2-脱氧葡萄糖对酵母虾青素积累及酶法提取的影响

2-脱氧葡萄糖是一种酵母细胞壁合成抑制剂,红发夫酵母培养中添加0．0005％—0．002％（w／v）的2-脱氧葡萄糖可使生物量基本保持不变,但能促进虾青素积累,在增加虾青素产量的同时缩短酶法提取的时间。当添加浓度为0．002％时,虾青素含量可提高到对照组的113．7％,若采用胞壁溶解酶对红发夫酵母破壁提取虾青素,作用12h提取率可达94．7％。同时,2-脱氧葡萄糖应在红发夫酵母培养的前36h添加。     

利用添加乙醇增加Phaffia rhodozyma虾青素产量

研究了摇瓶中乙醇对Phaffiarhodozyma细胞生长和虾青素积累的影响 .乙醇的添加增加了虾青素产量 ,但抑制了细胞生长 .在细胞生长的不同阶段添加乙醇均能增加虾青素产量 ,差别不显著 .为提高虾青素产量 ,最佳乙醇添加浓度为 3g·L- 1.添加 3g·L- 1乙醇时 ,得到 3475 μg·L- 1和 4 19μg·g- 1的虾青素产量和含量 ,分别比对照提高了 12 %和 11% .该研究提供了一种简单而廉价的增加虾青素产量的方法 .     

产虾青素红发夫酵母Phaffia rhodozyma的反应器培养

利用经过优化的简单培养基在5L机械搅拌式生物反应器中对产虾青素红发夫酵母Phaffia rhodozyma进行高密度培养．培养过程分两个阶段：初始阶段以细胞生长为主,大量积累酵母细胞;当细胞浓度达到一定的水平后,在培养中后期流加尿素,促进细胞内虾青素合成,提高虾青素产量．最终得细胞干重为30．8g／L,虾青素产量为28．1mg／L（以单位体积发酵液中的虾青素质量计）,虾青素含量为923．2ug／g（以每克干细胞中的虾青素质量计）,原料对细胞的转化率为0．359．研究结果为用红发夫酵母大规模培养生产虾青素奠定了基础．     

法夫酵母类胡萝卜素的分析测定研究

对法夫酵母类胡萝卜素的光谱学特征、分光法测定法夫酵母类胡萝卜素总量、高效液相色谱测定法夫酵母虾青素进行了研究．在二甲基亚砜丙酮混合液中,法夫酵母类胡萝卜素最大吸收峰的波长范围为473～481nm;以虾青素为标准样,用分光法测定法夫酵母类胡萝卜素总量和用高效液相色谱法测定法夫酵母虾青素标准曲线回归模型的R2值超过了0．999,样品的回收率分别在98．85％～102．60％和99．96％～102．44％之间,RSD值分别在0．30％～7．00％和0．61％～2．26％之间,都在定量分析的阈值范围内,能满足定量分析的要求．用建立的方法对分批培养的法夫酵母样品进行分析,结果表明,法夫酵母主要在对数生长期和稳定期合成类胡萝卜素．     

维生素对红法夫酵母产虾青素的影响

采用单因素实验方法研究了不同维生素对红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)生长及虾青素积累的影响.结果表明:生物素、泛酸钙、肌醇、VB1可显著提高红法夫酵母的生物量、类胡萝卜素和虾青素的产量,其较适质量浓度分别为0.05,25.00,0.50,0.05 mg/L.VB12和核黄素对红法夫酵母的细胞生长有明显的促进作用,同时可略微提高虾青素产量,其较适质量浓度分别为0.50和0.005 mg/L;VB6、烟酸和叶酸虽然可促进细胞生长,但却明显抑制了虾青素的积累;而硫辛酸既抑制细胞生长也抑制其虾青素的积累.根据单因素实验结果,在培养基中按以上较适浓度添加生物素、泛酸钙、肌醇、VB1、VB12和核黄素,菌体生物量和虾青素质量浓度分别达到5.000 g/L和16.77 mg/L,较对照组分别提高了33.2%和108%.     

法夫酵母人工诱变及突变株筛选的研究

用硫酸二乙酯对法夫酵母进行了诱变,并用薄层色谱法及高效液相色谱法对突变株进行了筛选鉴定,当诱变剂浓度为1％、诱变温度为20℃时,法夫酵母诱变处理的最适时间约为5min．根据视觉差异分离二苯胺平板上长出的法夫酵母菌落,用薄层色谱法初筛,并用液相色谱法鉴定出了虾青素高产菌株、虾青索低产菌株、类胡萝卜素组成缺陷菌株．     

不同碳源及其浓度对红发夫酵母培养的影响

研究了不同碳源及浓度对红发夫酵母Phaffia rhodozyma生长及虾青春积累的影响。 结果表明碳源浓度在20－30g/L范围内对红发夫酵母生长及虾青素合成有利。在所研究的领域中，糖蜜有利于生长，而木糖有利于虾青春积累。采用木糖和糖蜜的混合碳源，虾青春产量达到1．9mg/L。     

法夫酵母银染mRNA差异显示技术的建立

对影响银染DDRT-PCR方法的主要因素如RNA投入量、引物浓度、MgCl2浓度、dNTPs浓度以及二次扩增的退火温度进行优化.实验结果表明:适宜分析法夫酵母mRNA差异显示的银染DDRT-PCR的条件是总RNA投入量为0.4 μg、引物浓度为1.5 μmol/L、dNTPs浓度为0.25 mmol/L、MgCl2浓度为1.7 mmol/L、二次扩增的退火温度为40 ℃.     

米根霉、法夫酵母双菌共发酵淀粉生产虾青素的初步研究

对米根霉、法夫酵母共发酵淀粉生产虾青素进行了研究．摇瓶试验结果表明，米根霉、法夫酵母共发酵淀粉生产虾青素适宜的培养基为淀粉50g／L、1gKH2PO4/L、1g CaCl2／L、1g酵母膏/L、0.5gMgSO4／L、5g（NH4）2SO4/L，控制培养基初始pH为8．0、发酵温度为22℃及同时接种米根霉和法夫酵母有利于虾青素的合成，5L罐试验结果表明虾青素合成滞后于糖的利用，且分成两个增长阶段，虾青素的最大产量达2．48mg／L．这些试验结果不仅证实了共培养米根霉和法夫酵母发酵淀粉生产虾青素的理论可行性，而且为进一步利用淀粉为原料生产虾青素提供了试验参考．     

生物素对红发夫酵母生长和虾青素积累的影响

在摇瓶中研究生物素对红发夫酵母生长和虾青素积累的影响.结果表明生物素的添加能促进细胞生长,但对细胞内虾青素含量的提高不利.添加10μg/L生物素时,最大比生长速率达到0.110 h-1;添加6μg/L生物素时,达到最大细胞干重9.95g/L,比没有添加生物素时的7.53g/L提高32%.添加2μg/L生物素时,达到最高虾青素产量和产率,分别为3 825 μg/L和53μg/(L@h),比没有添加生物素时的2 944 μg/L和41μg/(L@h)提高30%.没有添加生物素时,达到最高细胞虾青素含量391μg/g.利用添加2μg/L生物素的方法可以提高虾青素产量,这种方法为提高虾青素产量提供了一种简单廉价的方法.     

红发夫酵母原生质体形成的影响因素

研究了制备红发夫酵母原生质体的影响因素．菌体的培养时间、培养温度、酵母代数、培养基装液量、酶含量、高渗溶质性质、pH值、酶解温度和酶解时间等都对原生质体的形成产生较大的影响．原生质体形成的最适条件是：0～2代酵母在15或25℃培养12～16h，装液量100mL，用0．8mol/L KCl作高渗稳定剂，酶含量l％，酶解温度22℃，酶解时间16h，酶解pH8.0。     

雨生红球藻和红发夫酵母混合培养体系的氮代谢机理

雨生红球藻和红发夫酵母是自然界申能够大量合成虾青素的两种主要微生物,二者混合培养比单独培养能提高虾青素的产量,氮代谢是影响虾青素合成的关键因素之一．为此,着重研究了雨生红球藻单独培养及混合培养过程中的氮代谢机理．结果表明,在强光照射诱导雨生红球藻合成虾青素的过程中,藻细胞迅速吸收硝酸盐并向胞外分泌NH_4~ ,培养液中的NH_4~ 浓度上升,同时值pH值也急剧升高．由于NH_4~ 对藻细胞有毒害作用,抑制了虾青素的进一步合成．而在混合培养过程中,即使在虾青素大量合成阶段,培养液中的NH_4~ 浓度也基本稳定．进一步的分析结果表明,红发夫酵母细胞吸收利用了雨生红球藻细胞代谢过程中产生的NH_4~ ,培养液的pH值基本稳定7．0左右,从而使藻细胞内流向虾青素合成方向的碳代谢流始终保持较高的通量,提高了虾青素产量．     

Studies on optimization of nitrogen sources for astaxanthin production by Phaffia rhodozyma

Fermentation of Phaffia rhodozyma is a major method for producing astaxanthin, an important pigment with industrial and pharmaceutical application. To improve astaxanthin productivity, single factor and mixture design experiments were used to investigate the effects of nitrogen source on Phaffia rhodozyma cultivation and astaxanthin production. Results of single factor experiments showed nitrogen source could significantly affect P. rhodozyma cultivation with respect to carbon source utilization, yeast growth and astaxanthin accumulation. Further studies of mixture design experiments using (NH₄)₂SO₄, KNO₃ and beef extract as nitrogen sources indicated that the proportion of three nitrogen sources was very important to astaxanthin production. Validation experiments showed that the optimal nitrogen source was composed of 0.28 g/L (NH₄)₂SO₄, 0.49 g/L KNO₃ and 1.19 g/L beef extract. The kinetic characteristics of batch cultivation were investigated in a 5-L pH-stat fermentor. The maximum amount of biomass and highest astaxanthin yield in terms of volume and in terms of biomass were 7.71 mg/L and 1.00 mg/g, respectively.     

高效液相色谱法检测红发夫酵母胞内虾青素

确定了红发夫酵母的破壁提取方法并采用高效液相色谱法定量地测定了红发夫酵母胞内虾青素的含量。试验得到的液相色谱条件为:色谱柱KromasilC18, 5μm, 250mm×4. 6mm;流动相为甲醇和乙腈,V甲醇∶V乙腈=9∶1;流速1. 4mL/min;检测波长478nm;柱温为室温。加标回收率为(98. 2~102. 8)00。     

用酸化油制备聚酯多元醇的研究

以油脂下脚料酸化油为原料,通过与顺丁烯二酸酐加成,再与二甘醇酯化,得到聚酯多元醇,其最佳工艺条件为:M(酸化油)∶M(顺丁烯二酸酐)∶M(二甘醇)=1∶1∶3.3;顺丁烯二酸酐在180℃、195~200℃、200~220℃分3次加入,各反应1 h,在230~240℃下反应0.5 h;240℃下常压酯化10 h;240℃减压酯化1 h。合成的聚酯多元醇酸值小于1 mg/g,羟值在250~300 mg/g。以合成的聚酯多元醇为原料,制备的双组分聚氨酯胶粘剂性能可以达到彩钢板与聚苯乙烯泡沫塑料的胶合工艺要求。     

木瓜蛋白酶在虾仁加工废弃物中提取虾青素的应用

以大明虾虾仁加工废弃物为原料,利用木瓜蛋白酶对其进行水解,提取虾青素.均匀试验法及回归方程分析结果表明,酶解最适条件为:温度44.5℃、pH 5.51、时间92.6 min、加酶量1.30%.该条件下,湿虾壳总类胡萝卜素释放率为63.059μg.g-1,比直接用有机溶剂提取方法释放率提高19.879%.     

活性污泥宏基因组DNA提取方法优化

宏基因组DNA的成功获取是宏基因组学技术顺利开展的关键.利用溶菌酶-SDS-蛋白酶K法（LSK法）提取活性污泥宏基因组DNA,结合单因素法与表面响应法对提取过程的4个关键步骤进行条件优化,即预处理、细胞裂解、蛋白去除及DNA沉淀过程.确定影响DNA产量的重要因素：预处理缓冲溶液与DNA沉淀剂类型、CTAB质量分数、溶菌酶浓度、37℃水浴时间及SDS质量分数.确定LSK法提取宏基因组DNA的最佳条件：TENC预处理活性污泥;1.5%CTAB;0.5mg/mL溶菌酶,37℃水浴1.4h;2%SDS,200μg/mL蛋白酶,55℃水浴2.5h;异丙醇沉淀DNA 40min.在最佳条件下,活性污泥宏基因组DNA的最大产量为每g污泥170μg.本研究可为环境样品中高质量宏基因组DNA的提取提供有价值的参考.     

虾青素抑制H2O2诱导的HeLa细胞凋亡

为了阐明虾青素的抗氧化作用与细胞凋亡的关系,探究虾青素预处理对H_2O_2诱导HeLa细胞氧化应激的影响.通过CCK-8、活性氧探针染色、流式细胞术、蛋白质免疫印迹、实时荧光定量pcr等,分别检测细胞存活率和活性氧的积累、细胞凋亡、蛋白含量、基因相对表达量改变.结果表明虾青素预处理组细胞活力较对照组提高了29.54%以上且其可以将H_2O_2诱导的活性氧降低至对照水平,同时提高Nrf2蛋白表达量3倍之多,过氧化氢酶基因相对表达量1.5倍.说明虾青素可以有效缓解H_2O_2诱导的HeLa细胞氧化应激,从而抑制细胞凋亡.     

补骨脂素超声提取工艺的优化

为了得到超声辅助提取补骨脂素工艺的最佳工艺条件及数学模型,采用单因素实验和响应面法,对影响超声辅助提取补骨脂中补骨脂素工艺的因素进行分析.得到最佳的超声提取工艺:补骨脂的颗粒为100～120目,超声波的频率为40 kHz,超声提取时间为41 min,溶剂为体积分数80％的乙醇水溶液,料液比为10 mL/g,溶剂的初始温度为52℃.最佳工艺条件下补骨脂素的提取率可达0.621％,提取率远高于普通溶剂提取率.用Design-Expert 7.0.0软件对实验数据进行二次拟合及分析,建立了可靠、稳定的数学模型,并得到各因素对提取率的影响顺序由强到弱依次为溶剂起始温度、料液比、超声时间.     

基于枚举法的锥齿轮传动优化设计

本文首先讨论了枚举法在小型机械优化设计中的优点,给出了运用枚举法进行机械优化设计的方法,然后建立了锥齿轮传动优化设计的数学模型,最后运用枚举法对该模型进行了求解。