草鱼肝脏GPT酶的动力学特征及对Nic的敏感性研究

以草鱼肝脏匀浆上清液为GPT酶液,用L25(56)正交和分光光度法,测试其催化反应的最适条件及对Nic的敏感性.试验表明:在酶液浓度0.1 mg/mL、α-酮戊二酸3μmol/mL、反应体系pH8.5、反应温度50℃及反应时间70 min时,GPT转氨基速率达到最大值,其中酶浓度和底物对其活力影响均达到极显著水平(p<...     

斑马鱼肌肉GPT酶的反应体系及对Nic敏感性研究

以斑马鱼肌肉匀浆上清液为酶液,用L_(25)(5~6)正交和极(方)差分析确定GPT最佳反应条件:酶浓度1.6 mg/mL、α-酮戊二酸4 mmol/L、反应体系pH8.0、反应温度45℃及反应时间45 min,其中酶浓度、温度及时间对GPT活性影响均达到极显著水平(P0.01).在GPT反应最适条件下测得0.1、0.2、0.3、0.4、0.5及0.6 mg/L的Nic急性水浴暴露斑马鱼4 d时,其活性诱导率分别为12.42、23.86、32.03、42.37、50.65及64.16%,Nic暴露浓度与GPT活性诱导呈良好的直线关系(y= 0.6259x+0.7036,R~2=0.9259).初步推定斑马鱼肌肉GPT是Nic致其生化毒性的靶点.     

草鱼饲料的酶学基础研究

以BANA为废物,对草鱼胰蛋白酶最适温度、最适pH以及K_m与V_(max)进行了研究,并对这些因素与饲料的关系进行了探讨。     

草鱼椎骨间质细胞系对水生动物病毒敏感性的测定

取草鱼椎骨间质组织体外培养,连续传代超过30次,建立了呈上皮细胞形态的草鱼椎骨间质细胞系GCVB.将自鳖、蛙、鱼中分离到的10株病毒分别接种于长成致密单层的GCVB细胞中,显微观察细胞病变情况,测定病毒滴度.结果表明,GCVB细胞对不同病毒株敏感性不同,如对鳜鱼病毒SCSV和虹鳟传染性胰腺坏死病病毒IPNV不够敏感,仅引起轻微或不可察病变,病毒滴度低于10 1 TCID 50 /mL;但中华鳖病毒TSV,蛙虹彩病毒中国分离株RGV9506,蛙虹彩病毒美国分离株FV3,胭脂鱼弹状病毒CSRV,鲤春病毒血症病毒SVCV,草鱼出血病病毒GCHV89/24,以及GCHV33/86这7个病毒株,可引起GCVB细胞产生不同程度病变,滴度在10 1.8 ～10 4.3 TCID 50 /mL之间;草鱼出血病病毒GCHV873可引起GCVB细胞产生显著病变,滴度高达10 7.5 TCID 50 /mL.表明新建的草鱼椎骨间质细胞系GCVB对已测的10株水生动物病毒中的80%敏感,可用于检测、分离其他未知水生动物病毒.     

草鱼线粒体DNA酶切图谱的研究

用１０种限制性内切酶对草鱼肝脏线粒体ＤＮＡ进行了分析，其分子太小约１６．５８ｋｂ．ＰｓｔＩ，ＢａｍＨＩ，ＸｂａＩ，ＢｇｌＩ，ＨｉｎｄⅢ，ＢⅡ，ＰｖｕⅡ，ＸｈｏⅠ，ＥｃｏＲⅠ，ＳａｌⅠ在草鱼ｍｔＤＮＡ分子上分别具有２，３，３，４，７，３，６，２，４及０个切点。根据单酶解及双酶解结果建立了草鱼ｍｔＤＮＡ的限制性酶切图谱。     

草鱼生长激素基因的克隆及原核表达研究

应用RT-PCR技术从草鱼脑垂体总RNA中克隆草鱼生长激素cDNA(cGH)，全长669bp，含开放阅读框633bp，编码210个氨基酸，分子量为23．6kDa，等电点为6．28；与已报道的草鱼GH有12个碱基、3个氨基酸残基的差异，同源性为98％．将草鱼cDNA定向插入原核表达载体pGEX-4T-1，构建了重组草鱼GH基因质粒pGEX-GcGH，经IPTG诱导，pGEX-GcGH在大肠杆菌中可表达49．6kDa的融合蛋白．     

中药制剂对鳗弧菌感染草鱼抗病性的研究

在水产养殖中,中草药制剂对鱼类细菌性疾病的治疗具有良好效果,本文选用中草药优良配方对感染鳗弧菌的草鱼进行治疗观察实验,结果表明,该配方对草鱼鳗弧菌感染疾病有明显的治疗作用,不同的用药量,效果各异,其中2%给药量实验组草鱼死亡率最低。     

草鱼胰蛋白酶的分离纯化及性质研究

从草鱼肝胰脏中分离纯化出一种胰蛋白酶．纯化过程包括：硫酸铵分级沉淀,DEAE-Sephamse离子交换,Sephacryl S-200凝胶过滤和Q-Sepharose离子交换层析．SDS-PAGE显示在分子量约为28．5ku处有单一电泳带,表明该酶已得到高度纯化．以Boc-Leu-Arg-Arg-MCA为底物测得该酶的最适温度为40℃．最适pH值为9．0．丝氨酸蛋白酶抑制剂（Pefabloc SC,PMSF,Benzamidine）对该酶的活力有明显抑制作用．底物特异性实验表明该酶特异性分解精氨酸和赖氨酸残基的C末端,进一步证明纯化蛋白为草鱼胰蛋白酶,其酶学性质与鲤鱼胰蛋白酶相似．     

草鱼对饲料中碳水化合物利用的研究

用ρ均为４５％的马铃薯淀粉、糊精、葡萄糖和４５％马铃薯淀粉＋０５％Ｃｒ２Ｏ３为碳水化合物源的４种试验饲料饲喂草鱼,１６ｄ后测定消化率,５０ｄ后测定消化组织的淀粉酶活性．结果表明,日增质量率和饲料效率在各组之间均无显著差异（Ｐ＞００５）;草鱼对淀粉、糊精、葡萄糖和淀粉＋Ｃｒ２Ｏ３的表观消化率分别为５９２５％,９８５２％,９８５９％和５７３７％;各试验组消化组织的淀粉酶活性在摄食后下降,肝胰脏和前肠、中肠、后肠淀粉酶活性的最低值分别出现在摄食后３ｈ,３～５ｈ,５～８ｈ,并且淀粉＋Ｃｒ２Ｏ３组的淀粉酶活性低于淀粉组     

草鱼和鲢仔鱼耳石原基和中心核特征的研究

描述了草鱼和鲢仔鱼耳石原基和中心核的形态特征，并测定了其大小．草鱼仔鱼矢耳石和微耳石原基的直径分别为8．60～11．34μm和8．03～9．95μm，鲢仔鱼矢耳石和微耳石原基的直径分别为9．48～10．36μm和8．54～9．75μm，草鱼仔鱼矢耳石和微耳石中心核的直径分别为18．53～21．90μm和17．03～20．03μm，鲢仔鱼矢耳石和微耳石中心核的直径分别为18．53～21．02μm和17．34～19．36μm．两种仔鱼的人工繁殖饲养种群的耳石中心核直径均显著小于野生种群，可用于种群鉴别．     

重金属镉和铬对草鱼苗的急性和慢性毒性效应

以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为受试生物,研究了重金属镉和铬(Ⅵ)对其鱼苗的急性毒性、慢性毒性以及组织学影响.急性实验结果表明:镉与铬(Ⅵ)对草鱼苗的联合毒性在24 h和48 h,AI＞0,为协同作用.慢性实验结果表明:随着时间的延长,不同镉、铬(Ⅵ)质量浓度处理,肝胰脏中GPT活性呈下降趋势,两者联合处理质量浓度对GPT活性的影响呈现先升高而后又下降的趋势.组织切片观察结果显示:鳃、肝胰脏、肠和脾脏对重金属染毒表现出不同程度的病理变化.研究表明重金属镉和铬不仅能够影响草鱼苗主要酶的活性、使鱼体组织器官明显受损,而且两者表现出明显的协同损伤作用.     

草鱼碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质研究

用Tris—HCl缓冲液抽提，硫酸铵分级沉淀，DEAE-纤维素和葡聚糖凝胶层析，从草鱼肠中提取出碱性磷酸酶（ALP）．提取倍数为6．74，比活为684U／mg蛋白．酶液经PAGE呈现单一带，该酶催化对硝基苯磷酸二钠（pNPP）水解反应的最适pH值为10．41，最适温度为27℃，Km值为1．01mmol／L，酶的热稳定性与pH稳定性研究表明：该酶在pH6．6～11．5区间和在温度低于45℃下稳定．研究金属离子对酶活力影响的结果表明：一价金属离子Li^＋、Na^＋和K^＋对酶活力没有影响；二价金属离子Mg^2＋、Mn^2＋和Co^2＋对酶有不同程度的激活作用；Zn^2＋对酶有抑制作用．     

草鱼肌肉生长抑制素cDNA克隆及序列分析

利用RT-PCR技术,从草鱼肌肉组织中克隆出MSTN cDNA序列,长度为1764 bp,编码区为1128 bp,共编码375个氨基酸.前体蛋白包括信号肽序列、N端前肽区、蛋白酶水解位点RIRR及C端活性区(含9个保守的Cys残基).多重序列比较表明,草鱼与斑马鱼、黑头软口鲦之间的MSTN序列同源性在94%以上,与其它鱼类之间的序列同源性也较高(78.1%~82.3%),但与鸟类、哺乳类之间的序列同源性则相对较低.系统进化分析显示,不同物种间的MSTN序列同源性基本反映了它们的亲缘关系.     

草鱼肌肉生长抑制素cDNA克隆及序列分析

利用RT-PCR技术,从草鱼肌肉组织中克隆出MSTN cDNA序列,长度为1764 bp,编码区为1128 bp,共编码375个氨基酸.前体蛋白包括信号肽序列、N端前肽区、蛋白酶水解位点RIRR及C端活性区（含9个保守的Cys残基）.多重序列比较表明,草鱼与斑马鱼、黑头软口鲦之间的MSTN序列同源性在94%以上,与其它...     

草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶的分离纯化与性质研究

通过DEAE-Sephacel离子交换层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤层析、羟基磷灰石层析和Phenyl Sepharose 6-Fast Flow疏水层析,从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉中分离纯化得到了一种亮氨酸氨肽酶,并对其生物化学性质进行了研究.结果表明,草鱼肌肉亮氨酸氨肽酶分子量约为105 ku,是单体结构.最适温度为40 ℃,最适pH为7.5,属于金属蛋白酶.除了Leu-MCA,该酶对其它多种荧光合成底物也有一定程度的分解作用,但对内肽酶对应的荧光底物则没有分解作用.     

单剂量口灌呋喃唑酮在草鱼体内消除及组织残留研究

按60 mg/kg的剂量给草鱼灌服呋喃唑酮,用高效液相色谱法检测用药后不同时间的血浆、肝脏、肾脏及肌肉中药物浓度,然后用MCPKP药代动力学软件处理药时数据,对药物在草鱼体内消除及组织残留进行研究.结果表明单剂量口灌呋喃唑酮在草鱼血液中主要药动学参数为 AUC 3.756 9 μg*h/mL, Cmax 0.517 6 μg/mL, t1/2α1.524 9 h,t1/2β22.863 2 h,Tpeak 2.229 6 h,k10 1.015 8 h-1,k12 0.124 9 h-1,k210.0654 7 h-1;给药后72 h肌肉和血浆中检测不到药物,7 d后肝、肾中药物消除.     

6-姜酚对草鱼鱼糜凝胶特性及贮藏稳定性的影响

为了研究6-姜酚对鱼糜凝胶特性及贮藏稳定性的影响,分析了添加不同浓度的6-姜酚后,草鱼鱼糜在4℃冷藏过程中凝胶强度、持水性、色泽、挥发性盐基氮(TVB-N)、硫代巴比妥酸反应物(TBARS)、总巯基含量和细菌总数的变化规律。结果表明,添加6-姜酚的鱼糜凝胶强度和持水性显著高于对照组,且随着添加量的增加呈现先上升后下降的趋势,在添加量为1%时达到最大值。在冷藏过程中,6-姜酚可明显延缓凝胶强度、持水性、白度和总巯基含量的下降,同时抑制TVB-N、TBARS和细菌总数的升高。因此,在鱼糜生产中,添加1%的6-姜酚可改善鱼糜凝胶特性,并延长其保质期。     

草鱼过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)基因 cDNA序列的克隆及其组成型表达

过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)是核激素受体超家族成员之一,分α,β,γ 3个亚型,PPAR具有多种生物学效能,对其基因进行研究将有助于揭示草食性鱼类对营养物利用规律及其机制.通过简并引物克隆草鱼(Ctenopharyngodon idellus)PPAR基因cDNA核心序列,应用3'RACE技术扩增该序列的3'末端序列,并对其进行序列分析,最后用荧光定量PCR方法比较草鱼肝脏、脑、脾脏、肌肉、脂肪和心脏的PPARα、PPARβ和PPARγ基因mRNA相对表达水平.序列分析结果表明,草鱼PPARα、PPARβ和PPARy基因cDNA核心序列片段大小为631 bp,604 bp和651 bp,分别编码210、201和217个氨基酸,PPARy经3'RACE后共获得大小为1 331 bp的片段,编码337个氨基酸.草鱼与鲤鱼(Cyprinus carpio)、斑马鱼(Danio rerio)、鲈鱼(Lateolabrax japonicus)等鱼类PPAR氨基酸序列同源性很高,为71.4%～96.1%;与人(Homo sapiens)、大鼠(Rattus norvegicus)、小鼠(Mus musculus)、牛(Bos taurus)等哺乳动物PPAR氨基酸序列的同源性也较高,为65.0%～77.6%;与非洲爪蟾(Xenopus laevis)等两栖动物PPAR氨基酸序列的同源性约为67.0%.荧光定量PCR结果表明,草鱼PPARα于肝脏,PPARβ于肝脏、肌肉和心脏,PPARγ于肝脏的表达相对较高.相同物种不同PPAR亚型的同源性较低,而不同物种同型PPAR同源性很高,反映了不同亚型在结构上的差异,这与其在功能上的差异是相一致的.     

草鱼脂肪酸去饱和酶和延长酶基因cDNA全序列的克隆与分析

利用RT-PCR和RACE方法克隆得到草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝脏中控制高不饱和脂肪酸(HU-FA)合成的脂肪酸去饱和酶(FAD)和脂肪酸延长酶(ELO)基因cDNA全序列.结果表明,草鱼FAD基因cDNA全长为1 994 bp,开放阅读框(ORF)为1 332 bp,编码444个氨基酸...