小鼠胚胎干细胞对病毒性心肌炎的影响

目的使用小鼠验证这样一个假设:外界病毒浸入诱发心肌炎时,机体的干细胞将进入心脏提高心肌的抗病毒能力。方法雄性BALB/c小鼠分为三组:小鼠胚胎干细胞对照组(ES),心肌炎病毒组(EM CV)及EM-CV加ES治疗组。通过尾静脉注射,令小鼠立即感染病毒。小鼠死亡率,炎性细胞浸润及心肌坏死等为观察指征。干细胞的游走及分化等通过免疫荧光法来验证。结果给予干细胞后的小鼠的存活率明显高于生理盐水对照组,炎性细胞侵润及心肌坏死亦明显低于生理盐水对照组。免疫荧光法表明,干细胞进入心肌并分化成新的心肌细胞。结论干细胞能明显提高心肌炎小鼠的存活率,减少心肌组织的坏死。同时,亦证明当心脏遭受病毒的侵入后,干细胞通过某种机理修复或再生心肌细胞,从而提高组织的抗病毒能力。     

VPA及其同系物对PrPc在小鼠胚胎干细胞表达的影响

PrP^c在小鼠胚胎干细胞诱导分化形成的胚胎小体（EBs)中有所表达，其表达水平与丙戊酸（VPA）及其衍生物（VPA-A，VPA-B，VPA-C）的DCF值、ROS产量以及VPA-E的浓度成正比，VPA及其衍生物可以使PrP^c的表达上调，抗氧化剂维生素E（V-E）和VPA共同使用，可使VPA诱发的PrP^c表达减少，VPA及其衍生物处理的（EBs)的PrP^c表达水平与它们的胚胎毒性相一致，胚胎毒性越大，PrP^c表达越多，以上结果表明，PrP^c的表达与细胞的氧化还原状态相关，PrP^c很可能参与细胞的抗氧化防御过程。     

不同冷冻保护剂对鸡胚胎干细胞冻存与复苏的影响

通过计算复苏后细胞存活率以及观察细胞生长状态.比较了二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)和甘油3种冷冻保护剂对鸡ES细胞的冷冻保存效果.结果 显示:1)当DMSO的浓度为5%、10%和15%时.鸡ES细胞复苏后的存活率分别为73.57%、85.47%和78.90%;当EG浓度为5%,10%和15%时.复苏后细胞存活率分别为68%、74.30%和67.70%:当甘油浓度为5%、10%,和15%时细咆的复苏存活率分别为31.20%、51.40%和50.60%.在相同浓度下.以DMSO保护效果最佳.EG次之.甘油最差,同一种保护剂.以10%浓度的保存效果最好;2)以DMSO为冷冻保护剂.复苏后的鸡ES原代培养在饲养层上可以较好的生长.并形成集落.当浓度为10%时AKP阳性克隆数最高为23.5个,上述结果提示.以10%的DMsO作为鸡ES细胞的冷冻保护剂效果最佳.     

不同转导方式及载体形式对TALENs在小鼠胚胎干细胞打靶效率的研究

通过同源重组进行小鼠胚胎干细胞基因敲除是目前应用最为广泛的基因敲除技术手段,但同源重组的效率却非常低.TALEs和FokI的剪切结构域融合的TALENs可以实现高效的基因敲除.已有报导表明,TALENs识别位点的DNA序列和长度,及间隔区的长短等条件影响TALENs打靶效率.但外源载体的导入方式及载体的形式(DNA或RNA)是否以及如何影响TALENs的打靶效率还不明确.用不同的转导方式将TALENs导入小鼠胚胎干细胞中,并检测TALENs切割识别位点的效率,实验发现Lipofectamine○R2000转染的TALENs比电转化能更高效地切割目的 DNA位点,而DNA质粒或体外转录的RNA表达的TALENs切割DNA位点的效率相近.数据表明,在应用TALENs进行基因敲除时,有必要选择合适的转导方式以提高突变效率.     

原子力显微镜对BALB/c小鼠胚胎干细胞表面形貌的研究

以BALB／c小鼠胚胎干细胞为对象,在大气下用原子力显微镜对其进行成象。由所获得的原子力显微图象可知,BALB／c小鼠胚胎干细胞呈圆形,表面结构致密,细胞大小不一,并且是中间高四周低的形状。     

异常光照周期对小鼠宫内胚胎的影响

目的　研究不同光照方法导致节律紊乱对生物体胚胎生长、发育和生殖功能的影响。方法　 ( 1)雌小鼠以持续光照、持续黑暗、反相光照三种光照处理一周后 ,与雄小鼠合笼 ;( 2 )雌小鼠与雄小鼠合笼后 ,孕鼠以持续光照、持续黑暗、反相光照三种光照处理至 18日龄。观察整 18日龄孕鼠吸收胎、死胎情况 ,测量活胎身长、尾长 ,称胎重、胎盘重 ,并分离肝脏 ,称重计算肝脏相对重量比。结果　孕前和孕期反相光照组 ,胎重和着床数显著降低 ,吸收胎数显著增加 ;孕期反相光照组 ,死胎数显著增加。孕期持续光照组的吸收胎数显著增加。结论　异常光照周期可影响小鼠宫内胚胎的生长和发育     

久效磷对小鼠早期胚胎体外发育的影响

采用小鼠早期胚胎的体外培养技术,研究了久效磷对小鼠着床前胚胎发育的影响。结果表明,剂量低于0.22mmol/L对小鼠早期胚胎无明显作用,剂量为0.34mmol/L时,70.6％的8细胞胚胎能发育至囊胚,剂量达0.45mmol/L,对小鼠早期胚胎有显著的毒害作用,只有5.7％可以发育至囊胚。在经久效磷处理的小鼠早期胚胎电镜照片上可以看到,细胞内网架结构保持完好,线粒体被破坏,数量变少,空泡变大、增多,细胞内不同结构对久效磷的敏感性有一定差异。     

人骨髓间充质干细胞对小鼠神经干细胞增殖与分化培养的影响

通过在体外培养、鉴定人的骨髓间充质干细胞与小鼠神经干细胞,用骨髓间充质干细胞条件培养基分别在增殖与分化条件下对神经干细胞进行培养.发现,间充质干细胞条件培养基在增殖条件下能加快神经球内神经干细胞的迁移,使神经球解聚,对神经干细胞增殖没有影响;而间充质干细胞条件培养基在分化条件下,能增加神经干细胞向少突胶质细胞分化的能力,降低向星型胶质细胞的分化能力,对向神经元分化能力没有影响,间充质干细胞可能是通过促进神经干细胞迁移、分化而加快神经损伤的修复的.     

稀土氧化物对小鼠胚胎体外发育和胚胎移植影响的初步研究

将稀土氧化物加入人胚胎常用体外培养液 Ham'sF-10中,对2细胞小鼠胚胎进行体外培养。发现稀土氧化物浓度为50～100ppm 时,胚胎发育速度及发育率明显高于 Ham'sF-10对照组,且发育加快现象在培养的24小时内己出现,浓度200ppm以上时,促生长效应逐渐减弱;800ppm 以上时,胚胎发育受抑制也在24小时内出现。将在 Ham'sF-10和含50ppm 稀土氧化物的 Ham'sF-10培养液中培养72小时后发育的囊胚分别移植入两组各9只受体母鼠,两组的受体产仔率没有显著性差别,仔鼠未见畸形或生长异常。     

原代和传代培养的人输卵管上皮细胞对小鼠胚胎体外发育的影响

为了检测人输卵管上皮细胞对早期胚胎体外发育的影响，将小鼠２细胞胚胎与人输卵管上皮细胞进行体外共培养．结果显示：无论原代培养还是传代培养的人输卵管上皮细胞都可使胚胎发育率提高，发育速度加快．经传代４次以后的细胞对胚胎发育的促进作用有下降的趋势，所以传代第１至第４代是应用于共培养的最佳选择．同一代细胞中已贴壁稳定生长的细胞对胚胎发育的促进作用比刚经传代尚未贴壁的细胞大．     

Comparative pluripotency analysis of mouse embryonic stem cells derived from wild-type and infertile hermaphrodite somatic cell nuclear transfer blastocysts

Therapeutic cloning, whereby embryonic stem cells （ESCs） are derived from patient-specific cloned blastocysts via somatic cell nuclear transfer （SCNT）, holds great promise for treating many human diseases using regenerative medicine. Teratoma formation and germline transmission have been used to confirm the pluripotency of mouse stem cells, but human embryonic stem cells （hESCs） have not been proven to be fully pluripotent owing to the ethical impossibility of testing for germ line transmis- sion, which would be the strongest evidence for full pluripotency. Therefore, formation of differentiated cells from the three somatic germ layers within a teratoma is taken as the best indicator of pluripotency in hESC lines. The possibility that these lines lack full multi- or pluripotency has not yet been evaluated. In this study, we established 16 mouse ESC lines, including 3 genetically defective nuclear transfer- ESC （ntESC） lines derived from SCNT blastocysts of infertile hermaphrodite F1 mice and 13 ntESC lines derived from SCNT blastocysts of normal F1 mice. We found that the defective ntESCs expressed all in vitro markers of pluripotency and could form teratomas that included derivatives from all three germ layers, but could not be transmitted via the germ line, in contrast with normal ntESCs. Our results in- dicate that teratoma formation assays with hESCs might be an insufficient standard to assess full pluripotency, although they do define multipotency to some degree. More rigorous standards are required to assess the safety of hESCs for therapeutic cloning.     

超声波对小鼠活动行为的影响及其驱鼠机制研究

为了探究超声波对小鼠行为的影响以及超声波驱鼠器的作用机制,建立评价超声波驱鼠器效果的简便方法,使用市售超声波驱鼠器进行旷场驱离小鼠实验,通过自发活动、高架十字实验和蔗糖水偏好实验统计了小鼠在超声波发生器与超声波驱鼠器胁迫下的行为学变化.结果显示,超声波驱鼠器连续10 d处理,具有驱离小鼠效果.超声波发生器和超声波驱鼠器连续10 d处理都会引起小鼠运动和探索能力下降,诱发其焦虑和抑郁情绪,并且超声波发生器处理引发的上述变化更为显著.本研究可为超声波驱鼠机制提供数据支持,也可为相关驱鼠器的效果评价与研发提供技术参考.     

木质纤维素基生物炭对葡萄糖厌氧消化性能的影响及机理研究

生物炭是提高厌氧消化性能的有效添加剂,由于生物炭性质的多样性和厌氧体系的复杂性,生物炭对厌氧消化的促进机理尚未得到全面认识。以生物质纯组分——纤维素、半纤维素和木质素为原料,分别采用水热法和热解法制备了生物炭,考察了生物炭对葡萄糖厌氧消化的影响,并从微生物分析、官能团组成和电导率等方面探究了其作用机理。结果表明：与对照组相比,生物炭的添加能加快葡萄糖厌氧消化速率,提高消化效率;相较于纤维素和半纤维素,以木质素为原料制备的生物炭的效果更好;以木质素为原料制备的水热炭和热解炭均能在一定程度上富集互养型发酵细菌,这可能有助于促进直接种间电子转移(DIET)机制的建立,从而提高产甲烷速率;生物炭丰富的表面含氧官能团和较大的电导率可能是其强化厌氧消化效果的关键特性;通过变异性分析发现,相较于制备方法,累积产甲烷量对生物炭原料的依赖性更大。     

核糖体蛋白L22对果蝇发育的影响及机制

为了研究核糖体蛋白L22对果蝇发育的影响及其机制,采用RNAi方法,分别在果蝇胚胎、幼虫、眼睛和翅膀中减少L22表达,观察相应表型的变化;S2细胞中敲除L22,统计细胞数目,并通过RT-PCR法检测与细胞凋亡和细胞周期相关基因的表达;三期幼虫翅膀disc中干扰L22,吖啶橙染色.结果表明:L22表达量减少引起胚胎死亡、幼虫发育延缓,眼睛和翅膀发育缺陷,S2细胞数目减少,与细胞凋亡和细胞周期相关基因异常表达,翅膀disc中有明显的凋亡信号.     

发酵花生秧粉对育肥猪生产性能的影响及其促生长机理

研究经复合菌剂发酵后的花生秧粉对育肥猪生产性能的影响及其促生长机理,探讨利用发酵花生秧粉进行育肥猪节粮健康养殖的可行性.以大白×长白×杜洛克三元杂交猪为供试猪,共分为3组,对照组饲喂常规饲粮,实验组Ⅰ饲喂90％常规饲粮+10％发酵花生秧粉,实验组Ⅱ饲喂80％常规饲粮+20％发酵花生秧粉,实验为期40 d,测定并计算各组供试猪的料重比与增重成本,同时采集各组供试猪的新鲜粪样,测定粪样中菌群结构,常规消化酶活力以及常规营养物质含量的变化情况.结果显示:实验组工、Ⅱ与对照组相比,其料重比分别降低11.70％和4.96％,增重成本分别下降9.45％和0.48％,全程成本分别降低4.71％和9.23％;实验组Ⅰ、Ⅱ菌群数量与对照组相比,其大肠杆菌数量分别降低48.75％ (P＜0.01)和40.99％ (P＜0.01),双歧杆菌数量分别提高1.89％ (P＞0.05)和22.78％ (P＜0.05),乳酸菌数量分别提高8.17％ (P＞0.05)和17.13％(P＜0.05),芽孢菌株数量分别提高18.14％ (P＜0.05)和5.42％(P＞0.05);实验组Ⅰ、Ⅱ消化酶活力与对照组相比,纤维素酶活力分别提高15.68％ (P＜0.01)和4.10％ (P＞0.05),蛋白酶活力分别提高2.41％ (P＞0.05)和6.28％ (P＞0.05),淀粉酶活力分别提高17.07％ (P＜0.01)和14.02％ (P＜0.05),脂肪酶活力分别提高2.58％ (P＞0.05)和4.78％(P＞0.05);实验组Ⅰ、Ⅱ试猪粪便中常规营养物质含量与对照组相比,粗蛋白含量都降低9.09％ (P＜0.01),粗纤维含量分别降低5.71％(P＞0.05)和2.86％(P＞0.05),木质素含量都降低4.00％ (P＞0.05),有机酸含量分别降低7.56％(P＜0.01)和9.33％ (P＜0.01),粗脂肪含量分别降低6.67％ (P＞0.05)和14.67％ (P＜0.01),而灰分含量变化不大.研究结果表明:利用发酵花生秧粉饲喂育肥猪可促进动物生长,且大大降低生产成本,为发酵花生秧粉在育肥猪的饲喂养殖中奠定了理论基础.     

Effect of UPP on the expression of VEGF and its receptors in mouse uterus during peri-implantation

On day 3 of gestation ,one uterine horn of female pregnant mouse was injected intraluminally with 5 μL 0.1μg/mL lactacystin,a specific inhibitor of ubiquitin-pro-teasome pathway (UPP),while the contralateral horn served as control ,Animals were sacrificed by cervical dislocation on day 5,6,7 of gestation ,respectively,Then the number of implanted embryos in each uterine horn was calcuated,and the expression of VEGF and its receptors was examined,The data showed that the number of implanted embryos was decreased significantly after treatment with lactacystin ,The results of RT-PCR and Western blot indicated that expression of VEGF and its receptors at mRNA and protein levels was significantly decreased in the treated uterus,menawhile,the expression of HIF-1α(the α subunit of HIF ,a transcrip-tional factor of VEGF) was reduced at both mRNA and protein levels,These data suggested that the effect of UPP on VEGF expression was realized through regulating HIF-1α expression .In addition ,UPP is likely to take part in the modulation of VEGF receptors expression ,These changes may be one of the reasons for the reduction of implanted embryos.     

肾气丸对衰老大鼠心肌、肝脏细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

目的：观察肾气丸对D-半乳糖（D-gal）致衰老模型大鼠心肌、肝脏细胞凋亡及线粒体膜电位的影响.方法：Wistar大鼠随机分为4组,每组10只：正常组,模型组,肾气丸低、高剂量组.制备D-gal大鼠衰老模型,采用流式细胞技术观察心肌、肝脏细胞凋亡及线粒体膜电位变化,ELISA法测定心肌、肝脏组织超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）、丙二醛（Malomdialdehvde,MDA）含量变化.结果：与模型组比较,肾气丸组大鼠心肌、肝脏细胞凋亡率明显下降（P ＜0.05或P＜0.01）,线粒体膜电位明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;心肌、肝脏组织SOD含量均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,MDA含量明显下降（P＜0.05或P＜0.01）.结论：肾气丸可阻断衰老大鼠心肌、肝脏细胞线粒体膜电位的下降,抑制细胞凋亡,其作用机理与肾气丸提高心肌、肝脏组织抗氧化功能有关.     

趋化素样因子1对肾癌细胞ACHN生物活性的影响及其相关机制

多项研究发现,趋化素样因子1(chemokine-like factor 1,CKLF1)是人类多种肿瘤发生和进展的重要调节因子。然而,关于CKLF1对肾癌细胞生物活性的影响知之甚少。通过质粒转染实现CKLF1在肾癌细胞ACHN中过表达,探究CKLF1对肾癌细胞ACHN细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。将实验组pEGFP-N1-CKLF1和对照组pEGFP-N1真核细胞表达质粒分别转染肾癌ACHN细胞,实现趋化素样因子1在ACHN细胞中的过表达。利用荧光显微镜,镜下观察质粒转染效率。利用细胞计数试剂盒8(cell counting Kit-8,CCK8)观察肾癌细胞ACHN转染24、48、72 h后增殖情况;利用流式细胞术检测ACHN细胞转染24、48、72 h后细胞周期的变化情况;利用Hoechst33258染色法观察转染48 h后,ACHN细胞形态变化,利用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。采用Western blot法检测CKLF1过表达后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Bcl-2样蛋白1(Bcl-2 like 1,Bcl-xL)、信号传导及转录激活因子3(signal t...     

硒对NO诱导的内皮细胞损伤的抑制机制研究

用外源性NO供体S－亚硝基谷胱甘肽（GSNO）处理人脐静脉内皮细胞系ECV－304细胞，研究其对细胞的损伤机制，并探讨硒在这一过程中的保护作用，通过MTT法测定细胞存活率，分光光度法[测定细胞LDH漏出率及细胞脂质过氧化水平，采用荧光标记技术研究细胞膜流动性变化，结果表明，NO可引起细胞脂质过氧化水平升高，细胞膜流动性下降，导致ECV－304细胞损伤，其作用具有浓度效应，细胞内硒可通过抑制细胞脂质过氧化水平及细胞膜流动性变化从而抑制NO诱导的细胞损伤。