甘糖酯对大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物活性的诱导作用

为了研究甘糖酯对大鼠体内尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase Plasminogen Activator,uPA)活性的影响,采用溶解圈中和抑制法和发色底物法检测了大鼠口服甘糖酯后体内uPA活性的变化情况。结果表明：甘糖酯可提高大鼠体内血液的纤溶活性,主要表现为uPA活性升高。以不同剂量的甘糖酯连续喂药10d后,发现喂药组大鼠uPA活性明显高于对照组,喂药组大鼠血浆uPA活性升高同喂药剂量正相关,在0－100mg/kd的剂量范围内,随喂药剂量增加而升高。提示在一定的剂量范围内甘糖酯可提高大鼠体内uPA活性,激活纤溶系统,提高血液纤溶活性,表现出良好的抗栓作用。     

尿激酶型纤溶酶原激活物对关节软骨蛋白多糖的影响

观察尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator,uPA）对关节软骨基质中蛋白多糖的影响.实验选择健康新西兰大白兔42只并随机分为实验组和对照组,实验组24只,对照组18只;实验组在右膝关节内注射uPA 0.4μg/0.2mL,对照组注射等容量的生理盐水,注射后在4周、8周、12周分批处死取兔软骨提取测定葡糖氨基聚糖（glycosaminoglycan,GAG）含量.结果显示,在不同时期,GAG的总含量均减少,这些改变随时间的延长而渐不明显.由此可知,尿激酶型纤溶酶原激活物能降解关节软骨蛋白多糖,进而导致关节软骨的破坏.     

关节内注射尿激酶型纤溶酶原激活物对关节软骨的实验研究

探讨了尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator,uPA）对关节软骨的影响.选择健康新西兰大白兔42只,随机分为实验组和对照组,实验组24只,对照组18只;实验组在右膝关节内注射uPA 0.4μg/0.2mL,对照组注射等容量的生理盐水,在注射后4周、8周、12周分批取兔软骨进行组织学观察及电镜检查.结果显示：实验组关节软骨表面不规则、缺损及结构破坏,软骨细胞数目减少、纤维增生及异染性降低,潮线的完整性破坏.结果表明：尿激酶型纤溶酶原激活物可能是导致关节软骨破坏的相关因素之一.     

用尿激酶型纤溶酶原激活物建立兔骨关节炎模型的研究

为探讨在兔膝关节腔注射尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plasminogen activator, uPA）,建立兔膝关节骨关节炎动物模型的可行性.选择健康新西兰大白兔42只并随机分为实验组和对照组,实验组24只,对照组18只;实验组在右膝关节内注射uPA0.4μg/0.2mL,对照组注射等容量的生理盐水,注射完成后在4周、8周、12周分批取兔滑膜进行组织学观察、取软骨行组织学观察及电镜检查.结果显示：实验组兔膝关节滑膜均存在不同程度增生、肥厚、水肿,光镜及电镜下见实验组关节软骨呈明显退行性变.Mankin＇s评分实验组得分显著高于对照组（P〈0.05）.结论：兔膝关节注射uPA可使滑膜发生炎症、关节软骨发生退变,而且随着时间退变的程度逐渐加重,这一模型可为研究膝关节OA的病因、发病机理及治疗方法提供实验工具.     

尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)系统在子宫内膜癌中的研究进展

尿激酶型纤溶酶原激活系统是纤溶系统的重要组成部分，它通过水解细胞外间质，参与组织改造和细胞迁移，在肿瘤细胞的侵袭和转移中发挥作用；讨论了uPA系统的结构、作用机理及与子宫内膜癌的关系，旨在为子宫内膜癌的诊断和治疗提供新方法。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂在小鼠皮肤创伤修复中的作用

观察uPA在小鼠皮肤创伤修复中的作用,以及外源性应用uPA对损伤表皮创伤修复的超微结构变化。在创伤部位外源性应用uPA后,利用光镜及扫描电镜等方法,比较观察了不同时间及浓度的uPA对损伤表皮组织修复,尤其是基底细胞迁移的影响,结果发现uPA浓度为100μg/mL及200μg/mL时,与对照组比较,基底细胞提前发生迁移,较对照组早1h。创伤部位外源性应用uPA,有利于表皮基底细胞的迁移,这种促进细胞迁移作用可能对于治疗皮肤创伤早期愈合有重要影响。     

Kunitz抑制剂家族成员抑肽酶对纤溶酶原活化的抑制作用

抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员，能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性．研究表明，抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活刹（u—PA）和组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）对纤溶酶原的激活，但不影响u—PA和t—PA对小分子底物的酰胺水解活性．用u—PA研究了上述作用的机制，发现抑肽酶与u—PA的丝氨酸蛋白酶功能区特异性结合，而与纤溶酶原没有相互作用．抑肽酶与uPA的结合并不阻断u—PA的活性位点，因为u—PA对小分子底物的水解活性仍然保持．上述发现提示抑肽酶可能存在另一种抑制作用模式，该模式不同于以前报道的关于Kunitz抑制剂或纤溶酶原激活酶抑制剂的作用．由于人体内的Kunitz抑制剂与抑肽酶在结构上非常相似，根据研究结果，推测体内纤溶酶原的激活作用并非仅受丝氨酸蛋白酶抑制剂的控制。     

I型纤溶酶原激活物抑制剂基因表达的调控及作用机制

I型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI1)在基因表达过程中存在各种调控机制,如基因转录中有PKC介导的转录调节和胰岛素及胰岛素样生长因子1的上调等;转录后许多生长因子也对PAI1起调控作用;另外,文章也进一步阐述了PAI1与体内其它蛋白质之间的相互作用关系。     

碳源及氮源Trichoderma reesei306对组织型纤溶酶原激活剂生物合成的影响

本文对不同种类的碳．氮源对Trichoderma reesei306组组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)生物合成的影响进行了研究。结果表明：在所试的各种碳氮源中，碳源以玉米粉和纤维素，氮源以尿素和胰蛋白胨效果最好，通过正交试验确定了液体发酵培养基中碳氮源的最佳组成为：玉米粉20g／l、纤维素30g／l、尿素10g／l、胰蛋白胨2g／l，优化碳氮源后t—PA酶活提高了26％。     

用静息细胞培养法研究影响组织型纤溶酶原激活剂生物合成的因素

建立了基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)306生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)的静息细胞培养系统。确定静息细胞培养基的成分为：葡萄糖1．0g／L，尿素1．0g／L，K2HPO41．0g／L；静息细胞培养的条件为：选择发酵30h的菌体，10％的接种量，pH5．4，150r／min，28℃静息培养12h。并在该静息细胞培养系统中，研究了糖类、有机酸、氨基酸和金属离子等因素对里氏木霉306生物合成组织型纤溶酶原激活剂的影响。     

组织型纤溶酶原激活剂突变体基因转染细胞株的建立

以脂质体介导法将含有t-PA突变基因的真核表达载体pCSRA及pCSRK分别转染CHO-dhfr^-,经G418及DMEM双重选择,获得两者的稳定表达细胞株。结果表明,表达产物具有良好溶纤活性;Western印迹实验证明,产物具有特异抗原性;经多次传代,细胞株具有良好的稳定性。比较了无血清培养基CHO-S-SFMⅡ与常规培养基DMEM培养条件下pCSRK细胞株产物的表达量,前者约为后者的2倍,表明无血清培养基SFM有可能用于药用性蛋白的生产。实验为t-PA新型突变体的临床应用打下一定基础。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达、复性及分离纯化

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ—ＰＡ）。ＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中，在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％．以醋酸钟显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ—ＰＡ表达条带，进行复性处理．Ｒ性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ—Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ—ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ—ＰＡ．     

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的药效学研究

犬静脉给予重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)1×106IU/kg、5×105IU/kg、2.5×105IU/kg对冠脉血栓产生显著的溶栓效果,栓塞冠脉血管很快出现再通,高、中、低剂量组残存血栓较溶剂对照组分别减少了72.7%、55.6%、42.5%;心肌梗死范围明显缩小.血纤维蛋白原明显降解,凝血酶原时间、凝血酶时间及陶土激活部分凝血酶时间明显延长,但抗凝血酶活性无显著改变.伤口出血量增加,出血时间延长.以上指标与等剂量(5×105IU/kg)的德国BoehringerMannheimGmbH产品Retavase作用相似.离体家兔血小板凝集实验结果表明:重组人K2tPA对家兔血小板聚集功能具有明显的抑制作用.     

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的工业化制备与性质研究

将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20％,表达产物经体外变复性、TI—Sepharose亲和层析、SP-Sepharose离子交换层析,每100L发酵液得重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)纯品4g,纯度达95％以上,比活大于500000IU／mg,内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准．其分子量(质谱测定)、氨基酸组成、N、C-端氨基酸序列分析等均与理论值相符．同时进行了等电点测定及肽图分析等性质研究．     

重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体基因的克隆及工程菌的构建与鉴定

利用RT-PCR技术,从人脐带静脉上皮细胞中克隆人组织型纤溶酶原激活剂基因,将其接入TA克隆载体PCR2．1中,经DNA序列测定后,以该重组质粒DNA为模板,用PCR方法获得了人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)基因,将其转入pET29a,构建了重组表达质粒pET29a／K2tPA,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,构成工程菌．经IPTG诱导表达,在40kDa处有一明显表达条带,表达量为约占菌体总蛋白的20％．该菌种在贮存与复苏及传代过程中具有良好的质粒稳定性和表达稳定性．     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

大鼠口服古糖酯后尿液中糖胺聚糖的变化及其对一水草酸钙晶 …

通过对尿液总糖胺聚糖的含量测定,尿液古型古糖酯的检测以及尿液对一水草酸钙晶体生长和聚集抑制率的变化,研究大鼠一次性口服古糖酯后,三天内尿液糖胺聚糖的变化,以及尿液对一水草酸钱晶体生长和聚集抑制率的变化。结果表明,大鼠口服古糖酯后,尿总糖胺聚糖含量在第一天和第二天显著升高,第三天恢复到原有水平。与之对应,尿古型古酯在第一、二天可以测到,第三天消失,尿液对一水草酸钙晶体聚集抑制活性显著增强,但对晶体的     

醚型拟除虫菊酯（MTI—500,MTI—800）对淡水鱼的毒性试验及评价

本文对MTI-500,MTI-800及其他类型拟除虫菊酯杀虫剂进行鱼类毒性试验,测得24,48,72,96小时半致死浓度LC_(50).结果表明除了MTI-500,MTI-800外其他均为高鱼毒其中I-800毒性最低.     

青黛膏联合NB-UVB对寻常型银屑病（血热证）患者的疗效研究及对IL-17和VEGF水平的影响

观察青黛膏联合NB-UVB光疗仪治疗寻常型银屑病（血热证）的疗效及对外周血白细胞介素-17(IL-17)及血管内皮生长因子（VEGF）含量的影响。选取门诊病例中符合寻常型银屑病(血热型)患者72例,随机分为2组,治疗组外用青黛膏+NB-UVB照射,对照组外用卡泊三醇+NB-UVB照射,治疗8周后观察效果。治疗组总有效率（94.12%）优于对照组（76.48%）,差异有统计学意义（P<0.05）;2组治疗后PASI评分、瘙痒评分均较治疗前同组显著降低,差异具有统计意义（P<0.05）;2组治疗后血清中IL-17、VEGF水平均下降,治疗组治疗后IL-17、VEGF下降程度优于对照组,且差异有统计学意义（P<0.05）;青黛膏联合NB-UVB对寻常型银屑病(血热型)治疗效果明显,且有效下调IL-17、VEGF水平。