HBD的N端融合蛋白的跨膜转导作用

研究人源性穿膜肽HBD的N端融合蛋白的跨膜转导作用。通过DNA重组技术将HBD融合在EGFP蛋白的氨基端(N端),构建重组质粒pET28b-HBD-EGFP-Histag,经IPTG诱导表达和Ni 2+-NTA纯化,获得重组蛋白HBD-EGFP。通过激光共聚焦显微镜定性观察及流式细胞仪定量检测发现,融合在EGFP氨基端的HBD跨膜转导效率比融合在EGFP羧基端(C端)的HBD转导效率提高了约10倍。实验结果表明,N端融合的HBD-EGFP对于外源蛋白具有跨膜运输效果,且比C端融合的HBD具有更高的跨膜转导效率。该结果可为HBD在抗癌药物递送方面的有效应用提供理论依据。     

细胞的跨膜信号传递功能

无论是单细胞生物还是多细胞生物的每一个细胞,在其生活历程中,无时不刻要受到细胞外界环境中的各种理论因素（如各种化学物质和机械的、电的和一定波长的电磁波、声波等信号）的作用和影响。在这些刺激因素中,除少数[一些脂溶性的小分子类固醇激素、甲状腺素、一氧化碳（CO）和一氧化氮（NO）等]外,不能穿透细胞膜进入细胞内部直接发挥其作用,它们必须经过细胞膜上的跨膜信号传递或称跨膜信号转换机制,转换为细胞内化学信号物（“第二信使”物质和所谓的“第三信使”物质）、膜电位的变化、质膜和细胞内膜的离子通透性改变等后,才…     

细胞的跨膜信号转导功能

本文从几个主要方面对细胞的跨膜信号转导进行了探讨。     

PTD-Tat之C端融合在活体体内的跨膜递送作用

报道了Tat蛋白转导区域(PTD-Tat)的C端融合蛋白在线虫和小鼠体内的跨膜递送作用.将重组表达质粒pGEX-GFP-Tat在大肠杆菌中高效表达出的融合蛋白GST-GFP-Tat对小鼠腹腔注射(ip)17h后,荧光显微镜观察其心、肝和肾组织,均检测到强烈的绿色荧光,甚至该蛋白跨越了血脑屏障(BBB).此外用融合蛋白喂食线虫发现蛋白分布于线虫消化管道及其原体腔,且表现出的跨膜递送活性与喂食时间和蛋白浓度呈现正相关.该研究结果拓宽了PTD-Tat在蛋白药物递送方面的应用范围,为蛋白质疗法开辟了新的视野,并为其有效应用提供理论指导.     

稀土离子的跨膜内流及Verapamil影响的研究

用放射性核素＾１４１Ｃｅ作示踪剂,通过对稀土Ｃｅ＾３＋在大鼠主动脉上的跨膜内流的研究表明,去甲肾上腺素（１．２μｍｏｌ／Ｌ）和ＫＣｌ（１００ｍｏｌ／Ｌ）都要引起Ｃｅ＾３＋跨膜内流量的增加,并以ＫＣｌ（１００ｍｏｌ／Ｌ）引起的增加量较多,钙拮抗剂Ｖｅａｐａｍｉｌ（１μｍｏｌ／Ｌ）对去甲肾上腺素（１．２μｍｏｌ／Ｌ）和ＫＣｌ（１００ｍｏｌ／Ｌ）引起的Ｃｅ＾３＋跨膜内流无明显的阻滞作用。     

膜蛋白跨膜螺旋区段的预测研究

提出了一种基于离散小波变换的预测膜蛋白跨膜螺旋区段数目和位置的方法,并以PDB代码为1F88的膜蛋白为例,描述了该方法对跨膜螺旋区段的数目和位置的预测分析过程。为了测试该方法的实际效果,采用25条膜蛋白序列作为测试集,并将预测结果与5种常用预测方法的主要预测结果进行比较。结果表明,提出的方法具有较高的预测准确度。     

TAT-NEP1-40融合蛋白的表达、纯化及蛋白转导功能的鉴定

为大量获得高纯度具有蛋白转导功能并可以穿过血脑屏障的融合蛋白TAT—NEP1-40,将构建好的表达载体pTAT—NEP1—40转化大肠杆菌BL21（DE3）进行表达后。将融合蛋白进行纯化和复性,鉴定蛋白转导功能。带有重组质粒pTAT—NEP40的大肠杆菌经IPTG诱导后,主要以包涵体形式表达,融合蛋白的分子量大小为14kD,其表达量占菌体总蛋白量的31．59％,纯化后目的蛋白纯度达95．6％,通过免疫组化染色显示融合蛋白可以穿过血脑屏障进入脑组织。上述结果表明利用pTAT—NEP1-40重组质粒,可以成功地表达TAT—NEP1—40;纯化后该蛋白具有穿过血脑屏障的功能,为NEP1-40功能的进一步研究提供了基础。     

正反向Penetratin转导肽细胞穿膜效率的初步比较

目的:实验致力于研究正反向细胞穿膜肽Penetratin携带工具的穿膜效率,为进一步解决大分子药物的临床应用奠定基础。方法:通过质粒构建重组成融合质粒载体pET-28a-EGFP,pET-28a-Penetratin(+)-EGFP和pET-28a-Penetratin(-)-EGFP,分别在BL21(DE3)中进行表达、经过His标签蛋白纯化柱纯化,得到比较纯的融合蛋白,然后用这些蛋白与HeLa细胞共同孵育,进行蛋白质的穿细胞功能检测。结果:His-Penetratin(+)-EGFP和His-Penetratin(-)-EGFP穿细胞膜能力类似,而His-EGFP不具有细胞穿膜功能。结论:经过研究验证正向和反向序列Penetratin穿膜能力类似,并且两种融合蛋白穿膜机制与膜受体无关,属于被动运输的一种,两种融合蛋白对细胞无创伤作用,为开发新药成功建立了技术平台。     

一种跨膜受体偶联离子通道调控网络模型研究

以一种受体偶联钙离子通道为例,讨论了普遍存在的细胞信号跨膜传递中的离子通道启闭的控制功能,对Ｂｒａｙ和Ｌａｙ的跨膜信号传递模型进行了改进,给出了一种跨膜受体偶联离子通道调控的网络模型,运用单细胞显微荧光测量（Ｃａ＾２＋）技术,测量了单个ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞内游离钙离子浓度的变化,说明了此模型能够较好的完成离子通道的控制功能,并给出大关于此模型的一些讨论。     

蓝藻真核型蛋白质激酶与信号传导

对最近10年在蓝藻中找到大量编码Ser／Thr基因的研究结果进行了综述,并对这些蛋白质激酶在信号传导中的作用模式做了讨论．     

膜反应器中填料的应用

在查阅国内外有关文献资料的基础上，综述了目前膜生物反应器中填料的种类、性能、生物膜性能及生物处理的效果，为膜反应器中填料的选择提供了参考。     

酸雨对植物细胞膜透性的影响

阐述了酸雨对植物细胞膜透性的研究现状。通常,酸雨使细胞膜透性增大,酸雨对细胞膜透性的影响与植物种类、品种及其生长的土壤特性等有关。     

膜吸收工艺中溶液对聚丙烯膜结构和形态的影响

为了研究自然溶液环境下溶液对高分子膜结构和形态的影响,该文选择一乙醇胺(MEA)、氨基乙酸钾(GLY)和氢氧化钾(KOH)溶液以及水,采用微重法、扫描电镜(SEM)和红外光谱(IR),以浸渍方法进行了聚丙烯膜在溶液和水环境中表面结构和形态变化的实验,研究了溶液的种类、溶液浓度和浸渍时间等因素对聚丙烯膜的溶胀、结构和表面组成的影响。结果表明,3种溶液对聚丙烯膜的溶胀明显,MEA溶液溶胀最大,水对聚丙烯膜的溶胀很小,影响次序为:MEA>GLY>KOH>H2O;MEA浓度对溶胀率的影响随浓度升高迅速提高,然后又降低。SEM结果表明,MEA溶液使膜微孔孔径明显增大,GLY和KOH影响较小,浸渍时间越长影响越大。红外光谱数据表明,在MEA溶液中膜表面组成变化较大,氨基化合物溶液中的膜表面组成的变化大于在羟基化合物中变化。     

Effect of Aβ1-40 on membrane permeability and intracellular free Ca2+ of nerve cells

The effects of soluble and fibrillar Aβ1-40 on membrane permeability and intracellular free Ca2+ of nerve cells were investigated by the laser confocal microscopy. Results indicate that: i) Effects of soluble and fibrillar Aβ1-40 on cell membrane permeability are both concentration-de- pendent. Soluble Aβ1-40 increases membrane permeability only at concentration of 3 ?mol/L, while the toxic effect of fibrillar Aβ1-40 is much stronger, its evident effect begins from 1 ?mol/L. When its concentration rose to 3 ?mol/L, not only the membrane permeability increased, but also the nuclear membrane broke seriously. ii) Both soluble and fibrillar Aβ1-40 at high concentrations increased the intracellular free Ca2+, and the increased amplitudes are concentration-dependent. However, the fibrillar one induces the increase of intracellular Ca2+ much quicker and synchronously. These results indicate that some correlation exists between the neurotoxicity of high concentration soluble and fibrillar Aβ1-40 and the change of physico-chemical properties and intracellular Ca ion imbalance.     

MBR中中空纤维膜和板式膜不同的膜污染机理

分析了中空纤维膜和板式膜MBR在膜污染过程中表现出的不同特点,研究了2种膜不同的膜污染机理.平行实验表明,中空纤维膜的膜面附着物是污泥泥饼层,而板式膜的膜面附着物是一层二次动态膜,这导致两者的膜污染杌理有显著区别.泥饼层是中空纤维膜的主要污染因素,二次动态膜则可以缓解作为板式膜主要污染因素的膜孔堵塞污染;同时,由于泥饼层的作用,EPS与中空纤维膜的膜污染相关性良好,而在板式膜中,EPS与其膜污染相关性很差,并且二次动态膜显著降低了SMP与膜污染的相关性;在2种膜长期运行时,相比中空纤维膜过膜压力呈现2个阶段的变化,板式膜的过膜压力经历了3个阶段的变化,这是因为二次动态膜起到了初期缓解膜污染、后期加剧膜污染的作用.     

粟酒裂殖酵母质膜ATP酶的制备及活性测定

用小玻璃珠破碎处于对数生长中期的粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ）细胞,将所得到的匀浆液经差速离心,酸处理,不连续蔗糖密度梯度离心,得到质膜ＡＴＰ酶,并对其进行鉴定及活性测定．发现所制备的质膜ＡＴＰ酶对ＮａＮ３不敏感,而对Ｎａ３ＶＯ４具有高度的敏感性,半抑制浓度为１２μｍｏｌ／Ｌ,表明所制备的质膜ＡＴＰ酶较纯,不混杂线粒体ＡＴＰ酶．该酶的最适ｐＨ为６．３,对Ｍｇ２＋有很强的依赖性,对ＡＴＰ有较强的亲和性,Ｋｍ值为１．３ｍｍｏｌ／Ｌ．     

多孔壳聚糖膜固定化脲酶活性的X射线微区分析

以邻苯二甲酸二丁酯为致孔剂,制备多孔壳聚糖膜,用作固定化脲酶的载体.利用X射线微区分析方法,对其活性进行了定位分析:以BaCl2为捕捉剂,在Tris-HCl缓冲溶液中,底物尿素经固定化脲酶催化水解产生NH3和CO2,后者和捕捉剂反应生成BaCO3,沉积在固定化脲酶的催化活性部位.结果表明:BaCl2可用作固定化脲酶活性定位的捕捉剂;多孔壳聚糖膜通透性好、比表面积大、载酶量高,脲酶均匀分布在膜的外表面和膜内的孔隙中.     

耳蜗毛细胞换能的生物物理特性

耳蜗的声感受是通过将大气压的微小波动转换成沿听神经传导的AP而实现的，HC在这-机-电换能过程中起关键作用。近二十年来，HC换能的生物物理特性研究取得许多重要突破，已在诸多方面从根本上改变了人们对听觉机制的传统认识。本文从HC换能模型、IHC与OHC的功能差异以及耳蜗声分析主动机制等三方面对这一领域进行了讨论与展望。