环境因子对转基因鱼腥藻7120生长的影响

研究了培养瓶规格、光照时间、光质以及温度对转基因鱼腥藻７１２０生长的影响,结果表明：在５％接种量下,培养瓶规格越小,越有利于藻体的生长;藻体的生长以每天１８ｈ的光暗交替的光照时间最好;单色光对藻体的生长以蓝光效果最好;藻体生长的最佳温度为２５～３０℃。     

鱼腥藻毒素合成中间体的不对称合成

报道(一)-AnTx-a关键中间体的四步合成新途径,设计一个新型(一)-AnTx-a类似物并以同法合成其中间体,本法是对以Mannich反应为基础的AnTX-a的合成策略的补充。     

转基因鱼腥藻7120光异养生长的研究

研究了不同有机碳源对转基因鱼腥藻７１２０生长的影响,在此基础上进行了光异养条件的优化,并研究了外源添加剂Ｌ－精氨酸、生长激素２,４－Ｄ与ＫＴ对藻细胞生长的影响。结果表明：蔗糖和葡萄糖能促进藻体的生长;最优碳氮源组合为葡萄糖６ｇ／Ｌ、ＮａＮＯ３１．５ｇ／Ｌ,经高压灭菌;Ｌ－精氨酸不支持藻体的光异养生长;一定含量的２,４－Ｄ与ＫＴ能促进藻体在光异养条件下的后期生长。     

all 1691基因表达及铁元素对鱼腥藻生长的影响

为实现FurA的表达,探究铁元素对藻生长的影响,首先运用Primer5.0设计引物,克隆出鱼腥藻PCC7120染色体上all1691(furA)基因片段;构建含组氨酸融合表达标签和T7启动子标签的表达载体.IPTG诱导FurA蛋白表达.然后设计不同Fe3+浓度梯度培养基,利用SDS-PAGE检测高、中、低Fe3+浓度培养液的藻细胞总蛋白,考马斯亮蓝g-250法测定蛋白含量,并用Trizol法提取不同Fe3+浓度培养的藻细胞总RNA.结果表明,获得纯化的all 1691克隆片段,大小为456bp,pET-1691重组蛋白在1mmol/L的IPTG诱导下,于37℃下摇床培养15h得到成功表达;低浓度Fe3+促进藻生长,高浓度Fe3+抑制藻生长;Fe3+浓度为2.0mg/L时rRNA位置与亮度清晰可见,而缺铁培养的藻生长几乎停滞,转录和翻译水平都很低.     

转基因满江红鱼腥藻细胞内颗粒体的变化

用透射电镜观察NPTⅡ(新霉索磷酸转穆酶Ⅱ eomycin phosphotransferase Ⅱ)在满江红鱼腥藻染色体gI-LA(谷氨酰氪合成酶基因)位点定点整合后藻细胞内颗粒体的变化．转基因后的满江红鱼腥藻细胞内的代谢发生了很大的变化，为了快速适应和自我调节这一变化．细胞内的储藏颗粒处在积聚与解积聚的动态转化过程中．通过了解储藏颗粒的结构变化，可为研究转基因藻细胞光合同氮及生理生化的变化提供物质结构方面的信息．     

鱼腥藻sp.PCC7120液泡的诱导和分离

将蓝藻培养于含０．０５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ的液体培养基，３ｄ后细胞结构改变，出现无色透明区，将此材料经溶菌酶处理形成原生质球，然后降低渗透压，压生球破裂，液泡释放。此包为极为标准的园球状，完全透明，液体内无可辩物物质。     

椭圆小球藻和鱼腥藻对甲基汞吸附特征研究

以活、死椭圆小球藻和鱼腥藻为研究对象,探究其对甲基汞(MeHg)的吸附特征.结果表明:活、死椭圆小球藻和鱼腥藻对MeHg均有较强的吸附能力,随着MeHg浓度的增加,吸附量逐渐增加.0～5 min时,活、死椭圆小球藻和鱼腥藻吸附MeHg速率较快,随后变缓,最终在120 min时达到吸附平衡.5 min时,活、死椭圆小球藻...     

藻胆体稳定性的研究——-20～-70℃对多变鱼腥藻藻胆体稳定性的影响

研究多变血腥藻藻胆体在-20℃,-30℃,-70℃贮存下,室温和77K荧光发射光谱的变化,结果表明。藻胆体在以上温度下很稳定。     

满江红鱼腥藻glnA启动子/GUS嵌合质粒在烟草中的表达

将满江红鱼腥藻ｇｌｎＡ启动区与ＧＵＳ报告基因连接,构成表达载体并导入烟草,在茎、叶中得到表达．这一结果为研究原核蓝藻与高等植物间转录因子识别、基因表达调控提供了有价值的信息,同时为构建实用载体开拓了新路．     

满江红鱼腥藻glnA基因上游调控区的克隆及其序列分析

以满江红鱼腥藻（Ａａｃ）提取总ＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ技术,扩增得到其谷氨酰胺合成酶基因（ｇｌｎＡ）上游区．经酶切得到４０９ｂｐ的片段,并将其连接到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡｋｓ＋上测序．将测序结果与Ａｎａｂａｅｎａ７１２０调控序列比较,有９８２％的同源性．在上游调控中也具有ｎｉｆｌｉｋｅ和Ｅ．ｃｏｌｉｌｉｋｅ启动子,值得注意的是,调节蛋白ＶＦ１的结合位点正好位于ｎｉｆｌｉｋｅ启动子上．所克隆的片段不但对蓝藻固氮、泌氨的基因调控研究具有意义,也对表达载体的构建具有实用价值．     

固氮鱼腥藻_Anabaena_azotica_Ley_HB686_氢酶的催化性质

固氮鱼腥藻氢酶具有催化分子氢双向可逆反应的能力,其吸氢反应的最佳电子受体为ＭＢ、放氢反应的最佳电子供体为ＭＶ,吸氢活性与放氢活性的比率为１８．６,此氢酶催化吸氢反应的最适ｐＨ值为７．４,放氢为ｐＨ６．０．在２３～５０℃氢酶的催化活性基本稳定．高离子强度、ＮａＣｌ使氢酶活性降低,ＣＯ和Ｃ２Ｈ２对氢酶活力有抑制作用．     

几种赤潮藻对温度、氮、磷的响应及藻间相互作用的研究

目的：研究３种赤潮藻对主要生态因子的响应以及藻间的相互作用。方法：改变温度及氮（Ｎ）、磷（Ｐ）质量浓度的条件下对单独培养及混合培养下拟菱形或（硅藻）、链状亚历山大藻和锥状施克里普藻（甲藻）的增殖情况作出比较研究,结果：发现两种甲藻的存在能促进硅藻的增殖,但需具备一定的条件;当温度为２０℃,Ｎ、Ｐ质量浓度分别达到９６７μｇ／Ｌ和１２８μｇ／Ｌ时,混合培养中的拟菱形藻发生了爆发性增殖,藻细胞浓度已达到     

鱼腥藻PCC 7120染色体上relBE同源基因的克隆及表达

为研究鱼腥藻PCC7120染色体上与relBE同源的基因asl4561和asl4562表达产物的毒素-抗毒素作用,从鱼腥藻细胞中提取总基因组DNA,设计特异引物PCR扩增目的基因asl4561和asl4562,与T载体连接后经XhoI和EcoR I双酶切并与表达载体pET28a（＋）连接,由IPTG诱导表达,并在IPTG浓度和诱导时间上对asl4561基因的表达条件进行了优化.琼脂糖凝胶电泳显示扩增出了264bp的asl4561基因和213bp的asl4562基因,SDS-PAGE检测表明成功表达出15.65kD和13.55kD的两蛋白,当诱导温度28℃、IPTG浓度0.4 mmol/L、诱导时间6h时,asl4561基因表达蛋白在细菌裂解液上清中表达量最大.     

鱼腥藻铁调蛋白基因(alr0957)表达和Fe~(3+)对藻生长的影响

根据CyanoBase提供的鱼腥藻PCC7120 FurC基因(alr0957)序列信息设计特异性引物,用降落PCR法从染色体DNA中扩增得约450 bp目的片段.运用TA克隆将其连接到pMD18-T载体上,经筛选测序获得阳性重组质粒.再经过双酶切、纯化FurC基因,连接原核表达载体pET-28a(+),并转化表达菌株BL21和IPTG诱导表达.经测序鉴定的阳性菌株中的FurC,运用SDS-PAGE检测重组蛋白,并利用镍柱层析法纯化目的蛋白.由藻细胞密度、叶绿素a含量、可溶性糖含量等改变探讨不同Fe3+浓度对藻类生长的影响.结果表明:在37℃经1 mmol/L IPTG诱导18 h,成功表达了分子量约为19000的融合蛋白.小于0.5mg/L Fe3+促进藻生长,大于0.9 mg/L Fe3+抑制藻生长,最适藻生长Fe3+浓度为0.5⁰.9 mg/L.     

人肿瘤坏死因子α在鱼腥藻7120中的表达

通过三亲结合转移方式,将含人肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）ｃＤＮＡ和ｐｓｂＡ启动子的鱼腥藻－大肠杆菌穿梭质粒ＰＤＣ－ＴＮＦ导入单细胞丝状鱼腹藻７１２０中。     

NPTⅡ基因在满江红鱼腥藻染色体DNAglnA位点的定点整合及对泌氨和细胞形态结构的影响

本研究构建了含glnA基因片段和TPTⅡ基因的单交换整合型重组质粒pGN1-4,并通过电激法,三亲接合转移和二亲接合转移法号入到满江红鱼腥藻细胞中。用蓝细菌原位杂交法筛选出转化细胞菌落。再经Southern杂交方法进一步证实了转化结果。化学测氨法表明,培养后7～14d泌氨达到高峰,转化细胞泌氨比对照高40％。光镜观察表明,转化细胞藻丝变短,易断成单个细胞,异形胞频率降低;扫描电镜观察指出,转化细胞外壁有鳞片状鞘层,而对照较光滑。     

固氮鱼腥藻HB686固氮_放氢与谷氨酰胺合成酶的关系

固氮鱼腥藻HB686(Anabaena azotica HB686)的固氮和放氢被氨抑制与蛋氨酸砜亚胺(MSX)解除氨抑制的作用呈平行关系.谷氨酰胺能抑制固氮和放氢,而对谷氨酰胺合成酶(GS)和吸氢酶却有激活作用.固氮血腥藻在Mg~(2+)介质中的乙炔还原活性和放氢量皆比在Mn~(2+)介质中的高,而GS的活性则相反.不同波长的光照射对固氮、放氢和GS活性有不同的影响.     

鱼腥藻铁吸收调节蛋白基因(alr0957)的克隆和表达

依据CyanoBase提供的鱼腥藻PCC7120 furC基因(alr0957)的序列信息设计了一对特异性引物,用Touch-down PCR的方法从基因组DNA中扩增得到大小约450bp的目的片段.通过TA克隆的方法将该片段连接到pMD18-T载体上筛选出重组质粒pMD18-T-fur,然后进行双酶切,纯化furC基因,再连接到原核表达载体pET-28a(+)上,转化表达菌株BL21(DE3).经PCR、双酶切和测序鉴定,对阳性菌株进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组蛋白.结果表明:在25℃条件下经1mmol/L IPTG诱导20h,融合蛋白被成功表达,其分子量约为19 000,为进一步纯化蛋白和对基因的调控功能方面研究奠定了基础.