菠萝蛋白酶的基本性质研究

本文介绍了菠萝蛋白酶的紫外吸收光谱、分子量、米氏常数 K_■、激活剂等抟影响,以及最适的 pH 和温度、热失活情况等基本性质.实验表明菠萝蛋白酶为非金属酶;发现不同来源的菠萝蛋白酶的最适 pH 为中性,都具有一定的耐热性.     

桄榔蛋白酶的分离、纯化及性质的研究

在桄榔属的Arenga pinnata的果实中,发现了丰富的蛋白水解酶。我们称之为桄榔酶(Arengain)。用硫酸铵将果肉汁分级盐析获得粗酶制品,用DE52层析分出三个蛋白水解活性峰,其中层析成分5为主要活性组分,等电聚焦电泳证实该组分均一,等电点在pH3.99左右,用SDS-PAGE电泳法测算得分子量为44000。 10~(-3)mol/L的Hg~(2+)、PCMB、1AA、DTNB可计量地使酶失活.Hg~(2+)、PCMB抑制了的酶可为EDTA恢复活性。一定时间内巯基乙醇能令酶活性增加。二异丙基氯磷酸虽可抑制酶活性,但先加半胱氨酸,后加二异丙基氟磷酸,可使这种抑制不能实现,证明桄榔酶是巯基酶。酪蛋白做底物,桄榔酶反应的最适温度为60℃,最适pH为pH11。该酶的pH稳定性很好,pH6～12都表现了很高活性.酶液于pH6～12中24小时活性基本不变;该酶还表现了极高的乙醇耐受力,在50％～70％的乙醇中都显示出高活性。它还耐受3mol/L盐酸胍,50％曲拉通,0.1mol/L的二巯苏糖醇。     

产耐热蛋白酶菌株的分离和酶性质的研究

从南汇县黄路乡一草堆下的土壤中分离到一株产耐热蛋白酶的链霉菌。该酶的最适反应温度为７０℃。在６０℃时稳定，当８０℃时处理１０ｍｉｎ，尚余８４％活性。在Ｃａ＾２＋存在的条件下，酶的热稳定性有显著提高。酶反应的最适ｐＨ为８．５，在ｐＨ５～９之间稳定，因此属于微碱性蛋白酶。通过抑制剂试验，该酶基本上被ＰＭＳＦ（苯甲基磺酰化合物）抑制，但不被金属螯合剂（ＥＤＴＡ，双吡啶）抑制。金属离子Ｃｕ＾２＋，Ｚｎ＾２     

赤小豆胰蛋白酶抑制剂抑制人体精子顶体蛋白酶的动力学

通过一系列酶促反应动力学的研究，结果表明赤小豆胰蛋白酶抑制剂对人体精子顶体蛋白酶（Ａｃｒｏｓｉｎ）有较强的不可逆竞争性抑制作用．其Ｋｍ和Ｋｉ值分别为１．８６×１０－３ｍｏｌ／Ｌ和２．１×１０－５ｍｏｌ／Ｌ．     

基因工程枯草杆菌生产中性蛋白酶的研究

使用一株基因工程枯草杆菌ＤＢ４０３（ｐＷＬ２６７）生产中性蛋白酶，其宿主ＤＢ４０３失去了野生菌株９９％的胞外蛋白酶生产能力，质粒ｐＷＬ２６７则带有野生菌株中性蛋白酶的全部结构基因。在分批培养中，中性蛋白酶的活性为２６２ｍｇ／ｍｉｎ·Ｌ左右，通过培养基改进达到３．２８６ｇ／ｍｉｎ·Ｌ。连续培养表明，中性蛋白酶的比生产速率在比生长速率为０．２ｈ￣（－１）时最大。在控制补加葡萄糖和其它培养基成分的补料分批培养中，中性蛋白酶活性达１７．６７０ｇ／ｍｍ·Ｌ。     

小麦巯基蛋白酶抑制剂的纯化和性质研究

将小麦麦胚和麸皮的浸取液，经加热和利用ｐＨ沉淀，获得疏基蛋白酶抑制剂粗品；再经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００分子筛层析，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ柱上得到均为单一蛋白带的小麦ＣＰＩ纯品。其纯化度为原料浸液的４２倍。由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＣＰＩ分子为单一肽链     

酸性蛋白酶高产菌株的选育

以黑曲霉ＹＭ３０１９为出发菌株，经紫外线和亚硝基胍诱变得到酸性蛋白酶高产菌株Ａ－１－，并对基固体发酵条件进行了优化，在最佳固体发酵条件下，菌株可以洋生３８９１０单位／克·干基的酸性蛋白酶。     

酶水解分离人胃粘膜上皮细胞

比较了金属螯合剂EDTA-Na2及各种蛋白酶水解分离人胃粘膜上皮细胞的方法．将胃粘膜组织置于不同分离液中，37℃振荡50min，结果显示：胶原蛋白酶、链霉蛋白酶、胰酶、EDTA-Na2单独使用及胰酶与EDTA-Na2联合使用，样本得到的细胞都较少；而胶原蛋白酶和链霉蛋白酶联合使用时，得到的细胞总数、上皮细胞比率及细胞活率都较高．用彗星电泳对胶原蛋白酶和链霉蛋白酶联合作用下的淋巴细胞进行了分析，结果表明，该条件不会对细胞的DNA造成损伤．     

无花果蛋白酶分子去折叠与催化功能

应用光谱法研究无花果蛋白酶（ＥＣ．３．４．４．１２）在不同浓度脲及ＬＤＳ存在下的结构变化和活力变化的关系。荧光光谱显示，在１－６ｍｏｌ／Ｌ脲范围内，荧光强度均比天然酶高，但剩余活力只有天然酶的２０％以下，随脲浓度增大，α螺旋度有不同程度的增加，酶在低浓度（０．５ｇ／Ｌ）ＬＤＳ作用下，荧光强度下降，发射峰红移，在高浓度ＬＤＳ作用时，荧光强度增强，发射峰基本保持不变，活力则随着ＬＤＳ浓度增大而下降，甚     

碱性蛋白酶产生菌黄假单孢菌的分离、鉴定和产酶条件研究

从湖北黄石市的土样中分离到一种黄色假单孢菌,它产生碱性中温度白酶,酶活为１．０７＊１０＾－６ｍｏｌ．ｓ＾－１,该菌的最适产酶时间为４８－６０ｈ,最适产酶ＰＨ值为１１．０,最适产酶温度为３０－３５℃。该菌对氨苄青霉素和硫酸链霉素每天则对壮观霉素有抗性。     

玉米皮中蛋白质的酶水解特性研究

就玉米种皮中的中性蛋白酶水解问题进行了研究,指出1398中性蛋白酶水解蛋白质的最佳条件为：温度40℃,时间3h,低物浓度0.5%,用酶量2000U／g,在此条件下,玉米种皮中蛋白质中可有56％水解溶出。     

pH渐变条件下双酶协同水解大豆蛋白

研究了在没有外加碱的pH渐变条件下．用枯草杆菌碱性蛋白酶(Alcalase 2．4L,酶活力2．4AU/g)和黑曲霉酸性蛋白酶(酶活力3000u／g)双酶协同水解从大豆蛋白制备寡肽(10个氨基酸以下的肽)水解物的可行性．考察了单酶单因素水解条件、双酶加入方式对大豆蛋白降解率和蛋白质水解度的影响,并在此基础上通过正交试验进一步优化出双酶一次性投料方案下水解大豆蛋白的最佳条件：水解温度为60℃．碱性蛋白酶加入量为每g蛋白15μL,酸性蛋白酶加入量为6％,底物浓度为40g／L,水解时间为18h．在上述最佳条件下,大豆蛋白的降解率可达76％,蛋白质的水解度可达26％,水解物中相对分子质量小于1350的寡肽达到了66％．结果表明,在不外加碱的条件下,采用双酶协同水解方法能够显著提高大豆蛋白降解率以及蛋白质水解度．     

钙蛋白酶和钙蛋白酶抑制蛋白系统在雄性生殖调控中的研究进展

钙蛋白酶（calpain）是一族钙离子依赖性的、水解半胱氨酸的蛋白酶,钙蛋白酶抑制蛋白（cal-pastatin）是钙蛋白酶的特异性抑制蛋白.钙蛋白酶-钙蛋白酶抑制蛋白系统在多种细胞中发挥作用,本文就国内外对该系统在雄性生殖调控中的作用的研究情况作一概括,为人们进一步了解该系统奠定基础.     

复合酶法水解花生粕制备抗氧化肽的工艺优化

以DPPH自由基清除率和收率为响应值,采用响应面法对复合酶法水解花生粕生产抗氧化性肽工艺条件进行了优化.研究结果表明,碱性蛋白酶和中性蛋白酶对花生粕具有较强的水解能力,二者以2∶1的比例对花生粕水解时,较优水解条件是50℃,pH值8.54,底物质量分数8.34%.在此条件下酶解16 h,花生肽收率为65.80%,在花生肽质量浓度为0.55 mg/mL时,对DPPH自由基清除率为25.77%,与优化前相比,复合酶比碱性蛋白酶单酶水解时收率和DPPH自由基清除率分别提高了7.48%和7.66%,比中性蛋白酶单酶水解时分别提高了10.29%和22.53%.     

黄鳝蛋白酶的化学修饰

采用NBS，BrAc，IAC，TNBS，PCMB，PMSF，2-ME7种化学修饰剂及Ca^2 ．Mg^2 ，Na^2 ，K^2 ，Cu^2 等9种金属离子和EDTA试剂对黄鳝蛋白酶进行处理，检测酶活性变化，以研究酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系。及金属离子和EDTA对酶活性的影响．实验结果表明；NBS．BrAe，IAC，TNBS，PMSF对酶的抑制作用很强，而PCMB，2-ME对酶活性影响不大。说明色氨酸残基、组氨酸残基、赖氨酸残基和丝氨酸残基的化学修饰对酶的活性影响很大。为酶活性的必需基团。而巯基、二硫键等与酶活性无直接关系．Cu^2 ，Ba^2 对酶的活性具有激活作用，Mg^2 ，Li 和K 对酶有轻微的抑制作用，而Pb^2 ，Mn^2 和EDTA对酶有很强的抑制作用，Ca^2 ，Na^2 对黄缮蛋白酶既无明显的激活作用，也无明显的抑制作用．     

嗜热菌Lon蛋白酶的功能分析

Lon蛋白酶是一种在各种生物体内广泛分布并且具有多种生物功能的蛋白质.以嗜热栖热菌（Thermus thermophilus HB8）的Lon蛋白酶（TTLon）为研究对象,将TTLon蛋白酶的编码基因克隆至pTrc His载体,并在大肠杆菌中进行了成功表达,采用Ni-NTA亲和层析对其进行分离纯化,并通过一系列实验证明Lon蛋白酶能够与ATP结合,具有依赖ATP的蛋白酶活性和依赖ATP的分子伴侣活性.     

黄鳝肠道蛋白酶的应用研究

将黄鳝内脏混合物提取液作同工酶电泳,得到3条蛋白酶同工酶条带,其中ProteaseⅠ条带与从黄鳝肠道中提取的蛋白酶纯品SDS-PAGE条带重合,表明从黄鳝内脏混合物中可以提取到黄鳝肠道蛋白酶纯品.金属离子Cu2 和Ba2 对酶有激活作用,EDTA、Mn2 、Pb2 对酶有抑制作用,而Ca2 、Mg2 、K 、Na 对酶活性无明显影响.通过酶与化学试剂的配伍试验测得:CO23-、SO32-、硼砂对酶活性无影响,甘露醇、橄榄油、聚乙烯醇对酶活性有轻微抑制作用,SO42-、H2PO4-、BO32-和海藻酸钠对酶有轻微激活作用,而洗涤剂中常用的表面活性剂SDS、LAS、CHAPS和TritonX-100在低浓度时对酶活性无明显影响,酶在0·02%的SDS、0·05%的LAS和0·1%的CHAPS中保持相对稳定,40min酶活保持在50%左右.酶专一底物测试结果表明:黄鳝肠道蛋白酶对弹性蛋白酶的专一底物刚果红弹性蛋白(elastin-CongoRed)有水解活性,而对胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的专一底物N苯甲酰L精氨酸乙酯(BAEE)和N乙酰L酪氨酸乙酯(ATEE)无水解活性,表明黄鳝肠道蛋白酶为弹性蛋白酶.     

MMP-2、MMP-9及其抑制剂在肺癌中的表达与临床意义

目的探讨肺癌组织中MMP2、MMP9及其抑制剂的表达与肺癌的生长、转移等临床特征及预后的关系.方法采用免疫组织化学法SP法检测45例肺癌组织中MMP2、MMP9及其抑制剂的表达,观察它们与肺癌的生长、TMN分期的关系.结果MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP2在45例肺癌组织中的阳性表达率分别为57.78%(26/45)、37.78%(17/45)、35.56%(16/45)及51.11%(23/45);它们的表达与肺癌的原发灶范围、淋巴结转移、远处转移、TNM分期及平均生存时间有统计学意义(P<0.05).结论MMP2、MMP9及其抑制剂的表达与肺癌的TNM分期及平均生存时间关系密切,它们在组织中的高表达是判断肺癌预后的独立因素.