人输卵管液和输卵管上皮细胞培养液诱发精子的顶体反应

目的：探讨人输卵管液和上皮细胞培养液对人精子顶体反应的诱发作用。方法：用Ｈａｍ′ｓＦ１０作对照组，输卵管液和上皮细胞培养液为实验组，分别与生育力组（ｎ＝２０）和不育组（ｎ＝２０）的精子进行共孵育，用精子顶体三色染色法对顶体状态进行评价。结果：共孵育３ｈ时与Ｈａｍ′ｓＦ１０对照组相比较，两种输卵管液均可显著提高生育力组和不育组的精子顶反应率（Ｐ〈０．０５），但这两种输卵管液处理的生育力组与不育组之间     

人输卵管组织培养液对人精子顶体反应的影响

哺乳动物包括人类的输卵管在生殖过程对精子获能、顶体反应、配子运转、受精、营养和胚胎发育起重要作用。为了检测人输卵管组织共培养系统对人精子受精能力的影响,本试验观察了月经中期人输卵管组织培养液对人精子顶体反应的影响,并以培养液Harn’sF10％FCS作为对照,结果表明在共孵育不同时间后用三色染色法检测：实验组与对照组都能促进精子的顶体反应,其中实验组对精子的顶体反应的影响强于对照组,提示人类输卵管上皮组织可能分泌某种因子使人精子易于发生顶体反应。人输卵管组织培养液对人精子顶体反应的影响@张春雪$暨南大学生…     

利用H2O2提高GS115rhZP3培养中的溶氧和目的蛋白产量

目的：提高毕赤酵母摇瓶培养中的溶氧，从而提高目的蛋白的表达量．方法：在rhZP3工程菌培养过程分别加入不同浓度的H2O2，甲醇诱导培养后，取培养液上清进行SDS-PAGE电泳和Western blot，并与不加H2O2的对照组比较，分析H2O2对重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)在毕赤酵母中表达量的影响．结果：H2O2可提高培养基的溶氧量．当H2O2浓度为5mmol／L时，目的蛋白的表达量最高。结论：在rhZp3毕赤酵母工程菌摇瓶培养中，加入H2O2可提高rhZP3的表达量．     

人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较

目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况.方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况.结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响.结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白.     

Ionomycin诱导小鼠精子顶体反应的初步研究

目的:探讨Ionomycin诱导精子顶体反应的效果.方法:收集小鼠附睾尾精子,体外获能后用不同终浓度的Ionomycin处理相同时间,以及用相同浓度的Ionomycin处理不同时间.FITC-PNA染色观察并统计精子顶体反应率.结果:用终浓度为1、5、10、50μmol/L Ionomycin处理1 h的精子AR率分别为31.6%、52.2%、57.4%和64.0%.用终浓度为5μmol/L的Ionomycin处理10、30、45、60、120、180 min的精子AR率分别为17.2%、25.0%、41.2%、52.2%、54.0%和55.0%.结论:Ionomycin可以诱导小鼠精子的顶体反应,且顶体反应率随着浓度和诱导时间的变化而变化.     

BAY及DMSO在体外对小鼠精子顶体反应的影响

目的探究BAY(激素敏感脂酶抑制剂)及DMSO(二甲基亚砜)对小鼠精子顶体反应(AR)的直接影响。方法分别通过5个和6个不同的浓度梯度的BAY及DMSO在体外探究其对小鼠精子AR的影响,在不同孵育时间段采用FITC-PSA和考马斯亮蓝染色法对小鼠精子的顶体反应进行鉴定。结果在所选浓度范围内BAY未能直接影响精子的顶体反应及存活率(P>0.05),而DMSO在一定浓度和时间内可直接影响精子顶体反应及精子存活率。结论 DMSO和BAY对小鼠精子发生的作用是通过不同途径来实现的,前者可直接影响精子顶体反应和精子的存活率,而后者则与顶体反应及存活率无关。提示在AR的研究中使用DMSO时需控制好作用浓度及作用时间。     

中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子的形态和顶体反应的研究

研究了利用离子载体A23187诱导中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）精子产生顶体反应的最佳条件．结果表明：从雌性中华绒螫蟹纳精囊中获得的精子，在pH值为6．0，CaCl2浓度为0．2％的人工海水中，用离子载体A23187（40μg／mL）诱导70min，可以得到最大的精子顶体反应率（72％）．在此基础上用光镜观察了顶体反应过程中精子显微结构的变化，并采用天然海水配制的台盼蓝染色液和曙红B染色液对中华绒螯蟹精子的形态进行观察，确定中华绒螫蟹精子的顶体反应过程大致可分为4个阶段：第一阶段为辐射臂收缩，头帽鼓起；第二阶段为顶体囊外翻；第三阶段为顶体管前伸；第四阶段为顶体丝形成．     

重组人钙调素的表达及其McAb的制备与精子CaM定位

用基因重组技术构建人钙调素基因Ⅲ（ｈＣａＭⅢｃＤＮＡ）表达载体ｐＢＶ／ｈＣａＭⅢ,并在大肠杆菌ＤＨ５α中经热诱导获得可溶性ＣａＭ蛋白的高效表达．将纯化的重组ｈＣａＭ与异型双功能剂ＳＰＤＰ及鼠血清白蛋白（ＭＳＡ）交联,免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,用常规细胞融合技术制备单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,得到３株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞．间接ＥＬＩＳＡ和斑点免疫结果证实,三种单克隆抗体均与自制的ｒｈＣａＭ和ＣａＭ标准品起特异反应．用免疫组化法对精子中ＣａＭ定位,发现ＣａＭ主要分布于精子头颈部,不育组ＣａＭ＋精子率（（４５．０±７．５）％）显著低于生育组（（６８．５±１０．５）％）．     

小鼠卵巢颗粒细胞条件培养液中蛋白质和激素水平

测定用于精子顶体反应和早期胚胎离体培养的小鼠卵巢颗粒细胞条件培养液中的蛋白质和激素水平。结果表明：单层培养的颗粒细胞体外培养后生长良好,能稳定分泌蛋白质、雌二醇（Ｅ２）和孕酮（Ｐ）。在培养液中加入促卵泡素（ＦＳＨ）和胰岛素（ＩＮＳ）时,Ｅ２的分泌量无显著变化。     

卵表面精子受体糖蛋白(ZP)基因的研究

哺乳动物卵透明带（ZP）是环绕卵细胞外的一种糖蛋白基质,它在卵母细胞发育、卵细胞受精和受精卵发育中起着重要作用。从小鼠ZP研究中发现ZP是由3种糖蛋白ZPI、ZPZ和ZP3组成,其中ZP3是精子受体蛋白具有特别重要的功能。由于ZP糖蛋白在控制受精作用和调控生殖中具有重要意义,因此对ZP糖蛋白的研究已成为生殖分子生物学的一个重要的热点80年代科学工作者分别从小鼠、兔和人组织中应用基因工程技术研究了ZP糖蛋白基因,特别对ZP3基因作了比较详尽的研究。IZP糖蛋白基因的分离和克隆RingUette（1986）从小鼠卵巢中提纯mRNA,经…     

牛精子体外获能后的超微结构变化

用肝素 咖啡因作获能剂对牛冷冻 解冻精子进行体外获能处理 ,体外培养 1h ,在透射电镜下观察精子获能后的超微结构变化。结果表明 :(1)牛精子顶体内膜和外膜均为双层膜结构 ;(2 )精子获能后顶体囊泡化的形成有多种形式 :质膜与顶体外膜融合 ,双层顶体外膜自身融合 ,顶体外膜内陷或外突打褶 ,双层顶体内膜自身融合 ,顶体内膜外突打褶形成囊泡 ;而且在同一精子的顶体反应中可同时出现多种囊泡化形式 ;(3)精子获能后 ,头部无顶体覆盖的核后区核膜膨胀 ,并与膨胀的质膜融在一起 ;(4 )精子获能后 ,尾部质膜膨胀 ,且主段质膜比中段质膜膨胀明显 ,这可能与超激活运动有关。     

冷冻保存对人类精子顶体蛋白酶的影响

探讨了冷冻保存对人类精子顶体蛋白酶的影响,应用明胶薄层法检测,冷冻保存后精子顶体蛋白酶反应率和成环直径显著减少（ｎ＝３０,Ｐ＜０．０１）．透射电镜观察到冷冻保存后精子（ｎ＝３）头部结构完整性显著降低,提示浆膜、顶体膜超微结构的冷冻损伤与冷冻精子顶体蛋白酶活性丢失和降低有关．冷冻精子穿卵率与顶体蛋白酶反应率不呈相关性（ｎ＝２１,ｒ＝０．３４,Ｐ＞０．０５）,提示两项检测反映的是精子功能的不同方面．     

Effects of ubiquitin-protea-some pathway on mouse sperm capacitation, acrosome reaction and in vitro fertilization

Chlortetracycline (CTC) fluorescence patterns were used to study changes in the patterns B and AR of mouse sperm after incubation with reagents that would block the UPP. They were the monoclonal antibody against ubiquitinated proteins-UCP1; the polyclonal antibody against ubiquitin anti-Ub, and a special inhibitor against proteasome ALLN. Furthermore, we treated the capacitated sperm or the eggs with these reagents separately and tested whether the normal in vitro fertilization was blocked or not. Results illustrate that UCP1, anti-Ub, and ALLN have little effects on sperm capacitation and acrosome reaction,but they do inhibit fusion of mouse sperm with eggs, which suggests that UPP play an important role in mouse in vitro fertilization.``     

野花生豆(Crotalaria mucronata)凝集素的细胞表面受体的研究

研究了异硫氰基荧光素和~(125)I标记的野花生豆凝集素,对A型细胞和牛精细胞表面的凝集素受体的定位、分布和数量。结果表明这些细胞表面的凝集素受体比较复杂,难以用一般动力学方法加以说明。D-葡萄糖、D-甘露糖、D-半乳糖和N-乙酰半乳糖胺等糖类和Con A、PHA、BSA对标记凝集素与A型细胞结合的影响各不相同。通过饱和曲线计算出A型细胞和牛精细胞表面的凝集素受体数目,分别为1.29×10~7和3.09×10~6个/细胞.     

Effects of ubiquitin-proteasome pathway on mouse sperm capacitation, acrosome reaction and in vitro fertilization

Chlortetracycline (CTC) fluorescence patterns were used to study changes in the patterns B and AR of mouse sperm after incubation with reagents that would block the UPP. They were the monoclonal antibody against ubiquitinated proteins—UCP1; the polyclonal antibody against ubiquitin—anti-Ub, and a special inhibitor against proteasome—ALLN. Furthermore, we treated the capacitated sperm or the eggs with these reagents separately and tested whether the normal in vitro fertilization was blocked or not. Results illustrate that UCP1, anti-Ub, and ALLN have little effects on sperm capacitation and acrosome reaction, but they do inhibit fusion of mouse sperm with eggs, which suggests that UPP play an important role in mouse in vitro fertilization.     

Na+-permeable channels of human sperm membrane reassembled into giant liposome

Previous data showed that a Na⁺-transmembrane flux was accompanied with acrosome reaction of sperm. However, the electrophysiological recording and characterization of Na⁺ current in human sperm membrane have not been yet reported. In the present investigation, membrane proteins extracted from human sperms were reassembled into liposome bilayer, and then the liposomes were fused by dehydration-rehydration into giant liposomes with the diameter of more than 10 ώm. By patch clamping the giant liposomes two kinds of single channel currents were recorded in a NaCl solution system. Both of them were Na⁺-carried, TTX-sensitive and strongly rectifying, but with different unit conductance and open probability. Moreover, bursting activity and channel-substates as well as two open time constants were observed in the larger channel.     

巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达rHCMVp的研究

目的：提高人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)在巴斯德毕赤酵母中的表达量,并进行发酵罐高密度发酵。方法：将生长培养基的菌体离心后等量接入诱导培养基中(包括不同体积分数的甲醇、pH值)培养,通过菌体密度检测和发酵液上清的SDS—PAGE结果分析不同条件、不同诱导时间对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响,并依据优化条件进行高密度发酵。结果：摇瓶培养时,转化子在体积分数1％的甲醇pH6．0的条件下诱导72h,A600(菌体密度)为45．2,目的蛋白表达量达到10．2mg／L。2L发酵罐进行了高密度发酵,经体积分数1％甲醇诱导48h,最终A600(菌体密度)达到124,每升发酵液中含目的蛋白57．21mg。结论：通过条件优化,进行高密度发酵,获得大量的rHCMVp。     

酸性成纤维细胞生长因子对人脐静脉血管内皮细胞一氧化氮生成的影响

目的：观察人酸性成纤维细胞生长因子（haFGF）及其非促分裂型突变体（nmhamF）对人脐静脉血管内皮细胞（HEC）一氧化氮（NO）生成的影响。方法：实验分3组,分别为haFGF组、nmhaFGF组和对照组。用Griess反应法检测细胞培养上清NO相对含量（N嘎）。结果：haFGF和nmhaFGF都能诱导内皮细胞NO的生成,但同样条件下,nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量与对照组比较在0．10、1．00、10．00、50．00、100．00ng／mL时均高（P〈0．01）。与haFGF组比较在0．10、1．00、10．00、50．00ng／mL时nmhaFGF组诱导产生NO的相对含量明显下降（P〈0．01）,在0．01和100．00ng／mL时也有降低（P〈0．05）。结论：nmhaFGF仍保留一定的诱导内皮细胞产生NO的作用,但NO生成量有显著下降。