乙肝病毒基因上一个新的维甲素受体反应元件的发现

在对人乙肝病毒ＡＤＲ－１进行计算机序列检索时，发现在Ｂａｍ ＨＩ和ＨｉｎｃⅡ酶切位点内存在一保守的维甲素受体反应元件序列。用构建好的包含这一片段的乙肝病毒基因亚克隆ｐＢａｍＨＩ－ＨｉｎｃⅡ－ＣＡＴ２与人维甲素Ａ受体ｈＲＡＲα或人维甲素Ｘ受体ｈＲＸＲα共转染人特异性肝癌细胞ＨｅｐＧ２，通过相应配体ＡＴＲＡ或９－ｃｉｓＲＡ的刺激，使细胞内氯霉素乙酰基转移酶活力较不加配体刺激的对照细胞明显增强。为了排除     

人免疫缺陷病毒2型(HIV-2)穿膜蛋白基因片段克隆表达

以人免疫缺陷病毒２（ Ｈ Ｉ Ｖ２） 的原病毒基因组为模板,通过套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增得到了 Ｈ Ｉ Ｖ２ 的一段特异性膜抗原蛋白基因片段;随后将此片段克隆入诱导表达载体ｐ Ｇ Ｅ Ｘ５ Ｘ１ ,获得了重组表达质粒ｐ Ｇ Ｅ Ｘ３６ Ｅ Ｎ Ｖ． Ｉ Ｐ Ｔ Ｇ 对重组表达菌株诱导后, Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 结果显示重组菌株有特异性表达蛋白带产生     

分离与克隆中国人TPO基因片段及序列分析

应用ＲＴＰＣＲ技术从中国人胎肝细胞中分离出１个５６６ｂｐ大小的基因片段,经过克隆、限制性内切酶鉴定和序列分析证实为ＴＰＯ的ｃＤＮＡ片段．与ＧｅｎＢａｎｋ中发表的人ＴＰＯｍＲＮＡ的序列比较同源性在８２％～９９％之间,仅有２个碱基不相同,在１７５位密码子（５２３～５２５位的碱基）分别是ＣＧＧ和ＣＡＡ,即精氨酸（Ｒ）的位置上,中国人是谷胺酰氨（Ｇ）．而与测得的韩国人序列比较,在相应位置的氨基酸是相同的     

中枢神经系统中GABA_A受体的亚单位组合

分子生物学研究阐明中枢神经系统中抑制性神经递质γ氨基丁酸 Ａ 型（ Ｇ Ａ Ｂ Ａ Ａ）受体由不同的蛋白质亚单位组合构成。至今,１５ 种亚单位,即６ 种α（α１α６ ）、３ 种β（β１β３）、３ 种γ（γ１γ３）、１ 种δ和２ 种ρ（ρ１ρ２）已被克隆和定序,而且还发现存在２ 种γ２（γ２ Ｓ和γ２ Ｌ）、２ 种β４及γ４亚单位形式。每个亚单位由位于不同染色体上的不同的基因编码,它们在脑中具有不同的而又可交叉的区域分布。不同区域的由不同亚单位组合的 Ｇ Ａ Ｂ Ａ Ａ 受体具有不同的药理学和生理学特征     

N-亚水杨基甘氨酸Schiff碱与硫酸钕配合物的合成和表征

用硫酸钕与Ｎ亚水杨基甘氨酸Ｓｃｈｉｆ碱在水溶液中反应,合成了钕的Ｓｃｈｉｆ碱配合物Ｎｄ２（ＳａｌＧｌｙ）２ＳＯ４·２Ｈ２Ｏ（Ｓａｌ＝亚水杨基,Ｇｌｙ＝甘氨酸）,并用元素分析、摩尔电导、红外光谱、电子光谱、荧光光谱和差热热重分析对其组成和性质进行了研究．     

人锰超氧化物歧化酶cDNA基因的克隆

利用人胚胎肝组织提取总ＲＮＡ,从总ＲＮＡ 中分离纯化出ｍ ＲＮＡ,经逆转录得到ｃＤＮＡ 第一条链,并以之为模板和相应寡聚脱氧核苷酸为引物,进行ＰＣＲ 合成人锰超氧化物歧化酶ｃＤＮＡ 基因,将所得ｃＤＮＡ 克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ 上,转化大肠杆菌ＤＨ５α细胞,进行诱导表达筛选,将筛选的克隆进行ｃＤＮＡ 全序列测定     

人卵巢癌细胞靶向多肽的筛选与初步鉴定

采用改良的生物淘筛(Biopanning)流程,以人卵巢癌细胞为靶细胞进行5轮消减筛选,从噬菌体展示12肽文库(Ph.D-12phage displayed peptide library)筛选到靶向人卵巢癌的12肽克隆,通过ELISA、细胞免疫荧光法等方法从细胞水平鉴定了最佳阳性多肽噬菌体克隆R20靶向卵巢癌细胞的特异性和敏感性。结果显示:R20可以特异的、敏感的与卵巢癌细胞SKOV3结合,不与正常细胞或者其他癌细胞结合,具备进一步研发为卵巢癌导向分子元件而应用于卵巢癌靶向诊治试剂或药物研发的潜力。     

满江红鱼腥藻glnA基因上游调控区的克隆及其序列分析

以满江红鱼腥藻（Ａａｃ）提取总ＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ技术,扩增得到其谷氨酰胺合成酶基因（ｇｌｎＡ）上游区．经酶切得到４０９ｂｐ的片段,并将其连接到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡｋｓ＋上测序．将测序结果与Ａｎａｂａｅｎａ７１２０调控序列比较,有９８２％的同源性．在上游调控中也具有ｎｉｆｌｉｋｅ和Ｅ．ｃｏｌｉｌｉｋｅ启动子,值得注意的是,调节蛋白ＶＦ１的结合位点正好位于ｎｉｆｌｉｋｅ启动子上．所克隆的片段不但对蓝藻固氮、泌氨的基因调控研究具有意义,也对表达载体的构建具有实用价值．     

大鼠谷胱甘肽S-转移酶P1基因增强子及其反式作用因子的研究

探讨大鼠谷胱甘肽S-转移酶P1基因上游增强子元件及作用于其上特异性结合蛋白与该基因在癌细胞中高表达的关系,用荧光素酶报告系统在HeLa及CBRH7919细胞中确定了增强子元件Ⅰ(GPEⅠ)及增强子元件Ⅱ(GPEⅡ)的活性,并将GPEⅡ的增强子活性部位定位于其上游84bp的GPEⅡ-1区域内．分析对比不同细胞中结合于GPEⅠ核心序列(cGPEⅠ)、GPEⅡ-1上特异性核结合蛋白,发现HeLa,CBRH7919细胞中存在的cGPEⅠ特异性结合蛋白及GPEⅡ-1特异性的64ku结合蛋白在正常大鼠肝细胞中则不存在．因此,上述反式作用因子可能与GPEⅠ,GPEⅡ的增强子活性及该基因在癌细胞中高表达密切相关．     

半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用

常规ＰＣＲ方法在分离克隆已知序列的基因中发挥着重要的作用，但要求目的基因片段与引物间的同源性几乎是１００％，一旦引物序列与目的基因间存在有差异，便往往会导致扩增的特异性不强，扩增效率不高，给克隆带来很大的困难．在常规ＰＣＲ基础上，若所分离的基因在不同植物间存在保守序列，依据这一序列再合成一对引物，进行半套式ＰＣＲ则能大大提高扩增的特异性及扩增效率．对于较长的基因片段而言还能同时完成亚克隆．本文依据南瓜ＧＰＡＴ（甘油－３－磷酸酰基转移酶）基因ｃＤＮＡ序列及比较拟南芥菜、豌豆间在该基因内的保守区段序列合成相应引物来分离克隆黑子南瓜及西瓜ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ片段为例来说明半套式ＰＣＲ技术在植物基因克隆中的应用     

火试金技术的发展与应用

回顾了过去的60年,我国在火试金技术的发展与应用方面取得的成就,其中以铅试金法的发展与应用为主要内容及20世纪50年代以来为解决铂族元素的富集问题相继创立的有：铜铁镍试金法、锡试镍试金法、锡试金法、铜试金法、锑试金法和铋试金法等新的试金法进行综述。这些新试金法的建立大大丰富了火试金技术的内容,同时对贵金属的分析与贵金属地质标准物质的研制起到了极大的推动作用。本文拟就铅试金法、镍锍试金和锑试金法、铋试金法在地质样品中测定贵金属和在贵金属地质标准物质的研制工作中的应用与地位进行综述,并对锡试金法、铜铁镍试金法和铜试金法简要介绍。     

微囊化间充质干细胞活力检测方法比较

对微囊化间充质干细胞(MSCs)采用EB/Calcein-AM和MTS/PMS细胞检测新方法,并与传统的台盼兰及MTT染色检测法进行比较,探索适合于微囊化细胞活力检测的方法.研究表明:分别采用EB/Calcein-AM,台盼兰,MTT,MTS这4种方法,检测海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊内MSCs细胞活力,传统的台盼兰与MTT检测法不适用APA微囊化MSCs细胞活力检测,EB/Calcein-AM与MTS是检测APA微囊化MSCs细胞活力的有效方法.     

偶联酶法检验L-天冬酰胺酶的动力学分析

根据McClure偶联酶反应理论,通过实验对偶联酶法检验L-天冬酰胺酶活力的反应条件进行了动力学分析,确定了合理的附加酶用量,建立了偶联酶法检验此酶活力程序。用该程序测定的底物K_m值和产物的抑制常数K_1值与文献值相符。     

尿激酶原活性测定方法研究

以双链尿激酶国际标准品（IS）为对照，用显色底物法和凝块溶解法测定糖基化和非糖基化的尿激酶原的酶活性，结果表明与凝块法相比，显色底物法测定两种形式的尿激酶原的酶活力相近，测量误差小，重复性好，更适于产品的质量控制。     

细胞活性测定方法研究进展

细胞活性测定是体外筛选抗肿瘤药物和临床肿瘤药敏试验的重要方法之一;细胞活性的测定方法有MTT法、SRB法3、H-TdR掺入法、LDH法等,根据不同细胞系及其测定原理,它们有各自的优缺点及最适测定条件;概述了近年来细胞活性测定的几种常见方法、原理及应用特点。     

高效液相色谱法测定Vismodegib的含量

建立反相高效液相色谱法测定Vismodegib含量。采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(50∶50)为流动相,检测波长:230 nm,流速:1.0 mL·min-1,进样体积为20μL,柱温为室温。在以上色谱条件下Vismodegib与有关物质完全分离,且在10~80μg·mL-1的范围内浓度与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 6,n=6);检测限为3.8 ng,定量限为12 ng;精密度试验的RSD(n=6)为0.30%;重复性试验的RSD(n=9)为0.45%;稳定性试验结果表明供试品溶液在10 h内稳定。建立的液相方法精密度高,准确度好,测定灵敏,可用于Vismodegib的质量控制。     

用荧光双链引物特异扩增并定量核酸

描述了一种利用特殊的双链引物－－突触引物，用于核酸扩增的特异定量检测，在传统的引物的5'端标记荧光物质，而在引物的互补序列的3'端标记荧光淬灭剂以封闭其延伸。二者杂交即成双链突触引物。在制备PCR反应混合物阶段以及加热的初期，突触引物保持稳定的双链结构而不能引导扩增，在退火阶段，突触引物部分解链导致引物延伸，荧光物质与淬灭剂分开而产生荧光。利用人β珠蛋白基因对此方法进行了验证。这种可自行退火的荧光引物不仅简单地实现了实时扩增，同时比常规的热启动PCR更有效地提高了扩增的特异性。     

抗菌肽琼脂糖孔穴扩散法与比浊法测活比较及其相关性

以大肠杆菌Ｋ１２Ｋ３１为标准菌株，采用琼脂糖孔穴扩散法和比浊法相结合，对抗菌活性活力进行测定。通过细菌浓度的变化和抑菌圈大小来确定样品的活力单位，生物统计结果表明，活力单位（ｕ）与抑菌属直径（ｄ）两者之间存在定量在正相（ｕ＝０．０６ｄ）。     

不同寄主红花寄生叶提取物抗氧化能力的研究

采用FRAP法和TEAC法测定了6种寄主植物(女贞、石榴、荷花玉兰、长梗柳、桑、夹竹桃)来源的红花寄生叶提取物抗氧化能力,并采用RP-HPLC检测了提取物中槲皮素和山奈酚质量分数.结果表明:红花寄生叶提取物具有较强的抗氧化能力,且活性强弱受不同提取剂和寄主植物的影响显著(p＜0.05).在3种提取剂中,以体积分数为80...