物型Y的近交系,筛选了在不同近交系之间存在明显差异的9个SSR(Simple Sequence Repeats)分子标记用于亲子鉴定.在雌虫交配次数试验中,观察并分子鉴定到23头成功交配的雌虫,其中19头雌虫一生仅进行1次交配,4头雌虫一生进行了2次交...