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相似文献
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1.
目的筛选出适宜的血清及秋水仙碱的作用浓度及时间,使乳腺癌MCF-7细胞分别达到G0/G1和G2/M期同步化。方法采用血清饥饿法诱导MCF-7细胞G0/G1同步化,秋水仙碱诱导细胞G2/M期同步化,流式细胞仪检测细胞各期分布情况。结果处理24 h后,1%血清浓度组G0/G1期细胞分别达到(72. 96±0.84)%,1. 0μg/mL秋水仙碱处理组G2/M期细胞分别占总细胞数(73. 67±1. 77)%。处理36 h后,1%血清浓度及秋水仙碱实验组细胞发生凋亡。结论MCF-7在血清浓度为1%处理24 h后完成G0/G1同步化,在1. 0μg/mL的秋水仙碱处理24 h后完成G2/M期同步化。  相似文献   

2.
取对数生长期的 HepG2 细胞,加入含 TdR 的培养基 28 h 后,收集细胞,用 PBS 洗2次,加完全培养基,分别于 12 h 和24 h 收集各组细胞.用流式细胞术分析细胞周期各时相细胞百分数.探讨 TdR(胸腺嘧啶核苷)诱导人肝癌细胞株 HepG2 同步化后的细胞周期时相的变化.结果是TdR能较好地使肝癌细胞株Hepc2同步化于G1期和G2期.TdR诱导细胞后,分别于12中 h 获得(63.62±2.82)%的 G2/M 期同步化细胞,24 h 后获得(75.24±0.17)%的G1期同步化细胞.  相似文献   

3.
利用α因子可以使MATa酵母细胞的生长停滞在细胞周期的G1期,获得同步化的YKN-10酵母菌细胞,主要研究在25~200μg·mL-1浓度下的α因子对酿酒酵母YKN-10对数早期细胞作用0~5h的同步化影响,每隔0.5h在荧光倒置显微镜下观察酵母细胞的出芽形态,记录细胞的出芽率,然后用SPSS 17.0对酵母细胞的出芽率进行统计分析,α因子的浓度、α因子作用时间及二者的交互效应均对酵母细胞的平均出芽率有显著影响;α因子浓度在175~200μg·mL-1下培养酵母细胞约3.5~4h时,酵母细胞基本上达到了同步化状态,运用α因子停滞细胞生长法获得了同步化的YKN-10酵母菌群体,为非Δbar1突变菌株的同步化研究提供了参考.  相似文献   

4.
探讨了SEMA3A基因在恶性胶质瘤细胞U251迁移和侵袭能力中的作用, 及其用于胶质瘤临床治疗的可行性. 用特异识别SEMA3A基因的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)片段与真核表达载体pFH-GFP-L连接, 再与辅助质粒联用来包装慢病毒. 通过荧光显微镜观察感染胶质瘤细胞U251的感染效率. 通过实时定量PCR技术和Western-blot技术验证了U251细胞中SEMA3A基因的沉默效果. 通过MTT法、PI染色法和Transwell小室分别检测了U251细胞增殖、细胞周期和运动能力的变化. 结果表明, SEMA3A-shRNA慢病毒感染U251能有效下调SEMA3A基因的表达水平(P <0.01), 使U251细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力明显降低(P <0.05), 细胞大量阻滞在G2/M期, 并促进了细胞凋亡(P <0.05).  相似文献   

5.
通过TdR(胸腺嘧啶核苷)调控人肝癌细胞株HepG2的细胞周期,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期全细胞蛋白质组表达的差异,探索参与肝癌细胞株HepG2的G1期、G2/M期调控相关的蛋白.以TdR诱导肝癌细胞株HepG2,分别得到同步化的G1期、G2/M期细胞,流式细胞术检测.采用比较蛋白质组学的研究技术(双向电泳、质谱分析)筛选G1期、G2/M期差异表达的蛋白质.结果流式细胞术检测显示TdR诱导后,分别获得(63.62±2.82)%的G2/M期同步化细胞,(75.24±0.17)%的G1期同步化细胞,通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到21个差异表达的蛋白.其中G2/M期表达,G1期未见表达有10种蛋白;存在三倍以上的差异点11个:2种在G2期表达上调,9种在G1期表达上调.说明TdR阻断法能够获得很好的同步化细胞.质谱鉴定得到的这些差异表达的蛋白质涉及到细胞周期调控、DNA结合、转录调控、mRNA剪接、肽链合成起始、折叠以及细胞代谢等方面.  相似文献   

6.
应用PCR反应使编码蛋白聚糖NG2的核苷酸在3064-3065位置的AG突变成为GC, 构建突变型NG2/S999A. 用表达野生型NG2和突变型NG2/S999A及空白表达载体分别稳定转染人成胶质细胞瘤U251. 应用Western Blot方法鉴定转染后的U251细胞表达野生型及突变型NG2的状态, 证实突变型NG2A999稳定转染的U251细胞株表达的NG2缺失硫酸软骨素葡糖胺聚糖链(C S-GAG). 比较了3种U251细胞株的迁移, 表明蛋白聚糖NG2中CS-GAG链影响细胞的迁移能 力.  相似文献   

7.
探讨人肝癌细胞(SMMC-7721)的同步化方法及粘附分子integrinβ1在不同周期肝癌细胞上的表达。采用胸腺嘧啶脱氧核苷、秋水仙碱顺序阻断和胸腺嘧啶脱氧核苷双阻断后释放培养的方法分别获得G1期和S期的肝癌细胞,用流式细胞仪进行周期分析;采用抗体阻断技术和流式细胞仪检测肝癌细胞上integrinβ1的表达。结果发现未同步化肝癌细胞integrinβ1表达的荧光强度为95.70;G1期和S期细胞的同步率分别为74.09%和98.29%,integrinβ1表达的荧光强度相应为76.90和94.09。得知药物胸腺嘧啶脱氧核苷和秋水仙碱能较好地将肝癌细胞同步于G1期和S期;粘附分子integrinβ1在SMMC-7721肝癌细胞上高表达,但表达水平呈现周期差异。  相似文献   

8.
观察番茄红素对体外培养的雌激素受体阳性(ER+)细胞MCF-7的存活率、细胞周期及凋亡的影响。采用MTT法和H3-TdR掺入法观察番茄红素对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪观察同步化的细胞经番茄红素作用后细胞周期及凋亡的变化。番茄红素抑制MCF-7细胞的增殖和DNA合成,具有剂量效应关系,随着时间延长,抑制作用增强,最大抑制率为52.6%。流式细胞仪结果显示,番茄红素作用24h后,MCF-7细胞周期各相发生变化,G0/G1期细胞增多,而S期和G2/M期细胞减少,但未诱发其凋亡。番茄红素通过阻滞MCF-7细胞于G1期而抑制该细胞的增殖。  相似文献   

9.
汉黄芩素对人神经胶质瘤细胞U251的凋亡诱导作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
研究汉黄芩素对人神经胶质瘤细胞U251增殖和凋亡的影响,用不同浓度的汉黄芩素作用于U251细胞系,通过核染色观察形态变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式分析检测细胞的凋亡情况.结果显示,药物作用后的细胞,DAPI核染色呈致密浓染,并伴有凋亡小体的出现;MTT法测得U251细胞的增殖得到明显的抑制,抑制率随浓度和作用时间的增加而上升,其中作用24 h的IC50为145.87 μmol/L; Annexin V-FITC /PI流式细胞检测证实汉黄芩素确实可以诱导U251细胞凋亡,并有剂量依赖的性质;通过比色法证明在药物处理过的细胞中,凋亡标志性酶Caspase-3被激活,且活性随着药物浓度的升高而增强.研究表明,汉黄芩素能明显抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有抗神经胶质瘤的作用.  相似文献   

10.
采用硅饥饿的培养方法,假微型海链藻(Thalassiosira pseudonana Hasle et Heimdal)得以同步生长.再通过流式细胞仪测定假微型海链藻的细胞周期,荧光显微镜观察假微型海链藻新硅质壁的形成,硅钼黄法检测假微型海链藻在细胞周期各阶段硅含量的变化,研究了假微型海链藻在细胞分裂周期中硅吸收与硅化作用的变化特征及相互间的偶联关系.结果表明:硅饥饿24h后,细胞停滞在G1/S期的边界,重新加入硅后,细胞同步生长.同步化培养后1h和3h,分别是吸收硅、合成新壳环带的主要时期,与G1/S期偶合;第5小时和第7小时,分别是吸收硅、合成新壳面的主要时期,与G2+M期偶合.  相似文献   

11.
 观察125I-NGF(神经生长因子)对U251细胞DNA的损伤作用,探讨125I-NGF的抗肿瘤作用机制。应用微核测试和单细胞电泳等方法观察U251细胞DNA的变化,Western Blotting法检测细胞蛋白水平的变化,RT-PCR法检测Cyclin B1 mRNA水平的变化,微核测试和单细胞电泳等方法观察到125I-NGF对U251细胞DNA的损伤作用。细胞周期检测及MPM-2/PI复染实验表明125I-NGF诱导了U251细胞G2期阻滞。Western Blotting检测表明,125I-NGF可能通过活化ATM和ATR途径发挥抗肿瘤作用。125I-NGF以剂量依赖性的模式减少了U251细胞Cyclin B1蛋白表达水平,但没有改变其mRNA的表达水平。在U251细胞中,磷酸化Chk1、Chk2和Cdc25c蛋白水平提高,而p53和p21水平保持不变。阐明了125I-NGF通过对U251细胞DNA的损伤作用活化ATM和ATR通路,使多种蛋白的表达水平发生了改变,从而发挥其抗肿瘤的作用。  相似文献   

12.
探讨血清饥饿法对人表皮细胞HacaT细胞周期的影响.采用无血清和低血清浓度的DMEM培养基饥饿HaCaT细胞,分别培养6h,12h,22h时,用倒置显微镜观察细胞形态,并且收集各组细胞,用流式细胞仪分析细胞周期各个时相细胞百分比.结果发现HaCaT细胞系在含0.2%FBS的DMEM培养基中培养12h,细胞仍然贴壁生长,并且可以使G0/G1期细胞百分率达到66.5%.因此,血清饥饿法可以应用于人表皮细胞HaCaT同步于G0/G1期,从而为后期药物筛选打下基础.  相似文献   

13.
用细胞同步化培养的方法,研究了塔玛亚历山大藻A.tamarense CI01株不同细胞周期细胞中毒素含量与组成的变化.结果表明,A.tamarense CI01细胞分裂主要发生在早上6时至8时,细胞密度在6 h内增加近一倍.细胞内毒素合成主要在细胞周期的G1期,由光诱导合成,毒素含量(fmol/cell,Qt)在光周期前8 h内从17 fmol/cell增加到分裂前的24 fmol/cell,而在其它细胞周期细胞内毒素含量稳定,基本不合成毒素.比较分析单细胞C1,2毒素和GTX2,3毒素合成时间及速率,推测在A.tamarense CI01中细胞首先合成GTX2,3,在其它修饰酶的作用下再转化为C1,2.  相似文献   

14.
用细胞同步化培养的方法,研究了塔玛亚历山大藻A.tamarenseCI01株不同细胞周期细胞中毒素含量与组成的变化.结果表明,A.tamarenseCI01细胞分裂主要发生在早上6时至8时,细胞密度在6 h内增加近一倍.细胞内毒素合成主要在细胞周期的G1期,由光诱导合成,毒素含量(fmol/cell,Qt)在光周期前8 h内从17 fmol/cell增加到分裂前的24 fmol/cell,而在其它细胞周期细胞内毒素含量稳定,基本不合成毒素.比较分析单细胞C1,2毒素和GTX2,3毒素合成时间及速率,推测在A.tamarenseCI01中细胞首先合成GTX2,3,在其它修饰酶的作用下再转化为C1,2.  相似文献   

15.
为了探讨新型雌激素受体ER‐α36在他莫西芬(Tamoxifen ,TAM )抑制人胶质瘤细胞增殖中的作用,以人神经胶质瘤细胞系 U 87‐M G 和 U 251为实验材料,采用MTT、实时定量PCR、蛋白质免疫印迹等方法,观察ER‐α36的表达水平以及与TAM 抗药性的关系.结果显示:(1)2种细胞中均有ER‐α36的表达,但U87‐MG细胞中ER‐α36的表达水平明显高于U251细胞(P<0.01);(2)Tam均对2种细胞增殖产生抑制作用,且呈剂量依赖性.但U87‐MG对Tam的抗药性强于U251.提示新型雌激素受体ER‐α36的表达水平可能影响神经胶质瘤对TAM 的抗性.  相似文献   

16.
新生大鼠海马神经干细胞缺血再灌注实验模型建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨建立新生大鼠海马神经干细胞体外缺血再灌注模型.方法 体外细胞培养采用无血清培养,实验分为模型组和对照组,模型组采用氧糖剥夺(OGD)法模拟在体缺血,应用MTT法检测海马神经干细胞的OD值.结果 细胞OGD处理后,不同时间点的细胞活性与正常对照组比较,最初活性升高,随后活性下降,4h、6h显著差异(P<0.05),有明显统计学意义.结论 此方法建立的细胞体外缺血再灌注模型结果可靠,能应用于实验研究.  相似文献   

17.
以腺病毒为载体介导东亚钳蝎氯离子通道神经毒素(BmK CT)感染人脑神经胶质瘤细胞株U251,研究其对细胞迁移及凋亡的影响,并探讨可能的作用机制.首先以含BmK CT基因的腺病毒Ad-BmK CT及对应的腺病毒空载体转染U251细胞筛选出最佳感染浓度,随后利用Boyden Chamber实验和划痕实验检测了BmK CT对U251细胞迁移能力的影响,MTT检测了细胞存活能力,用Annexin V-Cy5和PI双标记流式检测分析细胞凋亡情况,并通过Western-blot检测凋亡相关蛋白分析可能的凋亡机制.结果显示,U251细胞感染Ad-BmK CT 48h后,迁移能力受到明显抑制;细胞变圆漂浮,Western-blot检测发现细胞色素c开始释放,caspase-3表达上调.  相似文献   

18.
探讨新型Topo I抑制剂H13对体外培养的人结肠癌细胞HT-29细胞周期和caspase-3表达的影响.以人结肠癌细胞HT-29为研究对象,PI染色,流式细胞仪检测H13处理48 h后细胞周期的分布;Western Blot法检测H13处理48 h后caspase-3表达的变化.2.5和5 g/mL H13处理的HT-29处理48 h后,G1期细胞百分率下降,S期细胞百分率上升,并且有剂量依赖性;2.5,5,10 g/mL H13处理的HT-29处理48 h后,caspase-3蛋白表达升高.H13对诱导HT-29细胞周期阻滞于S期,其机制可能与其上调caspase-3表达有关.  相似文献   

19.
刘军  童迎凯  柳惠图  张伟  高萍 《自然科学进展》2000,10(12):1099-1103
人黑色素瘤细胞A375是P15INK4b缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15INK4bcDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15INK4b稳定表达细胞模型MLIK6.流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G1期升高11%,S期下降14%.利用TdR-N2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1%和76.8%,而G1期的比例分别为74.3%和76.4%.3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱.进一步探讨P15INK4b对G1/S相关调控基因的影响,发现G1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G1→S全部时间进程中.说明P15INK4b是通过对G1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G1/S进程.  相似文献   

20.
以大鼠肝癌细胞株HTC的细胞为研究对象 ,探讨了HTC细胞的同步化方法 ,并经流式细胞仪测定结果表明 :在HTC细胞对数生长期 ,以胸腺嘧啶核苷和秋水仙碱顺序阻断法及胸腺嘧啶核苷双阻断法可分别获得同步率为 72 .10 %的G1期和 98.94 %的S期HTC细胞  相似文献   

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