人α2a干扰素酵母工程菌高产培养条件的研究

研究了摇瓶培养条件对人α2a干扰素酵母工程菌生长及表达的影响,结果表明,当基础料中腺嘌呤含量为20μg/mL,在发酵进行至12h时再加入20μg/mL腺嘌呤时,IFN-α2a生物活性及比活分别达到了7.3×106IU/mL及6.77×107IU/mg.发酵过程中后期补入适量葡萄糖,且维持低糖水平,有利表达.维持总碳源含量不变,使培养基中葡萄糖与蔗糖比例为1∶0.1,结果IFN-α2a生物活性及比活分别比对照增加了一倍以上.在发酵进行至12h时,加入2g/L谷氨酸,IFN-α2a生物活性及比活分别比对照提高了1.76倍及1.94倍,而添加0.25～1.0g/L赖氨酸也能显著提高表达水平.培养基初始pH对产物表达有较大影响,初始pH为6.5时,对表达最有利.利用上述摇瓶培养优化条件,在2.6L生物反应器中进行补料分批培养,人α2a干扰素生物活性达到了1.3×107IU/mL,为原工艺的3倍.     

酿酒酵母重组人α2a干扰素补料分批培养

在 2 .6L全自动发酵罐中对人 α2 a干扰素重组酵母的补料分批培养过程作了初步研究。结果表明 ,培养过程中待葡萄糖耗尽时流加葡萄糖 ,并维持低糖浓度 ;在培养 1 0 h～ 2 0 h时 ,恒速流加 2 0 mg/L的腺嘌呤 ,能较大幅度提高表达水平 ,生物活性从原工艺的 3.1× 1 0 9IU/L提高至1 .3× 1 0 10 IU/L。表达期 p H值对生产水平有很大影响 ,宜控制在 5.0～ 5.3     

重组人干扰素α-2b工程菌培养条件的优化研究

对重组人干扰素α-2b工程菌的培养条件、诱导条件进行研究.提高菌体目标蛋白表达量.通过实验条件的优化确定了适合重组人干扰素α-2b表达的诱导温度、诱导时间和诱导收获时间等.改进工艺后,目的蛋白的表达量大大提高,为进一步的下游工艺的开发奠定了基础.     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的：评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性。方法：采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验，按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例，观察时间为6周。结果：重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50．0％，总有效率98．3％，与对照组比较，有显著性差异（P〈O．05）。结论：重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效，使用方便安全。     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性。方法采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验,按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例,观察时间为6周。结果重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50.0%,总有效率98.3%,与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。结论重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效,使用方便安全。     

重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂疗效观察

目的 评价重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂的疗效及安全性.方法 采用多中心、随机、双盲、基质平行对照试验,按病例接纳顺序随机表分治疗组120例、对照组90例,观察时间为6周.结果 重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂痊愈率50.0%,总有效率98.3%,与对照组比较,有显著性差异(P＜0.05).结论 重组人α-2a干扰素栓治疗宫颈糜烂有较好的临床疗效,使用方便安全.     

重组人干扰素α-2b水针、粉针的稳定性及与干扰素标准品的比较研究

研究重组人干扰素α-2b(商品名:安福隆)的稳定性.采用细胞病变法(CPE)检测在4℃贮存条件下放置不同时段的干扰素α-2b水针、粉针和干扰素标准品的抗病毒能力,与标准品比较,评价了水针和粉针的稳定性.结果显示,在4℃的贮存条件下,干扰素α-2b水针和粉针的抗病毒能力基本相同;经两年贮存后,也没有明显地变化,且均比标准品抗病毒能力强.说明干扰素α-2b水针和粉针稳定性均较好,其辅料配方合理,可有效保护干扰素α-2b,减少其降解.     

重组大肠杆菌BL21(pBAI)生产人干扰素α2b

通过培养重组大肠杆菌BL21(pBAI)表达人干扰素α2b(Human Interferon α2b,hIFNα2b).hIFNα2b表达由PL,启动子控制,通过升温至42℃诱导表达.本研究比较了分批培养和多种补料分批培养方式下hIFNα2b的生产,其中通过恒速流加葡萄糖,hIFNα2b的表达量达到6 540 mg/L,平均生产速率和比速率分别为546 mg/(L·h)和27 mg/(g·h).升温前1.5 h补充25 g酵母提取物,并以0.27 g/(g·h)的比速率供应葡萄糖,hIFNα2b的平均生产速率达到1 006 mg/(L·h),比生产速率为54 mg/(g·h),对有机氮源的得率提高到138 mg/g.     

植酸酶分泌型酵母工程菌的构建

通过逆转录PCR从无花果曲霉总RNA中扩增出1.4-kb带信号肽的植酸酶基因，将其克隆到穿梭表示载体pYES2，构建了含有目的的基因的重组质粒pYPA1.用pYPA1转化酿酒酵母INVSc1菌株，成功地构建了能分泌活性植酸酶的工程菌株。该菌株的成功构建为饲料和食品添加剂以及解磷工程菌肥的开发奠定了基础。     

比色法测定聚乙二醇化重组人干扰素α2b注射液中吐温80的含量

建立比色法测定聚乙二醇化干扰素α2b(PEG-IFNα2b)注射液中吐温80含量,并评估聚乙二醇(PEG,分子量:20KD)对该测定方法的影响。     

重组人干扰素α-2b-卡介苗（hIFN—α-2b—BCG）药物敏感性分析

通过BACTECMGITTM960全自动分枝杆菌培养鉴定／药敏仪对重组人干扰素α-2b卡介苗hIFN-α-2b-BCG）菌株进行利福平等10种抗菌药物的敏感性试验,以野生BCG作对照观察药物对重组BCG菌株活性的潜在影响．结果发现：重组人干扰素α-2b-卡介苗在系统感染上对喹酮类的氧氟沙星、环丙沙星敏感,对氨基糖苷类药物的庆大霉素和卡那霉素耐药．在抗结核类药物中,除对吡嗪酰胺耐药外,外利福平等其他几种抗生素均敏感．因尿液回收率高,几乎所有的抗茵药物都对膀胱中的菌株有影响．     

人αB干扰素基因在PGK1启动子和α因子前导序列控制下在酵母中的表达和分泌

借助化学合成的寡聚核苷酸接头将酵母PGK1启动子和α因子前导序列相连构建成一个αB干扰素基因的分泌表达载体YFD65.含质粒YFD65的酵母菌BJ1991能分泌表达αB干扰素,分泌到培养基中的αB干扰素的量为10~8U/L.     

慢性宫颈炎的病毒病原研究和重组人α1b型干扰素的治疗作用

阐明人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ－１６）、巨细胞病毒（ＣＭＶ）和单纯疱疹病毒２型（ＨＳＶ－２）感染与慢性宫颈炎的关系,考核重组人α１ｂ型干扰素治疗慢性宫颈炎的疗效和阻断ＨＰＶ－１６母婴传播的作用。方法：采用ＤＮＡ分子杂交技术、病毒分离技术,ＰＣＲ扩增技术检测标本。标本采自糜烂、正常宫颈,妊娠３９周的孕妇宫颈以及新生儿咽拭子。结果：通过对正常宫颈和糜烂宫颈ＨＰＶ－１６,ＨＳＶ－２和ＣＭＶ病毒检出率的比较,证明病毒感染与慢性宫颈炎高度相关;采用重组人α１ｂ型干扰素（ｒｈＩＦＮ－α１ｂ）治疗慢性宫颈炎一个疗程后,有效率达９３８％,显效率达６０％;ＨＰＶ－１６和ＨＳＶ－２的病毒检出率也相应明显下降。在干扰素治疗后,ＨＰＶ－１６的母婴传播率从８０％下降至２９４％。中药黄芪与干扰素有协同作用。结论：１）慢性宫颈炎与ＨＰＶ－１６,ＨＳＶ－２和ＣＭＶ病毒感染有关;２）ｒｈＩＦＮ－α１ｂ对治疗慢性宫颈炎有明显疗效;对阻断ＨＰＶ－１６的母婴传播有明显作用;３）中药黄芪与干扰素对治疗慢性宫颈炎有协同作用     

γ干扰素工程菌发酵工艺研究

在摇瓶培养及恒化培养研究的基础上,对含温度敏感型质粒γ干扰素工程菌高密度、高表达的发酵工艺作了探讨。摇瓶培养结果表明,菌体的良好生长状态对外源基因表达起着重要作用,工程菌于对数后期升温,干扰素滴度最高。以葡萄糖为限制性基质的恒化培养,得出了工程菌细胞生长得率与比生长速率之间的关系,同时表明工程菌升温表达前的比生长速率对表达后干扰素的比活有影响,比生长速率在0.10～0.15h~(-1)时比活最大。通过碳、氮、镁的间歇流加培养与连续流加培养,均使工程菌达到高密度与高表达,但以控制比生长速率为目的的连续流加培养较间歇流加比活提高近4倍,棕1.1×10~(10)IU/L。     

基因重组α-干扰素治疗慢性粒细胞白血病31例

目的 :观察干扰素治疗慢性粒细胞白血病的疗效。方法 :应用基因重组α干扰素 (IFN α)治疗 31例慢性粒细胞白血病 (CML) ,其中慢性期 (CP) 30例 ,(1例完全缓解病例 ) ,加速期 (AP) 1例。剂量为隔日 30 0万U平均疗程为 9个月 (3～ 4 0个月 )。结果 :单用IFN α治疗CMLCP 5例 ,其中 2例有效 ;联用甲异靛治疗 12例 ,联用羟基脲治疗 14例 ,有效率分别为 91.6 %和 5 7.1% ,与单用甲异靛或羟基脲治疗相比无显著差异。缓解后有 8例单用IFN α维持治持 ,平均持续缓解时间为 6个月。复查Ph+ CML 16例 ,治疗后均未达到完全转阴。结论 :提示IFN α可用于CMLCP和缓解后维持治疗 ,若加大剂量和延长用药时间 ,有可能进一步提高疗效。IFN α对CMLAP无效     

α2b干扰素基因与Ag85B基因在毕赤氏酵母中的融合表达

Ag85是结核分枝杆菌的一种分枝菌酸转移酶复合体,在结核分枝杆菌的细胞壁合成过程中起着重要作用Ag85B是该复合体的一个组分,具有较好的免疫原性通过连接多肽（G4S）4的编码序列,将α2b干扰素基因与Ag85B基因连成融合基因,然后克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9上,转化Pichia pastoris SMD1168后获得重组酵母工程菌SMD1168／pPIC9-α2bAg85B,经甲醇诱导培养,发酵上清液经抗病毒活性测定,Western blot鉴定以及初步纯化,结果表明,分泌表达的融合蛋白具有一定的抗病毒活性．     

重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白的分离纯化

考察了大肠杆菌E.coli表达的重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白包涵体的变性、复性及融合蛋白的分离纯化过程。实验结果表明：包涵体经7mol/L盐酸胍,10mmol/L DTT变性;1mol/L尿素,2mmol/L还原型谷胱甘肽,0.2mmol/L氧化型谷胱甘肽脉冲加样稀释复性;金属螯合层析收集0.3mol/L咪唑洗脱峰,冷干后经重组肠激酶30℃酶切24h、Sephadex G50 柱纯化,可得到纯度达90%的重组人干扰素α2b和胸腺肽αl融合蛋白,且最终目的融合蛋白产量达68mg/g干菌体。     

rhIFNα2b与EDQM rhIFNα2b化学参比物质结构对比研究

通过高分辨率分子量、圆二色谱、氨基酸组成、质量肽图、N-末端序列、反相纯度研究,进行重组人干扰素α2b(rhIFNα2b)与欧洲药品质量管理局(EDQM)rhIFNα2b化学参比物质(欧洲对照品)结构对比。     

重组人干扰素α-2b联合盐酸伐昔洛韦片治疗老年人带状疱疹临床疗效观察

目的观察比较重组人干扰素α-2b联合盐酸伐昔洛韦片与单用盐酸伐昔洛韦片治疗老年带状疱疹患者效果。方法将2010-2014年收治的66例带状疱疹患者随机分为观察组和对照组;观察组32例,对照组34例。观察比较两组患者接受治疗前后临床指标、治疗过程中副反应、临床疗效及带状疱疹后遗神经痛发生率等情况。结果 1观察组疗效明显优于对照组(P<0.05)。2治疗后,观察组疼痛评分低于对照组(P<0.05)。3治疗后,两组患者的后遗神经痛发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组人干扰素α-2b联合盐酸伐昔洛韦片治疗老年带状疱疹疗效优于单用盐酸伐昔洛韦片,且未增多药物副反应。但对减少带状疱疹后遗神经痛方面未发现明显效果。     

酵母类絮凝剂产生菌的最佳培养条件研究

本文对几株混合酵母菌（HJ-1-HJ6）利用制酒废水产生微生物絮凝剂进行了研究。并对絮凝效果最好的混合菌HJ3的最佳絮凝剂合成条件进行料研究,结果表明：HJ3的最佳絮凝剂产生条件为：相对接种量15%,培养基初始pH值4.5,碳氮比20∶1,废水COD浓度为12000mg/L。酵母类混合菌产絮凝剂的最大活性均出现在36 h,比单一酵母菌产絮凝剂周期缩短了4~12h,节省了时间并提高了絮凝活性。