海生红藻多管藻中2种R-藻红蛋白的分离与分析

本研究以海生红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析和Butyl Sepharose 4 Fast Flow疏水作用层析,从Sephacry S-300 (S-300)凝胶过滤所得R-藻红蛋白中分离纯化出在带电性和疏水性表现结构特性差异的2种R-藻红蛋白组分,R-PEI和R-PEII.这2种R-藻红蛋白在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)和非变性等电聚焦(native isoelectric focusing,Native-IEF)中均表现单一条带,等电点(pI)分别为R-PEI 4. 7,R-PEII 4. 6. R-PEI和R-PEII有着相同的荧光光谱和400～750 nm吸收光谱,仅在波长小于400 nm时R-PEI表现出大于RPEII的紫外光吸收. SDS-PAGE多肽组成分析结果证明,R-PEI和R-PEII不仅有相同的α、β、γ等有色亚基,而且含有相同无色多肽.这些结果表明,R-PEI和R-PEII来自于多肽链的结构特性变化,没有对R-藻红蛋白各亚基的发色团构象及其微环境产生明显影响.     

蓝隐藻藻蓝蛋白亚基的分离及特性研究

以纯化的蓝隐藻(Chroomonas plaoidea)藻蓝蛋白PC645为材料,经尿素变性、分子筛层析以及SDS-PAGE与IEF电泳技术分离、纯化其2类不同亚基,并测定了亚基的吸收光谱、荧光谱、等电点以及pH耐受性等.结果表明,隐藻PC645异二聚体的亚基结构稳定,8 mol/L尿素处理48 h方可令A_(645)=10的PC645样品变性完全.SDS-PAGE与IEF电泳结果表明,经Sephacryl S-100层析得到的α与β亚基组分达到了完全分离的效果,并证实PC645存在分子质量和等电点均不相同的2种β亚基.光谱分析显示,分离后的α和β亚基依然保持光谱活性,其中β亚基是PC645的660 nm特征荧光发射位点,并且在pH值为4.92的磷酸缓冲液中可保持45 d内光谱形态稳定;而α亚基所含的MBV色基不产生荧光,亚基的pH耐受性以pH值为7左右为最佳.实验结果将为研究藻蓝蛋白的亚基结构、能量传递途径等提供相应理论依据,并为进一步的亚基序列分析奠定了基础.     

红藻多管藻(Polysiphonia Urceolata)R-藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白吸收系数测定及藻胆体藻胆蛋白组成分析

选用多维层析和非变性PAGE(Native-PAGE),从海生多管藻(Polysiphonia Urceola-ta)藻胆蛋白提取液中制备纯度符合光吸收系数测定要求的藻蓝(R-PC)和别藻蓝(AP)蛋白.选用Bradford和Hartree-Lowry法,用牛血清蛋白和γ-球蛋白作标准蛋白,对R-PC、AP进行蛋白浓度...     

HPLC及LC-ESI-MS分离鉴定B-藻红蛋白的亚基(英文)

摘要:为了分析B-藻红蛋白的三种亚基,采用反相HPLC并通过二极管阵列/紫外可见光检测器和荧光检测器,以及LC-电喷雾/MS质谱检测器进行在线检测与鉴定.结果表明,根据在线检测的光谱特征,α,β和3个明显的γ亚基都能成功地被C4柱分离,且α和β亚基均在555 nm处有最大吸收峰,而γ亚基在493nm和555nm处有最大吸收峰.并结合质谱信息,可鉴别出α和β亚基,它们的相对分子质量分别为18977和20330.说明结合上述几种检测技术可为B-藻红蛋白的亚基鉴定提供可靠的结果.     

蓝隐藻PC645两种β亚基的分离及空间结构差异性

为了确认蓝隐藻(Chroomonas placoidea T13)藻蓝蛋白PC645中新发现的β亚基的空间结构差异性,以纯化的C.placoidea PC645为材料,经6 mol/L尿素变性后,摸索了两次DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析法,大规模分离得到了β₁亚基和两种β₂亚基洗脱样品。吸收光谱表明所得的这三种β亚基洗脱组分均保持着活性状态。圆二色谱(CD)显示,β₁亚基与两种β₂亚基的可见光区CD谱相近,但远紫外区和近紫外区光谱存在不同,这说明两种β亚基具有相同的色基组成,但其蛋白质的二、三级空间结构存在差异,其中β₁亚基中α-螺旋的比例高于β₂。上述结果不仅进一步确定了新的β亚基的存在,也为重新认识特异的隐藻藻胆蛋白的亚基组成和组装方式提供了实验依据。     

多管藻R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白的制备及其相对分子质量的测定

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,通过凝胶过滤层析、离子交换柱层析、凝胶电泳,得到纯度较高的R-藻红蛋白和R-藻蓝蛋白.在SDS-PAGE中,藻红蛋白表现出4个带有发色团的亚基α、β、β'、γ和γ',其相对分子质量分别为1.73×1041,.95×104,3.33×104和3.10×104;藻蓝蛋白则表现出3个带有发色团的亚基,分别是:α、β和β',其相对分子质量为1.75×1042,.13×104和2.62×104.不同相对分子质量的γ亚基和β亚基的发现都有别于先前的报道,这对藻红蛋白和藻蓝蛋白结构的研究提供了有价值的研究结果.选用Superdex-200凝胶柱层析对纯化的藻红蛋白和藻蓝蛋白进行了相对分子质量测定,藻红蛋白相对分子质量为2.4×105,藻蓝蛋白相对分子质量为1.36×105这表明纯化制备的藻红蛋白和藻蓝蛋白分别以六聚体((αβ)3γ(αβ)3)和三聚体((αβ)3)形式存在.     

螺旋藻——食用微生物(续二)

生物化学人们已通过钝顶螺旋藻和巨大螺旋藻的凝胶电泳分析出藻兰蛋白[29]——一种与光合作用有关的胆蛋白,并从前者中分离出这种化合物。C—藻兰蛋白和异藻兰蛋白两者显然都是在变性条件下可被电泳法分离的,至少由两种不同亚基所组成的少基数(Oligomeri)复合物。C—藻兰蛋白的α—亚基和β—亚基显示出与各自20500和23—500的分子量相当的易变性,从而形成一个具有最低分子量约44000的少基,异藻兰蛋白是由分子量约为18000和20000的亚基构成的,从而可形成一个最低分子量约为38000的少基。从其它的兰藻中所分离     

海生红藻多管藻中藻胆蛋白的分离纯化

选用Middle Fine Sephadex G-150(MFG-150)、Fine Sephadex G-150(FG-150)以及Sephacryl S-300(S-300)3种凝胶过滤对富含R-藻红蛋白(R-PE)的多管藻藻胆蛋白提取液进行R-PE、R-藻蓝蛋白(R-PC)和别藻蓝蛋白(AP)的分离,并对所得R-PE、R-PC/AP组分用DEAE Sepharose-Fast Flow离子交换层析做进一步纯化,优化建立了从多管藻藻胆蛋白提取液中同时有效分离纯化R-PE、R-PC和AP 3类藻胆蛋白组分的技术方法.     

多管藻中R-藻蓝蛋白与别藻蓝蛋白的分离纯化

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,建立了从多管藻藻胆蛋白提取液中有效分离纯化藻蓝蛋白(R-PC)和别藻蓝蛋白(AP)的层析技术方法,即先使用Sephacryl S-300(S-300)和Sephacryl S-200(S-200)2种凝胶过滤层析从藻胆蛋白提取液中获得R-PC/AP组分,再依次经过Q Sepharose Fast Flow离子交换层析和Phenyl Sepharose 6 Fast Flow疏水层析对凝胶过滤获得的R-PC/AP组分进一步纯化.     

层理鞭枝藻的藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白α—亚基及其色素肽 …

用紫外可见吸收和圆二色光谱研究了层理鞭枝藻的藻蓝蛋白α－亚基色素肽和藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的可逆光化学,这些研究表明藻蓝蛋白α－亚基色素钛和菏红蓝蛋白α－亚基色素肽分别相应于藻蓝蛋白和藻红蓝蛋白的辅基色素结构域,藻蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻蓝蛋白α－亚基的相应性质很相似,藻红蓝蛋白α－亚基色素肽的光谱性质和可逆光化学与藻红蓝蛋白α－ 基的相应性质相似,不过藻红蓝蛋白α－亚基色     

Purification and Partial Characterization of a Collagenolytic Enzyme Produced by Pseudomonas aeraginosa SCU Screened from Rotten Hides

Strain Pseudomonas Aeraginosa SCU isolated from rotten hides is shown to produce various gelatinolytic enzymes with molecular masses ranging from - 50 to - 200 kD. A gelatinolytic enzyme called PAC exhibiting collagenolytic activity is purified by SP sepharose fast flow, Sephadex G-200 gel filtration and native PAGE cutting method. The purified enzyme has an apparent molecular weight of about 110 kD by SDS PAGE without β-mercaptoethanol. Treatment withtβ-Me suggests that PAC is dissociated into three subunits approximately 33 kD, 25 kD and 20 kD with a ratio of 2:1:1, named sub A, sub B and sub C repectively. EDFA and EGTA display a significant inhibitory effect on the enzyme activity while PMSF, leupeptin and pepstain do not appreciably inhibit it. The first 15 amino acid residues of the major subunit (subA) are determined and the sequence is Ala-Glu-Ala-Gly-Gly-Pro-Gly-Gly-Asn-Gln-Lys-Ile-Gly -Lys-Tyr. This sequence is identical to that of elastase of P. aeruginosa. The fragment of encoding mature sub A is cloned and its sequence is determined, which has a high homology with the gene of elastase. These results indicate that PAC is a novel collagenolytic metalloprotease composed of three kinds of subunits, of which elastase is the major one.     

菠萝焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶的分离纯化及性质研究

应用硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素、Sephadex G-200、磷酸纤维素柱层析分离纯化了菠萝叶片焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP).凝胶过滤和非变性聚丙烯酰胺梯度电泳测定酶的分子量为132kD和140kD,SDS-聚丙烯酰胺电泳分析得到一条分子量为66kD的蛋白主带,表明该酶可能是由同种亚基组成的二聚体.此外,还对该酶的部分酶学性质进行了初步研究.     

盐胁迫下水稻和黑麦幼苗蛋白质组份的变化

耐盐的779水稻幼苗中,盐胁迫后诱导出66kD/P15\5和26kD/p16.0的特异蛋白组份,并有多种蛋白质组份消失和含量减少现象,而在盐敏感的早花2号水稻中,虽然也有少数蛋白质组份被诱导产生,但没有检测到66kD和26kD两种蛋白质组份,并且双向SDS－PAGE谱型相对稳定,一般耐盐的黑麦幼苗中经盐胁迫后也诱导出26kD蛋白组份,因此,66kD,26kD两种蛋白组份可能与耐盐性有关。     

花生AhNCED1重组蛋白原核表达分析

9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶（NCED）是调控ABA生物合成的关键限速酶.根据花生叶片中克隆得到基因AhNCED1，构建融合蛋白重组表达载体，将重组质粒转化到大肠杆菌DH5a中诱导表达，SDS-PAGE分析显示在0.2mmol/L IPTG、4h、28℃的条件,目的蛋白以可溶形式高效表达，相对分子质量在66kD左右. AhNCED1重组蛋白可与制备抗体特异性结合，呈现典型的不规则卷曲结构.     

水稻叶片间断失绿性状表达中特异性蛋白质的研究

用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，分离冷激失绿水稻突变体１１０３ｓ和原始亲本８９０２ｓ在苗期冷激后的叶片蛋白质，电泳结果显示：未经冷激诱导的１１０３ｓ与其突变原始亲本８９０２ｓ的蛋白质组成未见明显差异；诱导后失绿的叶片中，Ｒｕｂｉｓｃｏ的大，小亚基表达正常；一个５６．２ｋＤ的特异性质蛋白质在１１０３ｓ叶片间断失绿区消失，而在同一叶片的绿区及８９０２ｓ叶片中均能检测到。     

菠菜中不同等电点的乙醇酸氧化酶的提取和特性

从不同批次的菠菜绿叶中可纯化出5种不同活性和等电点（pI）的乙醇酸氧化酶（CO）．SDSPAGE表明它们均有40kD亚基,它们的比活会随蛋白浓度的增加而上升．第一种CO的pI〈8．3,比活为0．47U／mg,PAGE测定其全酶相对分子量（Mr）为280kD,280kD较稳定．第二种CO的pI〈8．3,但比活为3．44U／mg,PACE测定其Mr为560kD,但很快解聚为280kD．解释了前人报告CO的Mr大多为280kD．第三种CO的pI≈8．3,比活为8．4U／mg,放置后pI会下降至〈8．3,此时用PAGE测出其Mr为560kD．第四种CO的pI〉8．3,比活为27．8U／mg,放置pI也会下降为8．3．第五种CO的pI〉10．2,活性高达113U／mg,放置后其pI也会下降至〈8．3,由于CO的pI会下降,暗示低pI的CO可能并不存在于植物体内,而是实验中的娇作物．     

兔角膜上皮特异性水溶性蛋白质的电泳分析

分离兔角膜上皮和皮肤表皮，提取水溶性蛋白质，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ以及ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术对其组成进行分析研究，发现兔角膜上皮存在５种主要特异性水溶性蛋白质，其分子量和等电点分别为：Ｍｒ６８２００，ｐＩ７．５；Ｍｒ６１７００，ｐＩ５．１；Ｍｒ５１３００，ｐＩ７．６；Ｍｒ３６３００，ｐＩ８．９和Ｍｒ２５７００，ｐＩ５．７。     

GHRP-scu-PA-32K突变体的构建、表达及纯化产物的部分性质研究

在scu-PA-32K的cDNA分子基础上经定点突变,在N端紧接Leu¹之前引入编码GHRP四肽的寡核苷酸序列(GGTCATAGGCCT),构建了GHRP-scu-PA-32K的突变体cDNA。将它克隆到表达载体pCM-βneo中,与pCMβ-dhfr共转染CHO/DHFR-细胞。筛选到的稳定表达株在无血清培养基的表达量为580IU/(106细胞·24h)。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,SDS-PAGE显示为单一蛋白条带,分子量为33kD,质谱法测定分子量也为33kD。经血纤维蛋白平板法测定比活为150000IU/mg蛋白。对血纤维蛋白的亲和性,突变体为scu-PA-32K的4.5倍。     

苦荞类胰蛋白酶水解酶的纯化及部分性质研究

采用缓冲液提取、盐析、凝胶过滤及离子交换层析等方法，从苦荞种子中分离纯化出1种类胰蛋白酶水解酶，经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测得其分于量为67kD，等电聚焦(IEF)测得等电点为6．3．该酶可以水解胰蛋白酶的底物BApNA，而且其活性不受苦荞胰蛋白酶抑制剂的影响．通过比较，苦荞中的胰蛋白酶水解酶在性质上与报道的甜荞BAPAase极为相似，可能属于同一类蛋白酶．     

油菜花粉钙结合蛋白的研究

以油菜花粉(Brassica campestris)为材料纯化了钙调素(CaM),并得到一种新钙结合蛋白(NCBP)。经SDS-PAGE、PAGE和等电聚焦电泳(IEF)鉴定,这两种蛋白质均表现均一。CaM分子量为18.8kD, NCBP为16.3kD,等电点分别为3.6和4.2。研究证明花粉CaM具有与其他来源CaM所特有的性质,对环核苷酸磷酸二酯酶(简称PDE)有明显的激活作用,而花粉NCBP不明显。花粉CaM在PAGE和SDS-PAGE中电泳行为有Ca²⁺效应,而NCBP仅表现在PAGE中。经氨基酸组成分析表明两种蛋白质氨基酸组成不同,但均含有较多的酸性氨基酸,不含Trp, 含1个Cys。CaM和NCBP N-端均为封闭,CaM C-端为-Met-Ala-Lys-COOH。两种蛋白质具有不同的肽谱和CD谱。用DTNB修饰花粉CaM Cys残基,则激活PDE的能力明显下降。