Corticosterone activates Erk1/2 mitogen-activated protein kinase in primary hippocampal cells through rapid nongenomic mechanism

Nongenomic effects of glucocorticoids (GC) in various cell types have been well documented, but it still remains unknown whether the mechanism also works in hippocampus which is a crucial target of glucocorticoids in neural system during physiological and/or pathophysiological processes. We present here that corticosterone (B) could rapidly activate Erk1/2 mitogen-activated protein kinase (MAPK) in primarily cultured hippocampal cells within minutes, with a bell-shaped time dependent curve which peaked at 15min and then went down to normal level in 30 min. This activation was blocked by protein kinase C (PKC) inhibitor (Go6976), G protein inhibitor (GDPβs), and MEK(MAPK/extracellular signal-regulated kinase kinase) inhibitor(PD98059), but not by protein kinase A (PKA) inbibitor (H89), tyrosine kinase inhibitor (genistein), and glucocorticoid receptor ( GR ) antagonist (RU38486). Thus, the rapid activation of Erk1/2 MAPK in primary hippocampal cells induced by B was likely mediated by a G protein coupled receptor (GPCR) pathway with involvement of PKC, which belonged to the nongenomic rather than genomic mechanism of GC' s effects.     

高浓度糖皮质激素对垂体-肾上腺轴的影响

本项目研究糖皮质激素反馈对糖皮质激素快速抑制垂体细胞中CRH刺激引起的ACTH分泌的作用。来源于雄性大鼠的垂体前叶细胞,以无血清培养基灌注2h后,30pM CRH可诱导ACTH稳定分泌,只有应激水平的皮质酮(1μM)对ACTH的分泌产生延迟的抑制作用;以无血清培养基孵育6h后,基础水平的皮质酮(10nM)快速抑制ACTH的分泌。放射免疫化学法检测结果显示预孵育2h和6h的培养基中残留的皮质醇分别为19.3nM和7.2nM。蛋白免疫印迹结果显示,基础生理条件下,预孵育6h的细胞细胞膜蛋白和细胞核蛋白中GR含量比预孵育2h的细胞更低一些;并且皮质酮刺激诱导预孵育6h的细胞中GR向细胞膜转运,而预孵育2h的细胞在皮质酮刺激下细胞膜蛋白GR含量未见增加。皮质酮对ACTH分泌的抑制不被嘌呤霉素或放线菌素D阻断。这些数据表明垂体中糖皮质激素反馈的敏感性取决于皮质酮给药前细胞所处环境的激素浓度。     

脑室注射r-氨基丁酸(GABA)对大鼠垂体-甲状腺分泌功能的抑制效应

脑室注射10μl含8molGABA的人工脑脊液后60min,大鼠血清TSH、T4、T3含量与注射人工脑脊液的对照组比显著降低(P<0.001、0.01、0.05);若在注射GABA前1min,预先注射10μl多巴胺受体阻断剂氟哌啶醇(5g/1)、10μl肾上腺素受体阻断剂酚妥拉明(10g/1)或10μlGABA受体阻断剂青霉素(3.35×10~(-2)mol/l),可以阻断GABA对TSH、T4、T3分泌的抑制效应.结果证明脑中GABA能系统参与垂体-甲状腺功能的调制,提示GABA通过多巴胺能和肾上腺素能神经元,抑制下丘脑分泌TRH,从而影响垂体分泌TSH,最终抑制了甲状腺的分泌功能.     

NO对新生大鼠心肌细胞PKC活性的影响

利用培养新生大鼠心肌细胞，检测NO前体L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)和NO供体硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)对PKC活性的影响，并探讨内、外源性NO在PKC激动剂佛波指(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)激活PKC中的作用.实验结果表明：培养基中加入L-Arg，PKC活性呈剂量依赖性降低；用L-Arg进行预处理，30 min后加入PMA，PKC活性明显降低，与单纯PMA组相比有显著差异；NOS抑制剂L-NAME本身对基础状态PKC活性无明显影响，但可阻断L-Arg对上述2个效应的影响；培养液中加入NO供体SNP，PKC活性呈剂量依赖性降低；用SNP预处理心肌细胞，5 min后加入PMA，PKC活性与单纯PMA组相比有显著性差异.以上结果表明，内、外源性NO均具有剂量依赖性抑制PKC活性的作用，PKC可能是NO对心肌细胞作用的胞内信号传导通路的关键部位或重要信号分子之一；L-Arg通过NOS先生成NO，NO再对PKC起抑制作用.     

外源性VD3缓解运动诱导的慢性疲劳综合症的机制

研究了补充VD3缓解运动诱导的慢性疲劳综合症(CFS)的机制。将80只小鼠随机分5组(n=16),即安静对照组(C组)、CFS造模组(CFS组)、VD3组又分为造模前组(bVD组)、过程中组(mVD组)和造模后VD干预组(aVD组)。造模、干预持续4周,全程行为学观察,4周后进行力竭测试和悬尾实验,再迅速采血并切取股四头肌组织。测定血睾酮、血清皮质酮及股四头肌组织的MDA、T-AOC、GSH-PX和T-SOD,采用Western Blotting测定SIRT1、SIRT3、ERK1/2、p-ERK1/2和MEK1/2。结果表明:与C组比较,CFS组小鼠打斗损伤严重,血睾酮及MEK、SIRT3显著降低(P0.05),皮质酮、MDA、T-SOD、GSH-PX显著增加(P0.05);与CFS组比较,VD干预组小鼠打斗损伤较轻,皮质酮、MDA显著降低(P0.05),血睾酮、T-AOC、T-SOD、GSH-PX及MEK、SIRT1、SIRT3和p-ERK/ERK均显著增加(P0.05)。外源性补充VD3可提高骨骼肌抗氧化能力,缓解运动诱发的CFS症状,其机制可能是通过激活MEKs/ERKs-SIRT1信号通路,降低MEK表达,增加ERK磷酸化水平,上调SIRT1和SIRT3表达而实现。     

ATP对大鼠体温调节的影响

通过腹腔注射及在体和离体下丘脑视前区(POAH)微量给药的方法,观测ATP对大鼠体温调节的影响。结果显示：(1)腹腔注射ATP有明显降体温作用,降温幅度和作用时间具量-效关系。去甲肾上腺素β受体阻断剂(心得静)可抑制ATP的降温作用,表明ATP在外周的降温作用可能是由交感神经系统中介的;(2)POAH微量注入低剂量的ATP使体温下降,其作用被ATP受体P₂的阻断剂(ReactiveBlue2)所阻断,表明ATP的降温作用是通过P₂型受体起作用的;注入高剂量的ATP使体温上升,其机制与ATP络合Ca²⁺的作用相关;(3)离体脑片给在体的研究以佐证,高和低浓度的ATP分别抑制和易化POAH热敏神经元的自发放电活动,表明ATP可能是直接通过影响POAH温敏神经元放电活动参与体温调节的。     

慢性应激性抑郁发生中海马糖皮质激素对BDNF的影响

为证明慢性应激性抑郁的发生与应激引起的糖皮质激素(Glucocorticoids,GCs)分泌增加,导致海马脑源性神经营养因子(Brain Derived Neurothrophic Factor,BDNF)表达抑制有关.实验用大鼠通过建立慢性不可预见性温和应激(Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS)抑郁模型,通过海马微量注射皮质酮及糖皮质激素受体拮抗剂米司非酮,然后测量体重,观测行为学表现,并用酶联免疫吸附法检测海马内GCs和BNDF含量.结果显示:CUMS明显诱发大鼠抑郁样行为,海马组织中皮质酮明显升高,BDNF水平明显下降.海马微量注射米司非酮,使CUMS诱发的大鼠抑郁样行为明显改善,且BDNF水平明显升高.正常大鼠海马微量注射皮质酮后,表现出与CUMS组相似的抑郁样行为,且海马组织中BDNF明显下降.以上结果表明,慢性应激引起大鼠海马皮质酮明显升高,使海马BDNF表达明显减少,导致抑郁发生.糖皮质激素Ⅱ型受体(Glucocorticoids Receptor,GR)起着重要作用.     

图与其补图谱半径之和的新上界

该文给出了图与其补图谱半径之和ρ(G)+ρ(Gc)的新上界,对任一n阶图G,有:p(G)+p(GC)≤((2-1/t)n(n-1))和p(G)+p(GC)≤((2-1/T)n(n-1))其中t=min{k,(k-)},T=max{k,(k-)},k,(k-)分别为图G和其补图Gc的色数.从而改进了[6],[8],[10]的结果.     

雄激素对小鼠睾丸支持细胞Akt和MEK/Erk磷酸化水平的影响

磷酸化信号通路在精子发生过程中有重要作用,本文研究小鼠睾丸支持细胞中雄激素诱导的蛋白磷酸化。研究中分离培养小鼠睾丸支持细胞,建立了稳定的培养体系。蛋白磷酸化抗体芯片结果显示,睾酮快速激活Akt及MEK/Erk的磷酸化,蛋白免疫印迹验证了芯片分析结果,且激酶磷酸化的激活是由AR介导。结果表明睾酮诱导小鼠睾丸支持细胞中Akt和MEK/Erk磷酸化。     

红丝线草降压作用的初步探讨

本文重点介绍红丝线草水提取物的降压作用,着重探讨降压作用的血管机制,动物采用SD大白鼠,雄性,体重在200—220克左右。用戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉,在体实验以颈动脉血压为指标,用Narco型四导生理记录仪描记实验结果;离体血管条实验,用大白鼠尾动脉螺旋条,红丝线草水提取物剂量是:1、3、10、30、100mg/kg,其它激动剂和拮抗剂的剂量是:异丙肾上腺素1μg/kg、心得安3.3mg/kg、乙酰胆碱1μg/kg、阿托品1mg/kg、组织胺40μg/kg、Pyrilamine 3.3mg/kg、甲氰咪胍3.3mg/kg、血管紧张素Ⅰ40ng/kg、甲巯丙脯酸(Captopril)20μg/kg/min消炎痛0.4mg/kg/min。不论在体(?)、离体实验均证明红丝线草水提取物有扩张血管作用。以30mg/kg红丝线草水提取物为例,可使大白鼠平均血压下降48±2.77mm Hg,多种阻断剂(H_1、H_2受体阻断剂,β—受体阻断剂,消炎痛)对它无影响(t测验无显著性)。惟阿托品、Captopril可减弱它的降压效应(t测验差异显著),提示它的降压作用机制可能与血管平滑肌的M—受体或与肾素—血管紧张素系统有关。     

流感病毒RNA聚合酶重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的实验研究

目的:甲型流感病毒RNA聚合酶PB2-1亚基的基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化入受体菌,并优化转化条件,以建立其高效、快速的转化体系.方法:以大肠杆菌DH5α菌株为受体菌,研究了氯化钙溶液浓度(25、50、75、100mmol/L),热休克温度(30、37、42、50℃),转化时间(15、30、60、75min)及热休克作用时间(60、80、100、120sec)对基因工程重组质粒pQE32-PB2-1转化效率的影响.结果:氯化钙溶液浓度、转化时间、热休克温度、热休克作用时间对转化效率的影响有统计学意义(P<0.05).氯化钙溶液浓度和转化时间之间及热休克温度和热休克作用时间之间分别存在交互作用.结论:在本实验条件下,以75mmol/L氯化钙制备感受态细胞,转化60min,经42℃热休克作用120秒后直接涂平板选择转化子,可获得高效、快速的转化效果.     

组胺能与γ-氨基丁酸能神经传递在间位核神经元信息加工中的作用(英文)

小脑间位核(interpositus nucleus,IN)主要接受γ-氨基丁酸(GABA)能纤维支配,同时接受组胺能纤维的调节.本研究在小脑脑片上研究了GABA和组胺对单个IN神经元电活动的共同作用.持续灌流组胺或同时施加组胺和GABA,81.2%(69/85)神经元,GABA及其激动剂的效应都被组胺削弱(持续灌流n=33;同时施加n=36).这种削弱效应能够被组胺H2受体阻断剂ranitidine(n=10)和PKA抑制剂H-89阻断(n=8),fors-kolin模拟组胺的效应(n=9).结果表明组胺和GABA对IN神经元的电活动具有交互调节作用:通过激活H2受体偶联的G-protein-AC-PKA信号通路,磷酸化GABAB和GABAA受体,降低受体功能.推测受体间的对话的工作模式,可能是整个大脑神经元活动的某些药理作用和生理活动调节的基础;如果对话紊乱,可能导致大脑功能障碍.     

人参皂苷C-K急性毒性及其致肺水肿作用的研究

采用灌胃和静脉注射2种给药途径,观察给药1次14 d内小鼠的急性毒性反应;应用人参皂苷C-K(100 mg/kg)复制小鼠肺水肿模型,观察肾上腺素受体阻断剂对其影响;应用肾上腺素复制小鼠肺水肿模型,观察肾上腺素受体阻断剂对其影响.结果表明人参皂苷C-K小鼠口服最大给药量为10.0g/kg,人参皂苷C-K小鼠一次性尾静脉注射,LD50及95 %置信区间为111.707 mg/kg(96.235～ 118.449 mg/kg),其动物死亡主要在5～30 min内,主要表现为急性肺水肿的病理改变.100 mg/kg剂量的人参皂苷C-K可复制典型的小鼠急性肺水肿模型,与肾上腺素所致小鼠肺水肿类似.α-肾上腺素受体阻断剂可减轻人参皂苷C-K致肺水肿,β-肾上腺素受体阻断剂则可加重人参皂苷C-K致肺水肿.     

可乐定对DRG神经元膜GABA激活电流的抑制作用

在新鲜分离大鼠DRG细胞上应用全细胞膜片钳记录证明:(1)绝大多数DRG细胞对GABA(10~(-5)～10~(-3)mol/L)敏感(72/75),产生有明显去敏感的、浓度依赖性的内向流;(2)大多数受检细胞对可乐定(10~(-8)～10~(-4)mol/L)无反应(60/72),仅少数细胞引起很小的内向流(12/72);(3)预加可定30～120sec后,GABA-激活电流受到明显抑制(51/72),此作用可被育亨宾(10~(-4)～10~(-5)mol/L)所阻断。如可乐定浓度为10~(-5)mol/L时,抑制为44.35％;(4)预加10~(-5)mol/L的可乐定使GABA激活电流的量效曲线明显右移,而Kd值相近,最大浓度时的GABA激活电流抑制30.5％;(5)预加β-受体激动剂异丙肾上腺素(10~(-4)～10~(-5)mol/L)对GABA激活电流无影响(n=9);(6)胞内预加H-7(10~(-4)mol/L),20个细胞中除1例以外,可乐定的抑制作用均明显地被阻断。本文结果提示:可乐定对GABA激活电流的抑制可能是由于α_2-受体激活后。通过胞内转导,而引起GABAa受体蛋白磷酸化的结果。     

蛋白激酶C在卵母细胞减数分裂成熟和受精中的作用

蛋白激酶C(PKC)是一类广泛分布在真核细胞中的单链丝/苏氨酸蛋白激酶超家族,在卵母细胞成熟和受精的多个环节发挥着重要调节作用.在卵母细胞成熟过程中,PKC的作用决定于它存在的位置:卵丘细胞中PKC的激活能够促进卵母细胞恢复减数分裂,而卵母细胞中PKC的激活却抑制自身的生发泡破裂.PKC活性在卵母细胞成熟过程中逐渐升高,在第一次减数分裂中/后期转换时活性下降,使卵母细胞得以排出第一极体,进入第二次减数分裂.在哺乳动物卵子的受精过程中,PKC可能作为钙离子的下游靶分子,引发皮质颗粒的排放,并使卵子突破MII期阻滞,形成原核.PKC还参与调节其他重要蛋白激酶,如成熟促进因子(MPF)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性.目前已经在哺乳动物卵子中发现多种PKC亚型,其中经典型PKC可能在卵皮质反应中发挥最主要的作用.结合作者的工作,对目前已知的PKC在减数分裂与受精中的作用进行了评价和展望.     

11批次白芷药材的HPLC和GC指纹图谱实验研究

建立白芷GC及HPLC指纹图谱,为白芷药材的质量评价提供参考。运用HPLC及GC法对白芷药材水提液及挥发油进行指纹图谱研究。HPLC采用Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,A相:乙腈,B相:0.2%冰醋酸溶液(三乙胺调p H 5.0);柱温30℃,进样量10μL,波长245 nm;流速:1 m L/min。乙腈比例为0~35 min;10~25;35~55 min:25~58;55~70 min:58~80;70~75 min:80~100。GC采用HP—5毛细管气相色谱柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)。采用程序升温模式,升温程序为55℃(10 min)以4℃/min的速度线性升温至250℃(8 min)。通过建立11批白芷药材HPLC及GC指纹图谱,对白芷药材的质量进行控制。HPLC实验各批次之间相似度0.9以上,GC实验中各批次之间相似度高于0.8,各批次相似度较佳。首次建立了11批白芷药材HPLC及GC指纹图谱分析方法;该法稳定可靠、重复性好,对白芷药材的质量控制提供了全面可靠的科学依据。     

不同浓度ET—1引起心肌细胞[Ca^2＋]i升高作用的？…

目的:探讨内皮素-1(ET-1)对心肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的作用以及不同浓度ET-1引起[Ca2+]i升高作用的量效关系.方法:采用分离的Sprague-Dawley大鼠心室肌细胞,以Fura-2/AM荧光指示剂负载,检测不同浓度ET-1引起[Ca2+]i变化.结果:ET-1引起[Ca2+]i升高呈双相反应,即起始的短暂快速相和随后的持续相.在1×10-9～5×10-7mol/L范围内,随着ET-1浓度的增加,其升高[Ca2+]i的作用亦增强;并且这种作用可被ETA的特异性受体阻断剂BQ123(2×10-6mol/L)所阻断.结论:ET-1升高[Ca2+]i呈剂量依赖关系,其作用具有特异性,并且是通过ETA受体介导的.     

GPCR配体药效团数据库的构建

G蛋白偶联受体(GPCR)是人体内一类重要的药物作用靶标.针对GPCR配体进行了较全面的药效团模拟研究,有效地整合针对GPCR进行药物发现研究的数据,并构建了相应的药效团数据库.收集并构建了GPCR的8个大类17个亚型的不同配体共110个药效团模型,作为GPCR配体药效团数据库的首批数据.通过统计分析发现:87%GPCR配体药效团中含有疏水性基团(Hydrophobic,HY),66%包含芳香性基团(Ring aromatic,RA),45%含有正离子基团(Positive ions,PI),GPCR药效团数据库的建立极大地方便了开发设计新的具有选择性的GPCR配体.     

快速伸缩复合练习伴随血流限制的激活后增强效应研究

[目的]观察快速伸缩复合练习、血流限制，以及两者相结合对纵跳的动力学和运动学的影响.[方法]对象为运动训练专业男性大学生.随机分为对照组(C)、快速伸缩复合练习组(P)、血流限制组(B),以及快速伸缩复合练习伴随血流限制(P+B).分别在干预前、干预后测定纵跳的运动学和动力学参数.[结果]P组与P+B组在干预4 min后，有类似的显著效果；但B组不显著.[结论]单独使用血流限制不能产生激活后增强效应；快速伸缩复合练习及其与血流限制相结合，能够产生激活后增强效应.