铜胁迫对蚕豆根尖细胞凋亡及线粒体功能的影响

为了揭示重金属铜对植物的伤害机制,对铜胁迫下蚕豆根尖细胞凋亡与线粒体功能关系进行了分析.用1.0mmol·L-1硫酸铜处理新萌发的蚕豆(Vicia faba)根尖4h,根系生长抑制率达60%,根尖细胞活力明显受到抑制.经荧光染料丫啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)双染后,可见细胞凋亡特征,凋亡率达61.7%.同时,线粒体膜通透性明显增大,线粒体膜电位和线粒体内Cyt c/a吸光度比值下降,说明在铜胁迫下线粒体膜受到损伤.二氨基联苯胺(3,3′-diaminobenzidine,DAB)染色实验证明硫酸铜可以诱导蚕豆根尖活性氧的积累,根尖中H2O2的含量比对照组提高2.5倍.利用过氧化氢酶(catalase,CAT)预处理分解铜胁迫诱导的活性氧,可以降低细胞凋亡率和线粒体膜损伤.实验结果证明,活性氧可能介导铜胁迫造成的根尖生长抑制,是植物在遭受重金属铜胁迫时细胞凋亡和线粒体膜损伤的重要生理信号.     

室内堆放期间温州盘菜块根衰老的活性氧代谢研究

以温州特色蔬菜温州盘菜块根为试材,研究了块根衰老过程中的活性氧代谢变化。结果表明:室内堆放初期,盘菜块根衰老进程较慢,但已产生膜脂过氧化产物(MDA)的积累,清除活性氧的酶促系统已受到一定程度的破坏;至堆放后期(30d)后,失水加快,导致活性氧和膜脂过氧化加剧,膜系统完整性丧失,加快了块根的衰老。     

葡萄籽提取物对人二倍体成纤维细胞寿命及c-fos基因表达的影响

研究葡萄籽提取物对人二倍体成纤维细胞寿命及原癌基因c—fos转录的影响,探讨葡萄籽抗衰老的细胞和分子基础．采用体外培养细胞、Northern杂交RNA电泳及细胞染色体常规检查的方法进行检测．葡萄籽提取物在体积分数为0．030％时,能有限地延长2BS细胞的寿命;葡萄籽提取物能诱导衰老2BS细胞c—fos基因的低水平转录．葡萄籽具有一定的延缓细胞衰老的作用,其对衰老2BS细胞c—fos基因转录的诱导作用,可能是延缓细胞衰老的分子机理之一．     

文冠果种仁总皂苷诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究

用文冠果种仁总皂苷(the total saponins from Xanthoceras sorbifolia bunge kernel,XSTS)处理人肝癌HepG2细胞,探讨其诱导HepG2细胞凋亡的分子机制。利用JC-1荧光探针检测HepG2细胞线粒体膜电势的变化,运用流式细胞仪和比色法检测细胞内活性氧和一氧化氮水平,用Western blot法检测XSTS对细胞凋亡特征蛋白的影响。结果发现:质量浓度为8～12 mg/L的XSTS可诱导HepG2细胞发生线粒体介导的内源性凋亡,该途径受到PI3K/Akt通路调控;且XSTS可通过激发氧化应激而非硝化应激来诱导细胞凋亡。     

三苯基膦盐在肿瘤诊断和治疗中的应用

针对靶向亚细胞器的治疗是肿瘤治疗的一个新兴研究方向,其机理是通过损伤亚细胞器或影响亚细胞器周围的环境,使细胞凋亡. 而在众多的亚细胞器中,线粒体是亚细胞的能量工厂,可以为亚细胞的各项生命活动提供能量,因此靶向线粒体治疗是亚细胞器治疗的热点之一. 此外,线粒体还参与细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程. 诱导线粒体损伤或者影响线粒体内表达物质的正常供应关系,对亚细胞生存状态有巨大的影响. 三苯基膦（TPP）盐可以利用线粒体膜电位差来实现线粒体靶向功能,是最广为接受和应用较多的线粒体靶向小分子. 为了进一步增加其功能的多样性,往往会在TPP烷基链的尾端进行设计,实现肿瘤的高效诊断和治疗. 文章综述了近年来TPP盐在肿瘤诊断和治疗领域中的研究进展,以及在未来所面对的挑战.     

AAPH诱导的氧化应激对小鼠早期胚胎发育的作用及机制研究

哺乳动物胚胎发育是一个受复杂信号通路严格调控的过程,同时受遗传和环境因素等多种因素影响.由体外培养环境破坏活性氧ROS平衡所引起的氧化应激反应被认为是影响体外胚胎发育的重要因素之一,但活性氧影响胚胎的机制仍有待研究.本研究首先观察了叠氮化合物2,2'-偶氮二(2-脒基丙烷)盐酸盐AAPH[2,2-Azobis(2-Amidinopropane)dihydrochloride]处理后对胚胎发育的影响,检测了胚胎的活性氧水平、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,同时检测了合子基因组激活相关基因的表达变化,针对活性氧诱导剂AAPH影响小鼠早期胚胎发育的分子机制进行研究.结果表明,AAPH能够提高小鼠胚胎的活性氧水平,影响胚胎发育率,AAPH的作用呈现剂量依赖性,这种影响是通过降低线粒体的膜电位,进而促发细胞凋亡.同时,抑制合子基因组激活相关基因Zscan4d、eIF-1A、Hspa1b、H2afz的表达.本研究探讨了活性氧影响早期胚胎发育过程的机制,为哺乳动物体外受精培养体系的优化提供了依据.     

NaCl胁迫对构树、光叶楮生理及细胞结构的影响

以1年生构树和光叶楮幼苗为材料,研究了其细胞膜透性、MDA(丙二醛)含量、SOD(超氧化物歧化酶)和POD(过氧化物酶)活性对不同浓度NaCl胁迫的反应,并观察了细胞超微结构的变化。结果显示：(1)随NaCl浓度的升高及胁迫时间的延长,构树和光叶楮膜透性和MDA含量显著增加;而SOD和POD活性先增加后下降,抗氧化酶活性(SOD和POD)之间协调变化有利于清除活性氧,维持活性氧代谢平衡,保护膜结构。(2)低浓度NaCl处理下(质量分数为0.1 %和0.2 %)构树和光叶楮叶片的细胞超微结构未受到伤害,同时可观察到线粒体增多的现象;随着盐浓度的增加,细胞超微结构变化较大,0.4 % NaCl胁迫时构树和光叶楮叶片细胞器变形严重,液泡增大明显,且构树细胞核明显固缩,核物质凝聚,线粒体结构模糊,细胞结构受到严重伤害。综合分析认为：光叶楮的耐盐性较强。     

以bcl-2为靶标siRNA-2提高HL-60细胞对阿糖胞苷的敏感性

目的:研究以bc l-2基因为靶标有效siRNA-2(sm all interference RNA)能否提高HL-60细胞对阿糖胞苷(Ara-C)的敏感性。方法:将siRNA-2转入HL-60细胞株并与Ara-C联合培养,于24、48、72 h,用MTT法检测细胞增殖生长,用流式细胞仪检测HL-60细胞bc l-2蛋白的表达率、细胞内活性氧(ROS)水平变化及细胞线粒体膜电位的变化。结果:siRNA-2明显提高HL-60细胞对Ara-C敏感性;抑制细胞bc l-2蛋白的表达,提高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位(P<0.05)。结论:siRNA-2能提高白血病细胞HL-60对Ara-C敏感性。     

灯盏乙素对大鼠肝线粒体氧化损伤的抑制作用

运用Fe^2 -Vc损伤体系诱导大鼠肝线粒体氧化损伤，并研究了灯盏乙素的抑制作用，采用分光光度法测定脂质过氧化物丙二醛（MDA）含量，膜蛋白巯基含量及线粒体肿胀度，利用荧光染料Rhodamine123对线粒体进行标记，跟踪线粒体膜电位的变化，研究发现20－50μmol/L的灯盏乙素能抑制MDA的生成并促使膜巯基含量下降，对线粒体肿胀和膜电位的降低都有一定的抑制作用，并呈剂量依赖关系，结果表明灯盏乙素是一种有效的抗氧化剂，能抑制活性氧诱导的线粒体氧化损伤。μ     

细胞应激条件下嗜热四膜虫线粒体膜电位变化研究

单细胞线虫纲原生动物四膜虫(Tetrahymena),在H2O2的诱导下可发生凋亡样死亡.另外,最新研究表明细胞中活性氧簇(ROS)的积累可有效地诱导细胞自噬途径的发生.通过流式细胞技术和荧光显微技术,检测了经饥饿和ROS诱导剂处理后,线粒体内膜电位变化及细胞内ROS的积累.此外,应用两种抗氧化剂氮乙酰半胱氨酸(NAC)和过氧化氢酶(Catalase)分别对四膜虫细胞进行处理,检测了在氧化应激条件下的抗氧化作用效果.结果表明,Oligomycin和Menadione可有效抑制线粒体膜电位的维持,从而导致细胞内ROS积累.同时,H2O2处理和饥饿处理可以导致嗜热四膜虫细胞线粒体膜电位丧失以及细胞质ROS积累.另外,N-acetylcystine和Catalase可有效地降低四膜虫细胞内ROS的积累,以及保持四膜虫细胞线粒体内膜电位,维持通透性.     

干藏过程中月季切花衰老的生理机制初探

测定了干藏过程中月季品种萨蔓莎和金牌的切花瓶插寿命及衰老的生理指标。结果表明：随干藏时间的延长,鲜质量损失率增加,水势降低,水分亏缺增大;乙烯生成量增高;ＳＯＤ活性前期由低升高,中期维持较高水平,后期迅速下降;细胸膜透性也逐渐增大;瓶插寿命缩短。     

Human endothelial senescence induced by IL-1α in vitro

Interleukin 1(IL-1) is an important proinflammatory cytokine that causes pleiotropic effects. Vascular endothelial cells stimulated by IL-1α can lead to the inflammatory response. Reactive oxygen species (ROS) are also generated at the site of inflammation and serve as an important factor against foreign invader. Here we report that long-term stimulation of human vein endothelial cells with IL-1α can accelerate their senescence associated with β-galactosidase activity. The flow cytometric analyses showed that most of the induced cells entered G0-G1 phase. DNA damage was more severe in senescent cells by comet assay. The induced cells by IL-1α had higher levels of ROS and malonyldialdehyde (MDA), lower activity of antioxidant enzymes and lower capacity of total antioxidant systems than control, which led to cell damage and cell degeneration, that is to say, which contributed to cellular senescence. Our results gave a direct proof to a new hypothesis-"the inflammation hypothesis of aging" on cellular level, and also provided a basis for the study on anti-aging and aging-related diseases.     

槐属二氢黄酮G促进L6细胞内GLUT4的表达和转运

利用细胞葡萄糖摄取检测试剂盒检测苦参中槐属二氢黄酮G(Sophoraflavanone G,SFG) 对L6细胞葡萄糖摄取的影响,发现SFG能够增加大鼠成肌细胞 (L6) 的葡萄糖摄取;之后,使用Western blot检测发现SFG对L6细胞内GLUT4的表达有显著的促进作用;同时,在可稳定表达IRAP-mOrange荧光蛋白的L6细胞内,使用激光共聚焦显微镜监测SFG作用下葡萄糖转位蛋白4 (glucose transporter 4,GLUT4) 的转位,发现SFG对GLUT4的转位有显著的促进作用,而且SFG对GLUT4转位的促进呈浓度依赖性;另外,免疫荧光实验结果也显示SFG增强L6细胞中GLUT4与细胞膜的融合.这些结果显示利用SFG处理L6细胞后,L6细胞内GLUT4的表达、转运及与细胞膜的融合继而促进葡萄糖的摄取显著增强,说明SFG可能具备开发成一种新的降血糖药物的潜力.     

秀丽线虫sod-3基因RNA干扰及早衰模型的建立

利用RNAi技术, 通过干扰秀丽线虫中的sod-3基因表达, 建立了因超氧化物歧化酶3（SOD3）表达缺失引起快速衰老的线虫模型,为sod-3 基因功能的研究以及相关疾病的基因治疗等提供动物模型.     

RNAi-mediated knockingdown of rlpk2 gene retarded soybean leaf senescence

Leaf senescence that occurs in the last stage of leaf development is a genetically programmed process. It is very significant to elucidate the molecular mechanisms that control the initiation and progression of leaf senescence and the way the senescence signal is transduced. In a previous study on artificially induced soybean leaf senescence, we cloned a novel gene designated rlpk2 (Genbank Accession No. AY687391) that encodes a leucine-rich repeat (LRR) receptor like protein kinase. The expression level of rlpk2 gene was shown to be strongly up-regulated during both the natural leaf senescence process in this report and the artificially induced primary-leaf-senescence process in our previous work. The RNA interference (RNAi)-mediated knocking-down of rlpk2 dramatically retarded both the natural and nutrient deficiency-induced leaf senescence in transgenic soybean. The transgenic leaves showed more cell-aggregated surface structure and higher content of chlorophyll.     

藏药绿萝花对正常小鼠糖耐量影响的试验研究

探讨藏药绿萝花的降血糖作用,为临床合理用药和进一步开发利用提供科学依据.以L9(34)正交设计试验获得绿萝花水萃取干膏制剂为研究材料,将实验动物分为空白组、高、中、低剂量绿萝花组和阳性药物组,以尾静脉血糖值、糖耐量曲线下面积为检测指标,研究不同剂量绿萝花对正常小鼠糖耐量影响.实验结果:灌胃后30min,高剂量绿萝花血糖值(11.72 mmol/L)与中剂量绿萝花组血糖值(11.41mmol/L)显著低于空白组(P0.05);三个剂量绿萝花组的糖耐量曲线下面积无显著差异(P0.05),但都均低于空白对照组的糖耐量曲线下面积,尤以中、高剂量绿萝花和盐酸二甲双胍片效果较明显.研究结果表明:绿萝花在连续服用5d后具有抑制机体对葡萄糖吸收的能力、增强机体对糖耐受的能力.     

葡萄糖浓度波动对人肝L02细胞损伤的实验研究

研究了葡萄糖浓度波动对于体外培养的人肝实质L02细胞的影响以及可能的机制.利用人肝实质细胞株L02进行传代培养.实验共分为4组:正常组(N)、持续高糖组(HG)、波动组(GF)和渗透压对照组(OP).各组细胞培养72 h后,测定培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活力,肝细胞内糖原含量,谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化酶歧化酶(SOD)、Na~+K~+-ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶的活力,胞内游离钙离子([Ca~(2+)]_i)浓度以及细胞膜的流动性.高糖组和波动组细胞培养液中ALT,AST和LDH活力上升,细胞内GSH,SOD,Na~+K~+ATP酶和Ca~(2+)Mg~(2+)-ATP酶活性均下降,MDA和糖原含量上升,细胞膜流动性下降;高糖组和波动组与正常组比较均差异显著(p0.001),波动组较高糖组也有显著差异(p0.01).葡萄糖浓度波动能够导致细胞膜通透性的改变和细胞内酶的严重泄漏,同时对肝细胞有明显的氧化损伤和毒性作用,而且比单纯的高糖对肝细胞的损害更为明显和严重.     

豌豆顶芽衰老过程中的显微、超微结构和nDNA的变化

显微、超微结构研究表明 ,短日照条件下豌豆顶芽的衰老过程是从营养生长锥向花芽的转化 ,而用DNA原位末端标记 (TUNEL)、Caspase 8WesternBlot和 14 0bpDNA片断积累的试验结果证明 ,转化为花芽的整个生长锥细胞发生了编程性死亡 (PCD) ,而且其最顶端部分细胞首先发生PCD ,而顶端周围的分生组织细胞逐渐分化出花芽的各部分 ,但顶芽最后并没有发育成为完整的花 ,所有细胞就都发生PCD ,从而顶芽衰老