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1.
一种新的基因克隆方法SLIC的可靠性分析 总被引:2,自引:1,他引:1
Li & Elledge 最近报道了一种新的不依赖于基因序列和连接反应的高效基因克隆方法(Sequence and Ligation Independent Cloning,SLIC).这种方法以同源重组为基本原理,利用T4 DNA聚合酶在插入片段以及载体的末端产生单链突出末端,通过同源序列在体外完成交换重组,达到基因克隆的目的.本研究通过大肠杆菌蓝白菌落筛选和对重组子的酶切分析,证明SLIC是否能够使DNA片段在设计的位点处发生精确的重组,实验证实,SLIC的重组是非常可靠的. 相似文献
2.
致弱I型MDV pp38基因同源物的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
将致弱I型马立克病病毒(MDV)感染的细胞基因组DNA的EcoRI酶切产物建于pUC18质粒载体文库中,以digoxingenin标记的含有中毒GA株MDVpp38基因克隆片段作为探针,进行了原位杂交反应,初步筛选出阳性重组质粒,进一步用EcRI酶切分析筛选到含pp38基因同源物的重组pUC18质粒,序列人析表明该pp38基因同源物与pp38基因有极高的同源性,仅有1个碱基突变并导致1个氨基酸的夫 相似文献
3.
用PCR技术,从马立克氏病病毒CVI988/C株感染的鸡胚成纤维细胞基因组DNA中扩增出含起始密码子的pp38基因同源物编码序列,在Southern blotting中,pp38基因探针能识别为该PCR扩增片段。将该扩增片段克隆进pUC18质粒载体,并进行了全序列分析,进一步将该基因克隆入转移载体pBascPAK8中,得到重组转移载体质粒,经酶切分析和Southern blotting确证了插入方向和正确性,以重组转移载体与经CunⅠ酶切线性化的亲本病毒DNA通过脂质体法共转染家蚕细胞,通过白斑结合点杂交,筛选出纯化的重组病毒,用间接荧光抗体试验检查重组病毒感染的家蚕细胞,可见感染细菌的胞浆及胞膜出现强荧光反应。 相似文献
4.
含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的家蚕同源重组质粒载体的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
以含家蚕丝心蛋白重链基因同源片段的质粒pG350为出发质粒,插入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,构建成以EGFP为报告基因的同源重组质粒载体pMD-Fib-IE-EGFP,通过PCR及酶切鉴定表明EGFP以正确的方式插入到原始质粒中,通过脂质体介导法转染胃癌细胞能发出很强的绿色荧光,表明该质粒能够在真核细胞中表达,为进一步建立完善的家蚕转基因系统平台提供基因材料。 相似文献
5.
以大容量的LoristX为载体,与马铃薯总DNA部分酶切产物30~50Kb片段连接,经体外包装和效价测定,得到了6.5×105重组克隆,达到了构建马铃薯基因文库的要求.LoristX与puc9质粒可构成筛选目的基因的体内同源重组系统.利用这一系统,经筛选得到了4个目的基因克隆,经分析鉴定,4个克隆的插入片段均含目的基因或其片段.同时也表明这一同源重组系统在真核生物基因筛选方面是有效的. 相似文献
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基因敲除是 80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的一门新技术。它是指对一个结构已知但功能未知的基因 ,从分子水平上设计实验 ,将该基因去除 (knockout) ,或用其它顺序相近基因取代 ,然后从整体观察实验动物 ,推测相应基因的功能。80年代初 ,胚胎干细胞分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。 1985年 ,首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础[1] 。 1989年Thompson等通过基于ES细胞囊胚注射的基因敲除 ,建立了次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶 (hrpt)基因被定点剔除的小鼠模型[… 相似文献
7.
腺病毒同源重组子的鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
携带入IFN-γcDNA序列的E1区缺失的腺病毒载体pAdl2/RSV-IFN-bpA与pJM17质粒,通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞,经同源重组,共获得6个病毒噬斑。病毒噬斑感染293细胞,至出现完全细胞病变效应(CPE)后,抽提细胞内的病毒DNA,经XhoⅠ酶切后走凝胶电泳,出现重组腺病毒圾的3.5kb大小的DNA条带,^32P标记的探针pAdl2/RSV-IFN-bpA与XhoⅠ酶切过的病 相似文献
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应用重组克隆表达抗原的血清学鉴定技术,从广西肝细胞癌中初步筛选出9个基因克隆,与肝癌患者及其他人血清的反应证明对肝癌有特异性。DNA测序结果与基因库核对,发现其中7个有同源结构;2个为无同源结构的新分子。 相似文献
9.
本文从科学史出发介绍基因重组概念的发展,进而全面认识重组概念,解决学生对交换同一生物非同源片段是否属于基因重组的疑惑,并通过介绍重组与变异的关系来理解重组,指出交换同一生物非同源片段是重组现象是染色体变异. 相似文献
10.
克隆hCbfa1的cDNA基因,构建其重组腺病毒载体,以用于研究hCbfa1腺病毒载体在人造骨移植中的作用.将hCbfa1的cDNA目的片段插入腺病毒柯氏质粒PAxCAwt中,再将此质粒与腺病毒DNA末端蛋白复合物共转染293个细胞,通过同源重组构建hCbfa1重组腺病毒载体.重组得到的阳性克隆经酶切、测序鉴定正确,包装纯化后,检测得病毒滴度为2×109PFU/mL,从而成功地构建了hCbfa1重组腺病毒载体,为下一步应用到人造骨移植的转基因治疗打下了基础. 相似文献
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从人外周血细胞中提取mRNA,用RT-PCR法扩增含BamH与HindⅢ酶切位点VLA4基因序列,运用分子生物学方法将该序列克隆到pGEM中,构建成VLA4基因序列的真核表达载体并进行鉴定分析.对重组载体用双酶切系统酶切后进行电泳并测序,结果证明目的基因克隆及连接方向正确,测序结果正确.通过实验,成功地构建了含VLA4基因的真核表达载体pGEM-VLA4. 相似文献
12.
本文运用化学信息论方法,基于分子片拓扑图的分布求出分子信息量I_(fr),用于有机化合物的拓扑结构与性质之问题时,与其同系函数I_(fr)~(-1)之间存在着很好的线性关系。 相似文献
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建立优化的转化条件,将M u转座复合物电转化到临床分离的一株铜绿假单胞菌(P seud om onasaerug inosa)PA 68中,最高转化效率达3.66×104CFU/μg DNA.通过表型筛选,得到三株鞭毛运动能力缺陷的突变子,Sourn thern杂交证实转座子为单点插入.经基因克隆、核苷酸测序研究,证明转座子分别插入到uvrD、phzF 1、zw f三个基因中,这是首次在国际上将M u转座重组技术应用到鞭毛运动相关基因的研究中.由于人工M u转座技术具有随机单点插入的优点,克服了传统转座子能在染色体上迁移的缺点,为进一步研究P.aerug inosa的鞭毛运动机理及致病性奠定基础. 相似文献
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孙毅 《科技情报开发与经济》2005,15(10):F002-F002,67
介绍了生命科学研究的若干最新重大突破,包括基因重组改造昆虫技术、干细胞治疗技术、克隆抗盐基因技术、生物芯片技术等。 相似文献
15.
Many pathogenic bacteria express pili (fimbriae) on their cell surfaces. These structures mediate binding of bacteria to host tissues, and may also be involved in other aspects of pathogenesis. Neisseria gonorrhoeae pili are mainly composed of a single protein, pilin, whose expression is controlled at chromosomal expression loci (pilE). An intact pilin gene and promoter sequences are only found at pilE. Strain MS11 contains two expression sites (pilE1 and pilE2), whereas several of its derivatives and other clinical isolates contain only one. Silent pilin loci (pilS1-pilS7) contain truncated variant pilin genes lacking the promoter and conserved pilin gene sequences. Pilin antigenic variation in N. gonorrhoeae occurs by DNA recombination between one of he silent partial variant gene segments in pilS and an expressed pilin gene in pilE. The recombination reactions are nonreciprocal, and therefore the mechanism has been classified as gene conversion. We report that much of the recombination between pilin loci actually occurs after transformation of living piliated cells by DNA liberated from lysed cells within a population. This constitutes a new molecular mechanism for an antigenic variation system, as well as the first specific function for a DNA transformation system. 相似文献
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锌是所有生物体必需的微量元素,锌转运体(ZnT)的发现深化了对锌在细胞和分子水平的认识.ZnT家族主要参与锌的外排和锌在细胞内的区室化,以达到降低细胞内锌浓度的目的,进而为细胞内各种生理生化反应的进行提供一种保障机制.本文综述了近年来国内外关于ZnT家族成员的结构特征和基因克隆的研究现状以及在分布和功能方面的研究报道,并结合当前实际就ZnT家族成员在相关疾病方面的研究进行了分析. 相似文献
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通过射线诱变粳稻9522种子获得一株水稻雄性不育突变体OsMS121.遗传分析的结果显示突变体是单基因隐性突变.细胞学观察发现突变体花粉的萌发孔在发育过程中出现异常.萌发孔的塞子体积较小,且畸形.萌发孔的孢粉素层与野生型相比较为稀疏;环状突起不明显,结构松散,呈颗粒状.用图位克隆的方法将该基因定位在水稻第二条染色体分子标记R2M16—2和R2M18—1之间约200KB范围内.这些结果为该基因的克隆及其在花粉发育中的功能研究奠定了基础。 相似文献
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筛选差异表达基因的方法进展 总被引:2,自引:0,他引:2
植入前胚胎差异表达基因的筛选是分离、鉴定发育相关基因的关键 ,是克隆动物发育分子机理研究的基础 .哺乳动物植入前胚胎和克隆胚胎材料的获得十分不易 ,使得筛选差异表达基因的方法在该领域的应用均受到较大的限制 .以DDRT -PCR为基础的单胚mRNA差异表达技术的建立 ,为克隆植入前胚胎发育相关基因及哺乳动物克隆胚胎发育分子机理研究提供有力的工具 ,本文将在多年研究基础上对该技术及目前筛选差异表达基因的方法进行综述 . 相似文献
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植物抗病基因克隆的研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
植物抗病基因的分子生物学研究已成为一个热点,抗病基因克隆研究突飞猛进的发展展示了诱人的应用前景。分别从功能克隆、定位克隆、序列克隆和表型克隆4个方面分析讨论了植物抗病基因克隆的研究进展,指出了存在的问题及今后可能解决的策略。 相似文献