甘蓝型油菜与诸葛菜的异源混倍体的融合研究

甘蓝型油菜与诸葛菜杂种是异源混倍体。通过秋水仙碱处理，从杂种试管苗可分化出融合的杂种。融合杂种的染色体数为２ｎ＝３１。大多数细胞的中期Ｉ的构型为８Ⅰ＋１０Ⅱ＋１Ⅲ。本文还讨论了细胞融合与染色休组分割机制消失的关系。     

油菜0guCMS与诸葛菜属间杂种的获得

采用子房培养方法,获得了油菜OguCMS与诸葛菜属间杂种．授粉7～27d的子房在附加不同激京组合的MS培养基上培养．两个多月后,从一种培养基上裂开的成熟子房中长出胚性芽．此芽在附加6-BA 2mg/L和NAA 0.2mg/L的MS培养基上快繁．经鉴定,此苗的染色体数为2n=31,该属间杂种获得率为0.0072％．杂种苗经生根培养后,移入试验田,进行了形态学观察．     

白菜型油菜与诸葛菜属间杂种F1可孕性细胞遗传学分析

通过胚胎培救和快速繁殖，首次成功地获得了白菜型油菜与诸葛菜的远缘杂种。杂种植株具有期望的染色体数２ｎ＝２２。杂种具有较好的结实性。对杂种Ｆ１的细胞学表明；杂种不仅艰形成减数配子，而且还可形成未减数配子。     

甘蓝型油菜染色体组分开现象初探

在甘蓝型油菜奥罗花粉母细胞减数分裂过程中,观察到若干异常染色体行为,如在早双线期看到染色体 成两个染色体群,在双线期及早终变期两个染色体群渐拆离,表现出不同步分裂,其中９条二价体已浓浓缩显示个性体。     

油菜OguCMS与诸葛菜属间杂种的获得

采用房培养方法,获得了油菜ＯｇｕＣＭＳ与诸葛菜属间杂种,授粉７～２７ｄ的子房在附加不同激素组合的ＭＳ培养基上培养,两个多月后,从一种２基上裂开的成熟子房中长出胚性芽,此芽在附加６－ＢＡ２ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上快繁,经鉴定,此苗的染色体数为２ｎ＝３１,该属间杂种获得率为０．００７２％,杂种苗经根培养后,移入试验田,进行了形态学观察。     

油菜品种奥罗与诸葛菜杂交后代形成混倍体研究初报

对油菜品种奥罗与诸葛菜杂种Ｆ３代种子，作根尖染色体观察发现：在共计１８９粒种子中，全部细胞具有３８条染色体的种子数是１６２粒。根尖细胞染色体为混倍体的种子数是２７粒。在混倍体根尖中，具有３８条染色体的细胞占６４．３％，具有３１条染色体的细胞占２２．１％，还有少量细胞具有２４、１９、１２等染色体数。     

芸苔属与诸葛菜属间杂种的细胞遗传学

在十字花科的诸葛菜与6个芸苔属栽培种的属间杂交中,发现亲本种染色体组在杂种有丝分裂中的完全与部分分开现象及此现象的遗传控制.各杂种中的染色体行为受芸苔属亲本中所含染色体组的影响;诸葛菜与3个二倍体种(白菜型油菜、甘蓝和黑芥)杂种的不同染色体行为,导致诸葛菜与3个四倍体种(甘蓝型油菜、芥菜型油菜和埃塞俄比亚芥)的杂种在染色体行为上的差异.由于亲本种染色体组分开现象的发生,可从这些杂种后代中获得芸苔属亲本的纯合植株和各种染色体组成的非整倍体,为研究芸苔属种的染色体组进化和结构、芸苔属作物的育种,提供了新的宝贵材料.     

芥蓝与诸葛菜属间杂种的减数分裂观察

对芥蓝与诸葛菜属间杂种的减数分裂进行了观察。在杂种中期Ｉ的花粉母细胞中,染色体数目稳定为２１,有５种染色体配对构型,二价体数变化为０￣３。由杂种的平均配对构型为１８．８４Ｉ＋１．０４Ⅱ＋０．０３Ⅲ表明,杂种染色体配对程度很低。由于芥蓝和诸葛菜染色体组内都有部分同源性,因而推测芥蓝与诸葛菜染色体组之间的部分同源性极低。     

甘蓝型杂交油菜"蜀杂9号"种子纯度的RAPD鉴定

通过50个随机引物对“蜀杂9号”亲本进行RAPD扩增,选出了两个能在父、母本间产生多态性扩增的随机引物S18和S31,在杂种F,代中验证了它们的特异性和稳定性,证明随机引物S18和S31能分别在F1代中稳定扩增出父本和母本的特异标记片段S18750与S31550．对该引物的RAPD-PCR的反应体系优化后,对“蜀杂9号”父、母本和杂种F1代的单株进行了随机检测,结果表明这两个RAPD标记配合使用能稳定可靠地鉴定甘蓝型杂交油菜“蜀杂9号”种子的纯度．     

甘蓝型油菜雄性不育材料S90—8—7的获得及细胞学研究

从甘蓝型油菜与诸葛菜属间杂种后代中获得一个芥酸含量低、亚油酸含量较高的雄性不育材料S90— 8—7.细胞学研究表明 ,S90— 8—7的染色体数为 2n =38,其花药发育受阻于四分体至单核花粉期 ,属单核败育型 .小孢子发育到单核期后 ,不再向前发育成为二核期和三核期花粉 ,而是逐渐退化以至解体 .在减数分裂后期Ⅰ /末期Ⅰ一些细胞出现落后染色体或染色体桥 .不育系绒毡层延迟退化 ,一直到单核小孢子晚期才迅速解体 .初步认为S90— 8— 7可能是一个细胞核雄性不育材料 ,其不育性至少受一对隐性基因控制 .     

油菜OguC MS与诸葛菜属间杂种F_1的快速繁殖

作者通过摸索建立了适宜于油菜OguCMS与诸葛菜属间杂种F1的快速繁殖方法 .发现MS 6 BA 1.0mg/L NAA 0 .1mg/L适宜于诱导丛芽 ,丛芽增殖系数高达 3.5 ;MS NAA 0 .1mg/L适宜于诱导生根 .     

甘蓝型油菜与蓝花子属间倍半二倍体的形成及其细胞遗传学特性

对甘蓝型油菜与蓝花子的属间远缘杂交得到的杂种Ｆ＿１，经加倍后获得双二倍体植株。该植株作母本再与甘蓝型油菜杂交获得其倍半二倍体．用充气液体培养基加８－羟基喹啉预处理，对不能以根尖为材料作染色体制片的植物，以其幼嫩花蕾进行体细胞染色体制片，对甘蓝型油菜与蓝花子属间倍半二倍体的细胞遗传学特性进行了研究，该植物的染色体数目为２ｎ＝４７．大多数ＰＭＣｓ的染色体在减数分裂过程中配对不规则，并在后期Ⅱ中出现多极分裂现象．     

甘蓝型油菜与蓝花子属间倍半二倍体的形成及其细胞遗传…

对甘蓝型油菜与蓝花子的属间远缘杂交得到的杂种Ｆ１，经加倍后获得双二倍体植株，该植株作母本再与甘蓝型油菜杂交获得其倍半二倍体。用充气液体培养基加８－羟基喹啉预处理，对不能以根尖为材料作染色体制片的植物，以其幼嫩花蕾进行体细胞染色体制片，对甘蓝型油菜与蓝花子属间倍半二倍体的细胞遗传学特性进行了研究，该植物的染色体数目为２ｎ＝４７。大多数ＰＭＣｓ的染色体在减数分裂过程中配对不规则，并在后期Ⅱ中出现多极分     

甘蓝型油菜细胞质雄性不育相关基因的克隆及其转基因研究

将以ATP6作为诱饵蛋白,应用酵母双杂交(Yeast Two Hybrid,Y2H)已筛选到的3′端含有终止密码子的一个片段,通过5′RACE获得该基因全长并,命名为Bn-Zn,其编码氨基酸序列中含有一个RINGv(RINGvariant)结构.通过构建该基因的真核正向表达载体pCAMBIA2301G-Bn-Zn,以农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导转入细胞质雄性不育恢复系油菜8410018幼苗下胚轴,经过诱导愈伤和再分化,成功得到了转基因植株.     

甘蓝型油菜EMS诱变材料的耐湿性鉴定与筛选

该研究以1 132份来自甘蓝型油菜中双9号和GH18的EMS诱变处理自交3代种子为材料,对芽期耐湿性进行综合评价.实验数据表明,EMS诱变后代的耐湿性存在广泛变异.以湿害处理的成苗率为指标进行初筛,有26％以上的材料成苗率高于50％.其中所选材料的5个耐湿性指标平均值均高于未诱变对照,各指标变异系数在0.106 6～0.485 3之间,变异丰富.用相对活力指数对其进行耐湿性分级,分别从GH18和中双9号的EMS诱变后代中筛选得到14个和2个强耐湿性材料,这16份材料可以作为甘蓝型油菜耐湿性育种的优异资源.     

甘蓝型油菜BnbHLH92基因的克隆与表达分析

为研究甘蓝型油菜bHLH转录因子的功能,采用同源克隆技术从甘蓝型油菜中克隆了5个BnbHLH92基因全长cDNA序列,分别命名为BnbHLH92-1、BnbHLH92-2、BnbHLH92-3、BnbHLH92-4、BnbHLH92-5,其编码区长度分别为738,657,684,741,717bp.qRT-PCR实验表明,除BnbHLH92-1外,其它的BnbHLH92基因主要在抽薹期和花期的根中表达,BnbHLH92-1主要在抽薹期和花期的根以及二叶一心期的叶中表达.非生物胁迫显著影响BnbHLH92基因的表达,使其表达量升高.低温胁迫下,BnbHLH92基因分别在胁迫后4、6、6、6、6 h表达量达最高.高温胁迫下,5个BnbHLH92基因分别在胁迫后2、6、6、8、4 h表达量达最高.盐胁迫下,BnbHLH92基因分别在胁迫后6、6、24、24、24 h表达量达最高.在ABA诱导下BnbHLH92基因表达量也有不同程度的增加,分析发现BnbHLH92基因的启动子序列上存在ABA响应元件(ABRE).     

甘蓝型油菜含油量与几个闰量性状的灰色关联度分析

应用灰色关联度分析法对甘蓝油菜籽含油量与几个主要产量性状间的关系进行了综合分析。结果表明含油量与各性状间的关联度大小顺序为：角粒数〉倒伏率〉千粒重〉产量〉主花序不实率〉角果数。     

甘蓝型油菜植物防御素基因的克隆与原核表达

根据Genbank上已知的植物防御素基因设计引物,以甘蓝型油菜中的品种”蜀杂九号”种子总RNA反转录成的eDNA为模板,进行PCR扩增,获得了243bp的片段．将该片段回收。连接到pMD18-T载体测序,将测序片段经酶切回收后克隆到GTK表达载体中,在0．1mmol IPTG诱导下表达出与理论值相符的34kD的融合蛋白条带,用GST单克隆抗体做第一抗体进行Western-blot检测,获得阳性结果,这为甘蓝型油菜植物防御素基因功能的进一步研究提供了基础．     

诸葛菜属及近缘类群(十字花科)的幼苗形态及其分类学意义

对中国特有属诸葛菜属 Orychophragmus 4种植物及近缘的心叶碎米荠 Cardamine limp richti‐ana 、大叶葱芥 A llaria grandi f olia 等的幼苗进行了形态学观察,并探讨了分类学意义.结果表明:1)诸葛菜属4种植物与心叶碎米荠、大叶葱芥幼苗的子叶均对折,出土,其脉序为掌状网脉,具侧生一级至四级脉,诸葛菜 O . violaceus 、大叶葱芥和心叶碎米荠3种具少数五级脉;2)在诸葛菜属内,诸葛菜的幼苗初生叶的毛被和子叶脉序与其他3种(湖北诸葛菜 O .hupehensis 、太白诸葛菜 O .taibaiensis 、铺散诸葛菜 O .di f f usus)存在明显差异,其中铺散诸葛菜第二、第三真叶羽裂.诸葛菜的下胚轴长度、直径明显长于或粗于其他3种 ;3)心叶碎米荠、大叶葱芥的幼苗与诸葛菜相似,但初生叶边缘具圆齿而有别,与铺散诸葛菜等3种在子叶脉序上差异较大,子叶与异堇叶碎米荠 C .violi f olia var .diversi f olia也有很大差别;4)全面观察幼苗形态并结合形态特征、花粉微形态、体细胞染色体数和系统发育研究结果,不支持将铺散诸葛菜、湖北诸葛菜和太白诸葛菜并入诸葛菜,也不支持将心叶碎米荠和大叶葱芥归入诸葛菜属.     

甘蓝型油菜异胡豆苷合成酶（Strictosidine synthase）cDNA的克隆与分析

以无花瓣与正常甘蓝型油菜幼嫩花蕾(长度小于0.2 mm)建立的差异表达文库中发现的异胡豆苷合成酶基因(STR)的一个cDNA片段为基础,利用RACE方法获得了甘蓝型油菜的STR基因cDNA全序列BnSTR.序列分析表明BnSTR全长1408 bp,开放阅读框从第20个碱基到第1291个碱基,推导的蛋白序列与Arabidopsis thaliana, Lycopersicon esculentum, Oryza sativa, Rauvolfia manni, Catharanthus roseus和Ophiorrhiza pumila中STR的同源性分别是91, 41.8, 36.2, 31.2, 29.2和28.4%.表达结果显示,与野生型相比,油菜BnSTR在无花瓣突变型幼嫩花蕾中表达量明显下降, BnSTR可能与花瓣的发育有关.