肝素酶产生菌的筛选及其粗酶性质的研究

肝素酶 (ＥＣ4 .2 .2 .7)是一类能降解肝素类物质的裂解酶 .自Ｋｏｒｎ等在肝素黄杆菌 (Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈｅｐａｒｉｎｕｍ)中发现了肝素酶以来 ,肝素黄杆菌一直是肝素酶的主要来源 .目前的研究表明 ,肝素黄杆菌中有3种肝素酶 :肝素酶Ｉ[1,2 ] 、肝素酶ＩＩ[3] 和肝素酶ＩＩＩ[4 ] .在它们的共同作用下 ,肝素酶能特异性地断裂肝素链上的特定序列 ,从而产生一系列寡糖片段 .肝素酶具有许多重要的医药用途 ,包括体外循环中肝素的消除[5] ,肝素精确结构的确定[6 ] ,肝素抗凝机理及肝素结构和功能的研究[7,8] ,制备低分子量肝素[9…     

硫酸皮肤素寡糖的分离与制备

利用软骨素酶ABC（Chondroitinase ABC,EC4.2.2.4)对硫酸皮肤素（Dermatan Sulfate,DS)进行控制降解。对得到的混合寡糖首先采用低压凝胶渗透色谱（LPGPC）进行分级,然后对每一组分再利用强阴离子交换高压液相色谱（SAX－HPLC）进行分离,最终制备出聚合度为2,4,6,8,10,12的寡糖纯品。寡糖纯度采用SAX－HPLC,毛细管电泳（CE）以及聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行检验,结构采用电喷雾离子化质谱（ESI－MS）以及核磁共振波谱（NMR）技术确定。     

肝素酶Ⅰ对合成的肝素五糖的酶解作用及对其抗Xa因子活性的影响

研究肝素酶Ⅰ（来源于Flavobacterum heparinas,EC4.2.2.7)对人工合成的且含有与抗凝血酶Ⅲ特定结合位点的肝素五糖（SHP）的酶解作用,并对酶解作用的动力学进行研究,利用强阴离子高效液相色谱（SAX－HPLC）对酶解混合物进行分离,利用质谱（ESIMS）和核磁共振波谱（1H－NMR）技术对所得的二糖和三糖的结构进行确证。研究 结果表明,这种被作为肝素反向试剂的肝素酶I可水解人工所合成的肝素五糖,从而使之丧失抗Xa因子活性。     

薄层色谱法分析壳寡糖

建立壳寡糖的薄层色谱（TLC）分析条件。通过对各种展开剂的实验，确定壳寡糖的TLC最佳的展开剂是乙酸乙酯：乙醇：水：氨水=5：5：4：0.3。壳寡糖溶液上行展距为8cm，采用浸渍法显色。本文方法分离效果好，简便，重现性好。     

α-琼胶酶OUC-GaJJ96的异源表达及酶学性质

琼胶酶在功能性琼胶寡糖的酶法制备中发挥着重要作用,目前有关α-琼胶酶的研究较少。克隆表达了来自溶藻性吉尔维菌(Gilvimarinus agarilyticus)的α-琼胶酶,命名为OUC-GaJJ96,并对其酶学性质及水解产物进行研究。该酶属于糖苷水解酶96家族,基因全长为3759bp,编码1252个氨基酸,N端含有26个氨基酸编码的信号肽,蛋白分子质量约为180kDa。酶学性质研究显示:OUC-GaJJ96最适反应温度和最适反应pH值分别为30℃和7.0(Tris-HCl缓冲液),比酶活力为2.68U/mg。通过高效液相色谱和电喷雾离子源质谱对OUC-GaJJ96的水解产物进行分析,结果表明:该酶水解产物是琼二糖、琼四糖和琼六糖,其中琼四糖是主要产物,OUC-GaJJ96可用于制备具有生物活性的琼胶寡糖。     

壳聚糖在近临界水中降解及其工艺研究

目的 采用近临界水降解壳聚糖得到一系列具有生物活性的寡糖，并研究其最佳工艺条件。方法 壳聚糖在自制的超临界流体反应装置中降解，通过红外光谱确定产物的结构，用硫酸一蒽酮法测定寡糖含量，并用薄层色谱测定寡糖聚合度的分布。结果 在近临界水中，壳聚糖能够短时间内降解成小分子产物，寡糖产率随着压力的增大而增大，随着温度升高及时间的增加，寡糖的产率先增后减。结论 壳聚糖在近临界水中降解的适宜压力为25MPa，温度为250℃，时间为5min。     

罂粟花粉中一种寡糖成分的研究

从罂粟花粉中提取纯化得到一种寡糖成分，经纸层析，气相色谱，快原子轰击质谱，核磁共振和甲基化分析证明该寡糖为（１→３，１→６）－ａ－Ｄ－葡萄四糖。     

利用混合微生物酶制剂提高玉米芯饲用价值的研究

采用毛霉Sb-27、黑曲霉Sb-ll固体培养所产生的纤维素酶和木聚糖酶对玉米芯进行酶解，以提高其饲用价值．酶解后的玉米芯中含12．6％的可溶性寡糖．毒理实验研究表明：以此工艺生产的产品安全无毒．证明经酶处理的玉米芯具有广阔的应用前景．     

乙酰肝素酶与甲状腺乳头状癌淋巴结转移的相关性研究

【目的】通过研究乙酰肝素酶(HPA)含量与微淋巴管密度的关系,探讨HPA在甲状腺乳头状癌淋巴结转移中的作用。【方法】采用Envision免疫组织化学两步法检测150例甲状腺乳头状癌和200例结节性甲状腺肿患者乙酰肝素酶、D2-40的表达情况,计算乙酰肝素酶平均光密度值与D2-40阳性标记的微淋巴管密度,分析乙酰肝素酶含量与微淋巴管密度间的关系,同时与结节性甲状腺肿患者微淋巴管密度和乙酰肝素酶含量分别进行比较。【结果】甲状腺乳头状癌患者微淋巴管密度和乙酰肝素酶含量明显高于结节性甲状腺肿患者(P0.01),癌组织乙酰肝素酶含量与微淋巴管密度呈正相关关系(P0.01)。【结论】甲状腺乳头状癌患者乙酰肝素酶与微淋巴管形成有密切关系,乙酰肝素酶可作为其临床疗效判断和新药研发的参考指标。     

6–羧基壳寡糖清除活性氧的能力及作用机理

利用漆酶/TEMPO体系对壳寡糖(COS)分子进行选择性氧化,制备6–羧基壳寡糖(C-COS).通过傅里叶红外光谱(FTIR)、核磁共振波谱(13C NMR)及酸碱电导滴定对样品进行表征分析,并对6–羧基壳寡糖(C-COS)清除活性氧(ROS)能力进行探究.结果表明:漆酶/TEMPO体系成功将壳寡糖氧化为6–羧基壳寡糖...     

半乳糖寡糖的生物活性

对利用固定化β－半乳糖苷酶连续合成的半乳糖寡糖进行了有关生物活性的研究。通过双歧杆蓖培养实验和动物试验证实了半乳糖寡糖具有高效，专一地促进双歧杆菌生长，改善动物肠道内菌群分布，促进钙的吸收，提高食物的转化率，降低血清胆固醇含量及盲肠内ｐＨ等生物活性。     

壳寡糖的薄层层析分析

采用曲霉CJ22-326所产壳聚糖酶降解壳聚糖,得到酶解产物-壳寡糖。采用薄层层析法(TLC)对壳寡糖进行分离。结果显示,薄层层析的最佳条件是:溶剂系统,正丁醇/水/乙酸/氨水,体积比为10:5:5:1;温度为25℃。用0.5%茚三酮溶液显色,其效果最佳。在此条件下利用硅胶制备板,可以分离和制备单体的壳寡糖。     

玉米芯诱导里氏木霉Rut C30产纤维素酶的分析

分别以不同木质纤维素类为碳源(质量浓度均为10,g/L)诱导里氏木霉Rut C30产酶,通过测定诱导过程的产酶曲线,结果表明:以玉米芯为诱导碳源时,各酶组分的产酶水平最高,诱导120,h后纤维素酶滤纸酶活、β–葡萄糖苷酶和木聚糖酶酶活分别为1.53,FPU/m L、0.61,IU/m L和72.86,IU/m L.采用高效液相色谱(HPLC)法分析了玉米芯水解过程中糖的组成及变化,可检测到的单糖包括葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露糖和半乳糖以及纤维二糖等寡糖.诱导产酶实验表明单糖中只有半乳糖可诱导纤维素酶的合成.     

重组谷胱甘肽-S-转移酶-肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中的表达、纯化及其性质

肝素酶Ⅰ（HeparinaseⅠ,HepⅠ）是一种多糖裂解酶,可特异性裂解硫酸肝素分子中糖苷键以制备低分子质量肝素（LMWH）。由于重组肝素酶Ⅰ在大肠杆菌中表达时极易形成包涵体,将肝素酶Ⅰ基因的N端融合谷胱甘肽-S-转移酶（GST）标签,在大肠杆菌中进行低温表达。结果显示,约90%的GST-HepⅠ融合蛋白以可溶性形式...     

酵母寡糖素对丹参发根细胞悬浮培养中生理特性研究

本实验研究了从酵母细胞壁中提取寡糖素诱导丹参发根培养细胞后，过氧化物酶活性和同工酶谱的变化。结果表明，诱导后过氧化物酶活力显提高，过氧化物酶同工酶电泳出现新的谱带，原有的某些谱带增强。     

化学酶法对硫酸软骨素类多糖的定量分析

硫酸软骨素(chondroitin sulfate, CS)类多糖是一类具有多种临床治疗作用的糖胺聚糖。在硫酸软骨素裂解酶作用下，软骨素中葡糖醛酸和N-乙酰半乳糖胺之间的糖苷键发生断裂，可生成不饱和二糖。微生物发酵生产软骨素过程中，多糖定量往往需经过多次纯化以及使用昂贵的仪器进行检测，过程繁琐。文章研究偶联了专一性的酶解法与蒽酮-硫酸法，快速测定复杂培养液中的软骨素类多糖质量浓度。该方法通过超滤去除单糖等小分子杂质后，将多糖用专一性硫酸软骨素裂解酶分解为寡糖，再通过超滤去除大分子杂质，得到的寡糖过滤液使用蒽酮-硫酸法快速测定多糖质量浓度。该多糖定量方法可以选择不同特异性的裂解酶，适用于复杂培养液中其他多糖的快速定量分析。     

发酵法产酶生产几丁寡糖的工艺研究

利用前期获得并经基因工程改造的一株高效几丁质酶降解菌进行发酵产酶法降解几丁质胶体与膜分离相耦合制备几丁寡糖的中试研究.经过中试发酵工艺、酶反应工艺、分离纯化工艺的研究,最终确定了一条高效制备几丁寡糖的中试规模工艺流程,该流程中反应分离一体化,过程实现连续操作,降解酶可以连续使用,提高了收率,降低了成本,有利于实现产业化.通过该流程制备的几丁寡糖混合物含几丁2、3、4糖分别为71.3%、23.5%、2.4%.     

κ-卡拉胶寡糖的酶解制备及其体外抗病毒活性

 利用Pseudoalteromonas sp.AJ5-13菌株所产生的κ-卡拉胶酶降解κ-卡拉胶制备κ-卡拉胶寡糖,通过电喷雾离子化飞行时间质谱（ ESI-TOF-MS）和核磁共振波谱（¹³C-NMR）分析,该酶的水解产物主要是硫酸κ-新卡拉二糖、硫酸κ-新卡拉四糖、硫酸κ-新卡拉六糖、硫酸κ-新卡拉八糖和硫酸κ-新卡拉十糖,确定该κ-卡拉胶酶专门水解κ-卡拉胶3,6-内醚-D-半乳糖和4-硫酸-D-半乳糖之间的β-1,4糖苷键,产生3,6-内醚-D-半乳糖作为非还原端,D-半乳糖作为还原端的κ-新卡拉寡糖。采用体外Vero细胞培养法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法研究了寡糖抗标准单纯疱疹病毒1型(HSV-1)活性 。结果表明,κ-新卡拉寡糖对Vero细胞毒性极低,可干扰HSV-1毒株向Vero细胞的吸附。     

蔗糖酶促水解液相色谱分离耦合过程

在φ１０ｍｍ×１５００ｍｍ色谱柱上，同时进行蔗糖酶促水解与液相色谱分离，制备葡萄糖和果糖．Ｃａ２＋型００３×７离子交换树脂为固定相，稀酶溶液为流动相，系统研究了酶浓度、流速、进料体积、进料浓度对过程的影响，建立了描述过程的数学模型并进行了数值求解．结果表明，采用该耦合方式不仅显著加快水解速率，而且可直接收集到富葡萄糖浆与富果糖浆，减少了下游进一步分离操作的强度与费用．理论计算值与实验值在低浓度下吻合良好。     

寡糖的开发现状及其应用研究进展

近年来，功能性的寡糖已成为糖生物学研究的焦点，它以原料来源广泛、安全和在食品、医药、农业及饲料等行业的生理活性而倍受青睐，对以高分子多糖和氨基糖为原料的寡糖开发现状及国内外寡糖的应用研究进展进行了综述．