补骨脂胰蛋白酶抑制剂的亲和层析分离纯化和部分性质

本文介绍牛胰蛋白酶—对氨基苯砜乙基(ABSE)—Sepharose—4B的制备,及用此亲和吸附剂分离提纯补骨脂胰蛋白酶抑制剂的过程。用该方法对补骨脂胰蛋白酶抑制剂粗提物进行分离,可获得电泳单点纯样品。经SDS—PAGE电泳测定,该抑制剂的分子量为55000。等电聚焦电泳测定其等电点为pⅠ6.6,Chiff试剂染色为阴性。氨基酸组成分析結果表明含12种氨基酸,其中Gly、Glu含量最高。     

赤小豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其性质研究

用酸抽提、2.5％TCA热处理、硫酸铵盐析、凝胶层析和DEAE纤维素离子交换层析等方法,从中药赤小豆中分离得到一种胰蛋白酶抑制剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳呈单一谱带。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,其分子量为7400。N-末端分析和氨基酸组成测定结果表明,赤小豆胰蛋白酶抑制剂不含半胱氨酸和胱氨酸,是以酪氨酸为N-末端,由54个氨基酸残基组成的单一多肽链。它仅对胰蛋白酶有较强的抑制作用,对胰凝乳蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和木瓜蛋白酶均无明显的抑制活力,对热及酸碱亦较稳定。     

章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose 离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂 (Octopus Trypsin Inhibitor ,OTI)．Tricine-SDS-PAGE 电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u．性质分析结果表明:OTI在pH=1.0~11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100 ℃下加热1 h、2 h 后仍分别具有90% 和65% 的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 (MBSP) 引起的肌球蛋白降解．     

猪胰脏胰蛋白酶抑制剂的分离鉴定和性质研究

本文报告用CM和DEAE纤维素离子交换层析从猪胰脏分离出对胰蛋白酶有特异性抑制作用的抑制剂。对该抑制剂的热稳定性,抑制作用的pH范围,分子量及氦基酸组成等进行了分析研究。     

胰蛋白酶抑制剂的药用功能

胰蛋白酶抑制剂是具有抑制胰蛋白酶作用的一类物质.该类物质的来源不同,其活性和作用的酶也不同.基于对近几年国内外相关文献的分析,综述了其多种临床应用功能,说明胰蛋白酶抑制剂是人类重要的药物资源.     

中国野生大豆胰蛋白酶抑制剂的初步研究

采用分离提取,电泳回收,ＰＡＧＥ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,亲和电泳和抑制活性测定等方法,对我国一年生和多年生野生大豆种子蛋白中的胰蛋白酶抑制剂进行了初步研究。在４５°Ｎ来源一的上生野生大豆中得到纯化的胰蛋白酶抑制剂。通过电泳迁移率,分子质量,末端分析和抑制活性等测定,证明中ＳＢＴｉ－Ａ２的Ｔｉ＾ｂ型。     

枯草杆菌蛋白酶水解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究

采用改进的BAPNA法探讨了枯草杆菌蛋白酶对大豆胰蛋白酶抑制的水解作用,通过实验了最适反应条件为：反应温度40－60,PH值7．5－8．5,酶活力大于等于40000units/mL以及40min的反应时间。     

萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

本研究从萨尔瓦多型银合欢(Leucaena leucocephala cv.Salvador)种子中分离纯化出一种新的胰蛋白酶抑制剂,即萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白抑制剂(Trypsin Inhibitor from Leucaena leucocephala cv.Salvador seeds,LlsTI).成熟的种子经粉碎,生理盐水浸提之后,经CM-Sepharose阳离子交换层析得到LlsTI纯品.该胰蛋白抑制剂为19.8kDa的单体蛋白.其N末端测序结果为KGSYLRDVRG,而其内部则含有一段KTAPLVVGFLK的序列,与已知的蛋白酶抑制剂序列都不同,表明LlsTI为一种新的胰蛋白酶抑制剂,同时也含有一部分与已知Kunitz型抑制剂相保守的碱基.LlsTI对胰蛋白酶的摩尔抑制比近似为1∶1.其对于胰蛋白酶属竞争性抑制剂,其Ki值为2.77×10-10 M.LlsTI对胰蛋白酶的抑制活力表现出对高温和pH变化较高的耐受性.但其活性受100mM DTT影响.本研究对LlsTI对其它丝氨酸类蛋白酶的抑制作用也做了测定,其中只有胰蛋白酶的活性受到了抑制.根据圆二色谱的分析结果,LlsTI是一种αβ蛋白,其二级结构在室温下的水和缓冲液Tris-HCl(pH7.5)中组成相似.     

大豆KUNITZ型胰蛋白酶抑制剂的稳定性及抗虫性研究

大豆kunitz型胰蛋白酶抑制剂（SBTi-A2)存在于种子中，2种kunitz型胰蛋白酶抑制剂Ti^a和T^1d得到纯化，并对它们的pH稳定性和温度稳定性进行了比较研究，而且通过人工饮料喂养鳞翅目昆虫棉铃虫来研究SBTi-A2的抗虫性，结果显示，棉铃虫的幼虫喂食含有Ti^a的人工饲料后，表现出生长延缓、体重减轻、羽化率降低、死亡率增加，由此显示了SBTi-A2作为生物农药及利用转基因方法使作用提高抗虫性的应用前景。     

重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂的性质及抑制机理

利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化获得了重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(rBBTI).对比研究了天然Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂(BBTI)和rBBTI的酶学性质和稳定性,以及分别抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制动力学.结果表明:rBBTI和BBTI都有较好的热稳定性,pH对rBBTI的活性影响...     

猪血浆巯基蛋白酶抑制剂的分离纯化及性质研究

用(NH_4)_2SO_4分段盐析,DEAE-纤维素离子交换和Papain—Sepharose亲和层析,从猪血浆纯化了一种巯基蛋白酶抑制剂(SUlfhydryl proteinase inhibitor;简称SPI);纯化倍数为54.36倍.经高pH、低PH不连续电泳呈一条区带.含糖量为7.77％;PI为4.80.氨基酸组成分析表明,猪血SPI富含酸性氨基酸、芳香族氨基酸和含硫氨基酸.用SDS-PAGE和SephadexG-100层析,测得分子量为130000d和131000d,由两个分子量略有差别的亚基组成.对木瓜蛋白酶有强烈抑制作用,对胰蛋白酶无作用。α-螺旋结构含量高。     

小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

层析法分离纯化大豆卵磷脂

本文以大豆油脚为原料,用有机试剂提取制得粗品,后经柱层法分离纯化,获得大豆卵磷脂,经化学和红外等分析,证实其结构。     

玉米巯基蛋白酶抑制剂的纯化及部分性质

从玉米种子纯化的两种巯基蛋白酶抑制剂（ＣＰＩ－Ｉ和ＣＰＩ－Ⅱ）分子量分别为９５００和１３０００,经们都只抑制巯基蛋白酶的水解活性,而对丝氨酸蛋白酶则无抑制作用,属于巯基蛋白酶水解抑制剂,它们在ｐＨ３．０～１１．０或１００℃温度范围内保有１００％的抑制木瓜蛋白的抑制活性,表明在这些外界条件下其分子非常稳定。     

应用高效液相色谱法分离纯化人血尿中的白蛋白

采用高效液相色谱法，以Shimpak DIOL-150(250×7．9mmid)色谱柱分离纯化经过预处理的人体血、尿标本中的白蛋白。血清标本先用饱和硫酸铵溶液沉淀蛋白，再经透析浓缩后上柱分离；尿标本经过滤后直接透析浓缩即可上柱。本法具有效率高、纯度高的特点。     

螺旋藻水溶性多糖的分离纯化

螺旋藻干粉经乙醇脱脂后用水提取,乙醇沉淀,并经凝胶Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ柱层析精制,获得４种螺旋藻制多糖ＳＰＡ－１,ＳＰＡ－２,ＳＰＡ－３,ＳＰＡ－４,研究表明均为均一多糖组分。     

低频超声波对大豆胰蛋白酶抑制素的处理效果

采用２０ｋＨｚ的低频超声波对大豆胰蛋白酶抑制素（ＳＴＩ）进行了处理。结果表明,超声波对经纯化了的鲍曼－贝尔克抑制素（ＢＢＩ）几乎不起钝化作用,对生豆奶中天然存在的ＳＴＩ的钝化效果要比对从大豆中提取纯化的ＳＴＩ好得多,说明纯化了的ＳＴＩ似对超声处理较稳定;豆奶中大分子蛋白组分１１Ｓ和７Ｓ的存在有助地ＳＴＩ的纯化;低频超声波对生豆奶中的ＢＢＩ似乎有轻微的激活作用;在生豆奶中添加半胱氨酸、亚硫酸钠的胃液     

水合氧化钛固定化胰蛋白酶的特性

用简便的水合氧化钛螫合法固定化胰蛋白酶,其残活力可达99.2%,载体可以回收。固定化酶的最适pH为10.3比自然酶高两个pH单位。它的最适温度为55℃比自然酶高0.5℃,自然酶在90℃已完全失去活力,而固定化酶在100℃仍具有20%的活力。稳定性试验显示,自然酶在13小时内活力直线下降到零,而固定化酶在5小时之内活力下降55%,5小时以后下降缓慢,250小时仍具20%活力。     

补骨脂素和异补骨脂素的分离纯化研究

应用高速逆流色谱技术分离和纯化补骨脂中香豆素类成分补骨脂素和异补骨脂素.以补骨脂干燥成熟果实为原料,经乙醇回流制备补骨脂粗提物,经高速逆流色谱分离,所得样品由高效液相色谱检测纯度,并由对照品确定成分.采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(7∶3∶5∶5)作为两相溶剂体系,从补骨脂粗提物中分离得到补骨脂素和异补骨脂素,二者纯度分别达到99.4%,99.1%.该法可以成功用于补骨脂粗提物中补骨脂素和异补骨脂素的分离,并且具有制备量大和分离效率高的优点.