胰蛋白酶固定化技术研究

以脱乙酰壳聚糖为载体,明胶包埋,戊二醛为交联剂,对胰蛋白酶的固定化条件和固定化胰蛋白酶的性质进行研究。文章报道的新工艺是一种制备固定化胰蛋酶的理想方法,它兼有絮凝法迅速方便、包埋法成型容易和交联法强度大等优点。研究中就交联剂用量、明胶用量、ｐＨ 值以及载体与酶的比例对固定化胰蛋白酶的影响进行比较,在所选择的固定化条件下,固定化酶的活性回收率可达５８．２％ 以上。固定化酶的最适温度为６８ ℃,最适ｐＨ 值为７．９, Ｋｍ 值升高,热稳定性、ｐＨ 值贮存稳定性以及在乙醇溶液中的抗变性亦明显高于可溶性胰蛋白酶。在柱式反应器内,当以２．５％ 酪蛋白为底物时,其操作半衰期为４７ ｄ 左右。     

蛋白双酶（胰蛋白酶─木瓜蛋白酶）的固定化研究

以脱乙酰壳多糖为载体，戊二醛为交联剂，对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的固定化条件及固定化双酶的动力学性质进行研究．实验对比了交联剂的用量、交联的ｐＨ值、温度及载体与酶的比例等因素对固定化的影响．确定了固定化双酶的催化特性：最适ｐＨ７．５～８．１，最适温度是６０℃，Ｋｍ值是０．５２ｍｇ／ｍｌ，并对固定化双酶的热稳定性、固定化双酶的活性与固定化单酶的活性进行了比较．     

单宁酸与固定化胰蛋白酶相互作用的研究

研究了单宁酸(TA)对硅胶固定化胰蛋白酶活性的影响,通过酶活抑制测定方法和紫外分光光度法测定了TA与固定化胰蛋白酶作用的最适浓度与最适反应时间,研究了在pH 8.0 Tris-HCl、pH 2.4的甘氨酸-HCl以及含有1 mol/mL NaCl的Tris-HCl三种缓冲液中TA与固定化酶作用的平衡常数KA和结合位点数n.结果表明:TA对固定化胰蛋白酶有不同程度的抑制作用,当反应体系中TA的浓度为7.5×10-6mol/L时,固定化酶活力为91.1 U,抑制率大约为50%,TA与固定化胰蛋白酶最适反应时间为30 s,在pH 2.4的甘氨酸-HCl及含1 mol/mL NaCl的Tris-HCl中,TA与固定化酶的平衡常数KA减小了100倍,结合位点数n也有不同程度的降低.     

胰蛋白酶固定化条件及稳定性对比研究

以 MR- MVA树脂为固定化载体 ,对胰蛋白酶的固定化条件进行研究 ,并与溶液酶在保存温度、保存时间、p H稳定性三方面进行对比研究 ,结果表明 :固定化酶在 6 0℃～ 70℃仍具有较高活性 ,保存时间明显增加 ,p H稳定性明显增加     

水合氧化钛固定化胰蛋白酶的特性

用简便的水合氧化钛螫合法固定化胰蛋白酶,其残活力可达99.2%,载体可以回收。固定化酶的最适pH为10.3比自然酶高两个pH单位。它的最适温度为55℃比自然酶高0.5℃,自然酶在90℃已完全失去活力,而固定化酶在100℃仍具有20%的活力。稳定性试验显示,自然酶在13小时内活力直线下降到零,而固定化酶在5小时之内活力下降55%,5小时以后下降缓慢,250小时仍具20%活力。     

蛋白双酶（胰蛋白酶—木瓜蛋白酶）的固定化研究

以脱乙酰壳多糖为载体、戊二醛为交联剂，对胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的固定化条件及固定化双酶的动力学性质进行了研究。实验对比了交联剂的用量、交联的ＰＨ值、温度及载体与酶的比例等因素对固定化的影响。     

天然高分子材料壳聚糖固定化纤维素酶的研究

使用双功能试剂戊二醛作交联剂,将纤维素酶固定于脱酰度93.66%的壳聚糖上,探讨了交联剂的浓度、给酶量等固定化条件,研究了固定化酶的热稳定性、米氏常数、最适温度及最适pH值等理化性质.实验发现:脱乙酰度高的壳聚糖所用戊二醛的质量浓度较高,且固定化酶量较高;固定化酶的热稳定性比原酶高,与底物亲和力增加;最适pH值向酸性方向移动.     

固定化胰蛋白酶的制备及其性质研究

以EDTA-Sephadex G-50作载体,戊二醛为交联剂,对胰蛋白酶进行固定化.IR光谱结果显示:该项生化技术使胰蛋白酶得到了有效的固定,并且实现了较好的纯化,同时研究了固定化胰蛋白酶的一些性质,最适温度60℃,最适pH8.0,热稳定性,pH贮存稳定性以及对盐酸胍的稳定性均明显高于天然胰蛋白酶.     

固定化胰蛋白酶水解酪蛋白及亲和吸附提取磷肽

磷肽与钙离子结合成可溶性的磷肽钙，是最易为人体吸收的磷钙营养素．又是无毒有效的龋齿防治剂．本文用固定化胰蛋白酶在ｐＨ８．０的硼酸缓冲液中，４０℃条件下水解酪蛋白，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳及葡聚糖Ｇ—１５０凝胶层析分析，其最适水解时间为１０ｈ．用硫氨络铁凝胶珠在ｐＨ４．０醋酸缓冲液含０．５ｍｏｌ／ＬＫ２ＳＯ４条件下亲和吸附磷肽，用ｐＨ７．６Ｔｒｉｓ—ＨＣｌ缓冲液洗脱，磷肽的吸附量为１．７ｍｇ／ｍＬ湿珠．每克磷肽含磷量为５５．５ｍｇ．每克酪蛋白的含磷量为６．９ｍｇ．磷肽的含磷量是酪蛋白的８倍．     

胰蛋白酶的固定化及其应用研究

通过γ-（2,3-环氧丙氧）丙基三甲氧基硅烷将胰蛋白酶固定在硅胶载体表面制备固定化胰蛋白酶. 实验测试了pH值,温度,时间等因素对固定胰蛋白酶的影响,利用红外光谱、热失重等方法对固定化胰蛋白酶进行了表征;通过高效液相色谱法考察了在弱碱性条件下固定化胰蛋白酶与16种天然小分子物质的结合情况. 结果表明在25 ℃,pH=8.0,反应18 h的条件下,对胰蛋白酶在硅胶载体上的固定量最大;且固定化胰蛋白酶与黄酮类成分、生物碱类成分、萜类成分有良好的结合,对酸类及嘌呤类小分子物质不结合.      

戊二醛交联壳聚糖固定化青霉素G酰化酶及其性质研究

以戊二醛为交联剂,壳聚糖为载体固定化粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶.通过单因素和正交试验优化确定固定化最佳条件:0.1 g载体,2.5%戊二醛,酶量160 U,0.6mol/L NaCl,0.2 mol/L磷酸缓冲液9.5 mL,37℃,pH 8.0,固定化38 h.固定化酶最高比活为48.7 U/g湿载体.固定化酶性...     

壳聚糖固定化蚯蚓纤溶酶及其性质

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联荆,用吸附交联法固定蚯蚓纤溶酶,对蚯蚓纤溶酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最适条件:1 g用pH为6.5的磷酸盐缓冲液浸泡的壳聚糖载体与5 mL体积分数为1%戊二醛在25℃交联8 h,充分洗去戊二醛之后,加入蚯蚓纤溶酶13 U,4℃吸附6 h,充分洗去未交联的游离酶,酶活力回收最高大约为63%,固定化酶的比活为0.082 U/mg.固定化酶,游离酶的最适温度均为50℃,游离酶的最适pH值为8.5,而固定化酶的最适pH值为8.0,固定化酶的热稳定性,pH稳定性均比游离酶有所提高,游离酶、固定化酶都能水解纤维蛋白原和纤维蛋白,固定化酶不再水解BSA.     

壳聚糖固定化α-乙酰乳酸脱羧酶的研究

采用壳聚糖作为载体，戊二醛作交联剂制备固定化α-乙酰乳酸脱羧酶（ALDC），优化了固定化条件。实验结果：活力1380U／g，蛋白载量98．30mg／g，比活力14．04U／mg，活性回收率37，l％，固定化α-乙酰乳酸脱羧酶最适温度30℃，最适pH5．5。     

胰蛋白酶在两种载体上的固定化效果比较

以片状载体和偶联DEAE的纤维素微球作为固定化载体,以戊二醛作为交联剂,制备固定化胰蛋白酶,研究交联剂浓度、时间、交联温度等条件对交联效果的影响,并对固定化后的胰蛋白酶的效果进行探究.结果显示,在片状载体和纤维素微球上,固定化最适条件大致相同,最适交联剂浓度为2%,胰蛋白酶浓度为3%,最佳交联时间为10h,交联温度和固定化温度均为10℃.纤维素微球和片状载体在相同条件下酶固载量分别达到145mg/g和112.6mg/g,活力回收率分别为17.3%和14%.两种载体相比,纤维素微球作为固定胰蛋白酶的载体效果更佳.     

纤维素酶固定化研究

利用固态发酵法从瑞氏木霉QM9414发酵液中提取纤维素粗酶液,然后将其固定在壳聚糖上,测定粗酶液的酶活力,固定化酶与粗酶的最适pH,最适温度和Km值.结果表明,粗酶液的蛋白质含量为33.33 ug/mL,酶活力为120 IU/mL.固定化酶的最适温度为60℃而粗酶液为50℃,粗酶液的最适pH=5,固定化酶的最适pH=4,固定化酶的Km值3.592 01×10-2,粗酶液的Km值为4.076 04×10-2,表明固定化酶的很多性质均优于游离酶液.     

细胞用胰蛋白酶制备的新工艺研究

用新鲜牛胰脏,采用盐析、层析、超滤方法对胰蛋白酶的提取和纯化工艺进行优化,探索一套胰蛋白酶制备的新工艺.结果表明:此工艺比传统工艺的操作相对简单,周期短,只需一星期;酶比活和收率比传统工艺高,酶比活可达2 368.5 BAEE/mg,收率为0.48%.可为细胞用胰蛋白酶的产业化生产提供一定的理论和实验依据.     

硅烷化磁铁粉固定胰蛋白酶的研究

分别以硅烷经磁铁粉、硅烷磁化脱乙酰几丁质及脱乙酰几丁质作载体，甲醛或戊二醛为交联剂，对胰蛋白酶的固定化条件及所制备的固定化酶的性质进行了研究。     

淀粉酶的固定化及其柱式反应器研究

从蟹壳中提取壳聚糖，以壳聚糖为载体，戊二醛为交联剂，将淀粉酶固定化，制成柱式反应器，考察了相同浓度底物溶液通过该柱式反应器时，不同流向的反应速度，文中对该反应器的一些理化性能，如最适反应温度、最适ＰＨ，以及离子强度对它的影响等进行了探讨。     

整体柱固定化胰蛋白酶反应器的设计及其在水解β-乳球蛋白中的应用

分别采用2.1、6.0μm的大孔有机整体柱为载体,制备固定化胰蛋白酶反应器(MITRs),比较不同方案对固定化得率及酶比活的影响.相较于氰基硼酸,以2-甲基吡啶硼烷为还原剂的固定化方案虽提高了酶的比活,但导致固载量减少了32％～50％.此外,孔径大小对酶的比活无显著影响.MITRs可有效水解β-乳球蛋白,且水解效率随着...     

基于整体柱的固定化胰蛋白酶反应器及其在水解β-乳球蛋白中的应用

采用胰蛋白酶水解β-乳球蛋白备受关注。然而,该酶成本高昂,无法在食品工业中得到广泛应用。固定化不仅可提高游离酶的稳定性还可通过重复使用降低其成本。本研究分别采用2.1与6 μm的大孔有机整体柱为载体,通过共价固定制备固定化胰蛋白酶反应器 (monolith based immobilized trypsin reactors, MITRs) ,并比较了不同还原剂对固定化得率及酶比活的影响。相较于氰基硼酸,以2-甲基吡啶硼烷为还原剂的固定化方案虽提高了酶的比活,但导致固载量减少了32—50%。此外,孔径大小对酶的比活无显著影响。MITRs可有效水解β-乳球蛋白,且水解效率随着循环流速的增加而提高。其中使用2.1 μm-MITR的水解产物主要为分子量小于3 KDa的小肽。在18次重复实用过程中,6 μm-MITRs表现出更高的稳定性。