苔藓植物总DNA提取方法和条件的研究

通过CTAB法和高盐低pH法对几种苔藓植物组织DNA的提取进行了比较，结果表明高盐低pH法操作简单、快捷，无需DNA的纯化步骤。且提取DNA的含量和纯度都很高，经过紫外吸收法检测，A^260A^280的比值在1．7—2．0之间。同时实验也研究了提取材料、β-巯基乙醇以及处理方法对DNA的影响，结果表明实验材料对DNA的含量和纯度的影响不大，而在提取缓冲液中加入l％β-巯基乙醇可以有效的抑制酚类物质使DNA褐变，在提取过程中增加回收步骤可以提高DNA产量。这些结果为今后进一步开展苔藓植物的分子生物学研究奠定了基础。     

黄连木叶片基因组DNA提取方法

黄连木叶片中酚类化合物、色素、多糖和其它次生代谢物质含量较高,这给黄连木基因组DNA提取带来困难。为了从黄连木叶片中提取高质量基因组DNA,本文运用CTAB法和改良CTAB法提取黄连木基因组DNA,通过定性、定量及PCR分析检测所提取DNA的质量。结果表明:改良CTAB法提取的DNA电泳条带清晰无RNA等污染,OD260和OD280比值在1.8左右,RAPD扩增条带清晰、无弥散现象、亮度均一。说明改良CTAB法提取的DNA纯度较高,适用于PCR扩增反应。     

枣树基因组DNA提取方法及RAPD体系的建立

以8个枣树品种的嫩叶为材料,比较了不同的DNA提取方法,结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA纯度和产率,虽然不比改良SDS的高,但适宜RAPD分析．在20μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为：引物0．2pmol·L^-1、Mg^2＋2．0mmol·L^-1、dNTP200μmol·L^-1、TaqDNA聚合酶1．2U．改良的CTAB法是枣树RAPD分析基因组提取DNA的最好方法．     

七筋菇基因组DNA提取方法的比较研究

目的对七筋菇基因组DNA提取和ISSR-PCR扩增模板浓度进行优化。方法以常规的CTAB法为基础,对七筋菇基因组DNA提取进行了优化:提取液中加入PVP(6%(w/v)),β-巯基乙醇的浓度提高至5%(w/v);第一次抽提后,重新加入提取液及抗坏血酸(20%(w/v)),65℃水浴30 min。结果所提样品DNA,A260/280,A260/230的平均光吸收值分别为1.78,1.99,浓度为105 ng/μL左右,ISSR扩增带多且清晰明亮,稳定性及多态性高,表明DNA纯度高;对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明,所提DNA模板稀释2倍效果最好(浓度为50 ng/μL)。结论改良后的CTAB法适于提取七筋菇植物的基因组DNA。     

香花槐各组织总RNA提取方法的改良和优化

为探索香花槐各组织总RNA提取的最佳方法,以实验苗圃中的香花槐为实验材料,在比较了Trizol试剂法和常规CTAB法的基础上,建立了香花槐不同组织的最适提取方法.改良CTAB法利用高质量浓度的β-巯基乙醇和合适质量浓度的聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)来防止RNA提取过程中多酚的氧化,然后增加苯酚/氯仿抽提次数来去除香花槐叶片和茎皮过多蛋白质.改良Trizol试剂法在根皮中加PVP研磨成白色粉末,可以有效地防止反应液褐化.各组织优化方法经琼脂糖凝胶电泳检测,所提取的总RNA的28S、18S条带清晰明亮,无降解;其A260nm/A280nm值为2.0,表明提取的总RNA质量较好.     

胡卢巴基因组DNA提取及RAPD引物筛选

以胡卢巴叶片为材料,利用改良CTAB法提取基因组DNA并进行质量检测和含量测定,在优化RAPD反应体系的基础上,对100条RAPD随机引物进行了筛选.结果表明,采用改良CTAB法能从胡卢巴叶片中提取到高质量的DNA,可以用于RAPD分析;从100条随机引物中筛选出了16条显示胡卢巴遗传差异的多态性引物,为胡卢巴遗传多样性研究提供分子依据.     

椰子不同组织基因组DNA的提取及质量分析

以椰子植物的叶片和花序组织为材料,探索了应用CTAB微量法分离高质量椰子基因组DNA的方法.结果表明,采用CTAB的缓冲液裂解材料,以及在提取过程中用φ=4%的β-巯基乙醇的改良CTAB法,可有效地控制椰子这种高纤维、易褐变材料和多糖在DNA提取过程中的污染和影响.应用本研究建立的分离方法,可从椰子的叶片和花序2种不同材料中分离得到高质量的基因组DNA,产量分别达0.75 g.L-1和0.65 g.L-1.通过Hind III酶切实验证明,分离出的基因组DNA适用于限制性酶切反应的分析和操作;该方法的建立可有效地应用于椰子和其他棕榈科植物基于DNA的分子生物学研究.     

甘薯幼苗叶片基因组DNA提取方法的比较研究

以甘薯幼苗叶片为材料,分别采用CTAB法和SDS法对DNA的提取方法进行研究。结果表明,CTAB法更适合甘薯幼苗叶片基因组DNA的提取,所得DNA质量好,纯度高。     

荞麦RAPD指纹图谱的建立及在品种鉴定中的应用

从9个荞麦品种的幼苗叶片提取DNA,使用CTAB和PVP并结合纯化过程中在高盐(N aC l)下沉淀DNA,可除去样品中影响DNA纯度的多酚类化合物和多糖.共使用13个随机引物,扩增的DNA片段大小为3.0K b~0.8 K b.从9个材料的13组RAPD指纹图谱上可以看出甜荞和苦荞的图谱差异很大(相同条带数占总条带数的比例为21%).在13个引物中有10个引物(占全部引物的77%)在甜荞的RAPD图谱上显示了品种间的DNA多态性,而苦荞只有6个引物(占全部引物的46%)产生了这种多态性.从荞麦RAPD指纹图谱上得到的特异带可以作为品种鉴定的分子标记.     

泡桐叶片DNA提取

以兰考泡桐组织培养苗叶片为材料,分别采用CTAB-Ⅰ、CTAB-Ⅱ、SDS-Ⅰ、SDS-Ⅱ四种方法提取叶片DNA,并对不同提取结果进行紫外分光光度、电泳、酶切、RAPD等方法的鉴定。结果表明,用四种方法提取的泡桐叶片DNA得率约为3.5-5.2μg/10mg,A260/A280约为1.7-1.8,A260/A230在2.0以上,分子量在23Kb以上,能够被EcoRⅠ、HindⅢ酶切,能够进行RAPD分析。综合考虑得率、纯度、质量等因素,以SDS-Ⅰ法为最佳方案。     

菠菜基因组DNA提取方法与条件的研究

分别采用CTAB、SDS、高盐低pH三种方法从菠菜叶片中提取基因组DNA,通过A260/A280值、A260/A230值和琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA进行定量、定性分析和综合比较。研究提取缓冲液用量、水浴时间、蛋白质沉淀剂(氯仿-异戊醇)用量、DNA沉淀剂(异丙醇)用量等条件对DNA提取效率和纯度的影响。并对CTAB法的提取条件进行了正交试验,优选出菠菜基因组DNA提取的适宜条件。     

克隆植物珠芽蓼基因组DNA的提取及RAPD鉴定

高原植物体内所含有的酚类、多糖、色素等次生代谢物质严重影响提取其基因组DNA的得率和纯度,是导致后续分子操作失败的主要原因.运用一种新改进的CTAB法对变色硅胶保存的高原植物珠芽蓼(Polygonumviviparum)叶片进行基因组DNA的提取,采取常温下沉淀DNA,增加洗涤沉淀的体积分数为70%乙醇用量和洗涤时间等措施,有效地去除了酚类、多糖、色素等物质的干扰,减少了褐化现象的发生.样品检测所得DNA片段均在48 kb左右,电泳谱带呈线状,无拖尾现象;紫外分光光度计检测,A260nm/A280nm值在1.7~1.9之间.RAPD扩增结果表明,此方法提取的DNA无论在质量和纯度上都较理想.     

黑木相思基因组DNA的快速提取

用SDS高盐介质法和1.5×CTAB法提取黑木相思幼叶及叶状柄基因组DNA,将其与2×CTAB法、3×CTAB法、改进的CTAB法进行比较,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、限制性内切酶消化、RAPD(Radomly Amplified Polymorphic DNA)和ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)等方法进行鉴定.结果表明,叶状柄多糖的质量分数较幼叶少,更易于基因组DNA的提取;SDS高盐介质法与1.5×CTAB法提取叶状柄的基因组DNA得率为180.0～697.5 μg·g-1,分子质量为48 kb,D(260)/D(280)=1.750～1.955,无需经Rnase 处理,可直接用于限制性酶切和RAPD及ISSR分析;1.5×CTAB法所提的基因组DNA的纯度优于SDS高盐介质法.综合考虑认为,1.5×CTAB法可作为黑木相思基因组DNA快速提取的简便方法.     

核桃DNA的提取及RAPD体系的优化

采用CTAB法和改进的CTAB法，从叶片中提取核桃基因组DNA，比较其分离效果，结果表明：改进的CTAB法可有效去除细胞内多糖和多酚等杂质对模板DNA的污染，并以此为模板进行RAPD反应，对RAPD反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验，建立适合于核桃的RAPD-PCR反应体系，以进行该树种的分子标记研究。     

岩陀DNA提取方法研究

以岩陀植物嫩叶为材料,用不同方法对岩陀叶片DNA进行提取,比较提取的质量差异,寻找适合岩陀叶片总DNA的提取方法,以满足多基原民族药岩陀DNA条形码识别系统构建的研究需要。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、改良的CTAB法、十二烷基硫酸钠(SDS)法及碱裂解法提取岩陀叶片总DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及PCR扩增效果检查DNA提取的质量。结果显示四种方法均能从岩陀植物叶片中提取到基因组DNA,改良CTAB法提取的DNA纯度和完整性明显好于其他方法,且采用此法进行PCR扩增获得的目标条带明亮单一,扩增效率达到100%。改良的CTAB法是岩陀叶片总DNA的提取中最为合适的提取方法,能够满足后续DNA条形码的研究需要。     

木麻黄小枝基因组DNA的快速提取研究

提取介质中加入2.5% β-巯基乙醇, 能有效去除次生物质对木麻黄基因组DNA提取的影响.用新建方法所提DNA产率比用前人方法提的高出0.8倍左右.鉴定结果表明:鲜小枝、干小枝的DNA样品皆为48kb左右,适于限制性酶切和RAPD反应; 同时发现同一株树的鲜小枝、干小枝,基因组DNA RAPD扩增可得到相同的产物.     

阔叶榧总DNA的提取及其RAPD反应条件的研究

在阔叶榧新鲜针叶DNA提取过程中，应用pH值较低，无机盐浓度较高的提取缓冲液可沉淀蛋白质，其中加入2％的β-颈基乙醇可有效地防止次生代谢物质使DNA变色。提取出的DNA样品产率在83．7－197．5ng/mg.f.，DNA质量和纯度较高，260nm/280nm光密度比值在1．8－1．9之间。所得DNA可直接用于限制性内切酶酶切，并可用于随机引物PCR扩增，在优化RAPD各种反应条件研究中，确定 了阔叶榧最佳RAPD反应体系为：15μL反应体系中含有50mmol/L KCl．10mmol/L Tris-HCl(pH9.0）．0．1％Triton-100、3nmolμL MgCl2、0.6nmol/μLdNTPs、6μg/μL BSA、1U Taq酶、60ng引物、50－100ng左右的阔叶榧DNA。     

几种DNA提取方法对红树植物秋茄叶片DNA提取效果的比较

以红树植物秋茄叶片为实验材料,美人蕉叶片为对照材料,采用6种不同的DNA提取方法,比较不同方法的DNA提取效果。结果表明：针对红树植物优化的CTAB法（方法 6）通过PVP的除酚去多糖作用,利用CTAB提取液和氯仿-异戊醇强效除蛋白和脂类物质,结合高盐环境下异丙醇高效沉淀DNA去除多糖,最终达到彻底去除杂质,得到高纯度的基因组DNA,是6种方法中最适合用于红树植物DNA的提取方法。     

菜心基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

用改良的CTAB法提取菜心基因组DNA,并利用紫外分光光度法测定其纯度和含量,用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的降解状况和纯度．结果表明:此法提取的DNA具有典型的天然DNA分子的标准紫外吸收光谱特点, 且适于进行RAPD分析．RAPD分析的优化反应体系为:25μL的反应液中含有0．8 U的Taq酶,0．28 μmol／L primer,30 ng的DNA,2．0 mmol／L Mg2 ,0．20 mmol／L dNTPs．PCR扩增循环为94℃、5 min;94℃、1 min; 36℃、1 min;72℃、2 min,37个循环;72℃延伸10 min．     

剑叶龙血树叶DNA三种不同提取方法的比较分析

采用CTAB法、改良SDS法、高盐低pH法提取了剑叶龙血树叶DNA,并通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测了不同方法的提取效果.结果表明：CTAB法所提取的DNA浓度与纯度均高于其它2种方法,泳带分布集中,无拖尾现象,A260/A280=1.81,DNA浓度为735 ng/μL,能满足RAPD、SSR/ISSR扩增的要求,是提取龙血树叶片DNA的最佳方法.