固定化乙酰胆碱脂酶的研究

以戊二醛为交联剂,将乙酰胆碱脂酶交联固定到硅胶载体上,研究了影响固定化酶的主要因素．通过酶活力的测定,确定了最佳戊二醛浓度、pH值、固定化时间、酶用量、固定化酶的最适作用温度、pH值、酶的稳定性及其回收率．结果表明：戊二醛浓度为0．5％,pH值为8．0,固定3．0h,酶与载体比例为30mg／g可制备良好的功能化载体．固定化乙酰胆碱脂酶最适作用温度和pH范围分别为40℃和6．0～9．0．重复使用10次固定化酶,回收率约为70％．     

鲍鱼碱性磷酸酶的分离纯化和性质研究

以杂色鲍(Haliotis diversicolor)内脏为原料,经Tris HCl缓冲液(pH 7.5,含0.1mol/L NaCl)抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级沉淀分离,DE 32离子交换、Sephadex G 150分子筛、DE 32纯化,得到电泳单一纯的碱性磷酸酶制剂,比活力为1 226 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明:该酶催化对硝基苯磷酸水解反应的最适 pH值为 10.08,最适温度为48℃.米氏常数Km 值为0.80 mmol/L,Vm 值为20.1 mmol/L·min-1(pH 10.0,37℃).酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 7~11区间和在温度低于55℃下稳定.金属离子对酶活力的影响结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有影响,Mg2+、Ca2+、Ba2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用,而Cu2+、Cd2+、Zn2+、Hg2+、Ag+、Bi2+和Pb2+等对酶起抑制作用.     

合成有机载体固定化猪胰脂肪酶性质研究

以丙烯酸（AA）为单体,N,N’-亚甲基双丙烯酰胺（MBAA）为交联剂,W（乙醇）=95％为致孔剂反相悬浮聚合得到白色珠状聚合物载体材料,通过N-羟基丁二酰亚胺（NHS）在二环己基碳二亚胺（DCC）作用下脱水得到含酯基活化载体,从而在温和条件下以共价法固定化猪胰脂肪酶．研究得到固定化酶的最佳条件是200r／min,40℃固定1h．比较自由酶和固定化酶的最适温度和pH值,自由酶的最适温度为35℃,固定化酶的最适温度为40℃,提高了5℃;自由酶的最适pH值为8．5,固定化酶的最适pH值为9．5,提高了1个pH单位．连续使用5次固定化酶,仍具有75．7％的相对活力,4℃冰箱中贮存2个月活力未见明显下降,具有一定的工业应用价值．     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的制备及性质

以壳聚糖为载体 ,戊二醛为交联剂制备固定化木瓜蛋白酶 .研究了固定化时间、温度、pH值、给酶量和戊二醛浓度对固定化木瓜蛋白酶活力的影响 ,结果表明 :木瓜蛋白酶最佳固定化条件是给酶量为每克载体 10mg ,戊二醛浓度0 .5 % ,pH7.5 ,室温下 (2 5℃ )反应 10h .所制备的固定化木瓜蛋白酶的最适pH8.0 ,最适温度 70℃ ,与溶液酶相比 ,固定化酶的热稳定性显著提高     

一株碱性普鲁兰酶菌株的筛选、鉴定及酶学性质研究

以普鲁兰糖为唯一碳源,利用平板涂布法从海泥中分离到一株产碱性普鲁兰酶的细菌M25,结合菌株形态特征观察和16S rDNA基因序列分析,确定该菌株为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.).该菌在30℃、200 r/min条件下培养18 h达到产酶最高峰,其合成普鲁兰酶的模式属于同步合成型.酶学性质研究表明:该普鲁兰酶的最适作用温度是50℃,在70℃下保温2 h活力残留50%以上;最适作用pH值为8.0,在pH值6.0~9.0较稳定.实验结果显示该菌所产普鲁兰酶具有较好的温度稳定性和pH稳定性.     

生物传感分析仪在共固定化酶中的应用研究

本文研究了生物传感分析仪在共固定化GOD-CAT树脂的过氧化氢(H2O2)质量浓度的测定和酶活力的表征中的应用。首先,采用过氧化氢电极法检测了反应液中过氧化氢的质量浓度,过氧化氢由不同GOD/CAT酶活比条件下制备的共固定化GOD-CAT树脂催化氧化葡萄糖生成,从而找出了最适的GOD/CAT酶活比;然后,采用葡萄糖氧化酶电极法检测了催化氧化过程中反应液中底物葡萄糖质量浓度的变化,提供了一种共固定化GOD-CAT树脂的活力表征方法,并以此为基础研究了共固定化GOD-CAT树脂的酶学性质。结果表明,共固定化GOD-CAT树脂的最适GOD/CAT活力比是1:1;共固定化酶的最适温度是45℃,最适pH值为6.0,其热稳定性、pH稳定性、操作稳定性及贮存稳定性较游离酶均有一定的提高。     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯化的番薯过氧化物酶比活力为6 930 U/mg,SDS-PAGE显示一条带,分子量为34 000,RZ值为2.酶反应的最适pH在5.5附近,最适温度为70℃;在中性偏碱性条件下酶的稳定性非常高,60℃保温1 h,酶活力残余60%.结果表明番薯过氧化物酶是一种良好的耐酸碱、耐热过氧化物酶.     

一株具木聚糖酶活链霉菌的鉴定及其木聚糖降解酶系分析

分离得到一株具木聚糖酶活性的放线菌菌株pp2,该菌株具有典型链霉菌属的形态学特征．通过对其进行形态学、生理生化特性以及16S rRNA基因序列等方面的分类学研究。菌株pp2初步鉴定为链霉菌属的一个潜在新种,通过对菌株pp2的酶系研究发现该菌株胞外发酵液具木聚糖酶活性,细胞破碎液中具α-L-阿拉伯糖苷酶活性和β-D-本糖苷酶活性．其中木聚糖酶酶活力为30．3U／mg,酶反应最适温度为65℃,最适pH为5．4;37℃下稳定性很好,60℃下酶活性衰减很快、α-L-阿拉伯糖苷酶酶活力为1．81U／mg。酶反应最适温度为55℃,最适pH为6．0,55℃下稳定性能很好．β-D-木糖苷酶酶活力为0．04U／mg．     

萝卜过氧化物酶的稳定性研究

本文研究了在不同pH、温度条件下,从萝卜中提取的过氧化物酶的稳定性.结果表明,萝卜过氧化物酶具有较好的热稳定性和较好的pH值稳定性,其作用最适pH值为4.8,最适温度为60℃.     

硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌的筛选及酶学性质的初步研究

从成都市井研县生猪屠宰厂等地采集的样品中筛选出一株高产、稳定的硫酸软骨素裂解酶ABC产生菌株GT38，初步鉴定为彭氏变形杆菌(P．penneri)，其酶活力单位高达112U／L．酶学性质经初步研究表明：该酶的最适反应pH值为7．0，最适反应温度为30℃，在pH值6～8之间较稳定，温度在30℃～45℃较稳定，金属离子对酶活力影响不大．     

纤维素酶固定化研究

利用固态发酵法从瑞氏木霉QM9414发酵液中提取纤维素粗酶液,然后将其固定在壳聚糖上,测定粗酶液的酶活力,固定化酶与粗酶的最适pH,最适温度和Km值.结果表明,粗酶液的蛋白质含量为33.33 ug/mL,酶活力为120 IU/mL.固定化酶的最适温度为60℃而粗酶液为50℃,粗酶液的最适pH=5,固定化酶的最适pH=4,固定化酶的Km值3.592 01×10-2,粗酶液的Km值为4.076 04×10-2,表明固定化酶的很多性质均优于游离酶液.     

地衣芽孢杆菌A.4041耐高温α-淀粉酶的纯化及性质

地衣芽孢杆菌A.4041（Bacillus，licheniformisA．4041）耐高温α-淀粉酶，经硫铁沉淀和垂直板制备凝胶电泳纯化，得到三种电泳均一的组分，α－Ⅰ，α－Ⅱ和α－Ⅲ．其相对质量分数分别为14.7％，32.2％和52.9％；等电点为5．2，5．4和5．5；相对分子质量为48000，55000和60000．酶作用于可溶性淀粉的米氏常数分别为4.5mg／mL，3．4mg／mL和2．6mg／mL．最适作用温度皆为90℃；最适pH为6.0～6.5；稳定pH范围皆为4～11．5在温度高于70℃，保温30min条件下，三组分的活力开始下降，但α－Ⅱ和α－Ⅲ在100℃，保温30min时仍分别保持15％和20％的残余活力，表明该酶的热稳定性良好．Ca2+，Mg2+，K+对酶明显激活；Cu2+，Fe3+，Zn2+，Al3+，EDTA、甲醛、戊二醛对酶强烈抑制．     

家蚕碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质

经10％～50％硫酸铵分级沉淀分离，DEAE—Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从家蚕（Bombyx mori）肠液中分离纯化出电泳纯的碱性磷酸酶、该酶提纯倍数为464倍，比活力为3936U／mg、酶学性质和动力学性质研究表明，该酶催化磷酸苯二钠的水解反应，最适pH值为10.5，pH小于7.5和大于11均不稳定；最适温度为40℃，温度高于50℃不稳定；米氏常数Km值为1．25mmo1／L.     

诺卡氏菌株胞外β-淀粉酶的分离和鉴定

诺卡氏菌株（Nocaridasp．）82除去菌体的发酵液经硫酸镀沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、SephadexG－200凝胶过滤，得到高纯度的β-淀粉酶。用SDS－PAGE测定酶蛋白分子量为53000，不具亚基；酶反应最适pH和温度分别为7．0和60℃，有较高的热稳定性；Fe2十和Zn2+对酶活力有促进作用，而Hg2+对酶活力有抑制作用。     

草鱼碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质研究

用Tris—HCl缓冲液抽提，硫酸铵分级沉淀，DEAE-纤维素和葡聚糖凝胶层析，从草鱼肠中提取出碱性磷酸酶（ALP）．提取倍数为6．74，比活为684U／mg蛋白．酶液经PAGE呈现单一带，该酶催化对硝基苯磷酸二钠（pNPP）水解反应的最适pH值为10．41，最适温度为27℃，Km值为1．01mmol／L，酶的热稳定性与pH稳定性研究表明：该酶在pH6．6～11．5区间和在温度低于45℃下稳定．研究金属离子对酶活力影响的结果表明：一价金属离子Li^＋、Na^＋和K^＋对酶活力没有影响；二价金属离子Mg^2＋、Mn^2＋和Co^2＋对酶有不同程度的激活作用；Zn^2＋对酶有抑制作用．     

功能基化聚丙烯酸甲酯固定青霉素G酰化酶的性质

采用肽键法将青霉素G酰化酶固定在功能化的聚丙烯酸甲酯上得固定化酶 ,其最适pH为8.2,最适反应温度为70℃ ,该固定化酶在pH6～10和40℃以下非常稳定 ,表观米氏常数为1.48×10-2mol/L,最大反应速度为5.09mmol/s.33℃下水解质量分数为5 %的青霉素G,使用63次,酶活力保留79.4 %.在4℃的湿润状态下贮藏25d,酶活力保留97.6 %.     

核酸酶P1的纯化和酶学性质研究

桔青霉发酵液通过硫酸铵分级沉淀、凝胶层析和离子交换纤维素层析等生化分离步骤，得到的核酸酶P1比活力为711U/mg，纯化倍数1500。纯化的酶蛋白纯品经SDS－聚丙烯酰胺电泳，呈现一条单带。该酶催化反应的最适pH范围为6－8，最适温度在70℃，在60℃以下时酶活较为稳定，锌离子对此酶有明显的激活作用，而铜离子具有明显的抑制作用。     

产纤维素酶海洋细菌的筛选和酶学性质的初步研究

从病烂的海洋植物中分离到一株高产纤维素酶的菌株TX-12,革兰氏阴性,经鉴定为噬纤维菌属(Cellulophaga sp.)中的一个种.该菌株在温度25℃、培养基起始pH 8.0条件下培养56 h产生碱性纤维素酶活力高达354.8 U/mL.酶学性质初步研究显示,TX-12产生的纤维素酶最适反应pH值为8.0,最适反应温度为60℃,在0～100℃酶活均能保持最高酶活的70%以上.酶液在100℃时仍具有较高的稳定性.Fe2+、Cu2+、Mn2+对酶反应有一定促进作用,Hg2+和Pb2+对酶反应有强烈的抑制作用.     

磁性载体用于酶固定化方面的研究

合成了具有磁响应性的两亲性聚乙二醇胶体粒子,并以此为载体,用吸附交联法固定化了α－淀粉酶。最适交联条件研究表明：缓冲液ｐＨ值、戊二醛浓度及加酶量都对固定化酶活力、比活有一定影响。在最适固定化条件下,固定化酶的活力为３４０００Ｕ·ｇ＾－１干胶,蛋白载量为１００ｍｇ·ｇ＾－１干胶,比活为３４０Ｕ·ｍｇ＾－１蛋白,活性回收率为３７．７％。最适反应温度比天然酶（５０℃）提高３０℃。最适ｐＨ比天然酶（７．０     

蒙脱石K-10吸附固定糖化酶研究

蒙脱石是一种优良的吸附剂,采用吸附法将其作为固定化糖化酶的载体研究固定化糖化酶的性质,结果表明:每克固定化酶的活力3 442 U;固定化酶的最适pH值是4.8,比游离酶的最适pH值增加了0.2;固定化酶反应的最适温度是60 ℃,比游离酶升高了5 ℃;固定化酶的半衰期为12 d;固定化酶的Km=14.3 g/L,为游离酶的1.47倍.