高产耐热3′-磷酸二酯酶菌种的选育及酶性质的研究

以粘红酵母(Rhodotoru la g lutin is)Q 0402为出发菌株,经紫外诱变,得到一株粘红酵母QX 0402。5 L发酵罐的发酵液中3′-磷酸二酯酶酶活力可达250 U/mL,为文献报道过的最高酶活力的2.5倍。所产生的3′-磷酸二酯酶在70°C下保温1 h,酶活力仍有50%以上。该酶最适反应pH为5.4,最适反应温度为60°C,反应3 h的反应转化率为56.37%,底物浓度可以提高到3%,生产效率为文献报道的3倍。     

5′-磷酸二酯酶强化香菇风味基料中鲜味成分

研究了5'-磷酸二酯酶强化香菇鲜味成分的工艺条件及其作用.在香菇打浆料中添加5'-磷酸二酯酶及酵母粉,研究各因素对5'-核苷酸产量的影响.结果表明,酵母粉用量、5'-磷酸二酯酶用量、酶解体系pH值、酶解温度及时间等因素对鲜味核苷酸生成有重要影响,正交试验优化的酶解工艺条件为:酵母粉用量5%,5'-磷酸二酯酶用量5%,pH值4.0,酶解温度60℃,酶解时间60min.在此条件下制备的香菇风味基料中鲜味核苷酸(5'-IMP、5'-GMP)产量达到30.01 mg/g,较未经5'-磷酸二酯酶处理基料的鲜味核苷酸产量提高了3倍.     

两种3'''',5''''-环核苷酸磷酸二酯酶的制备及活性测定

3',5'-环核苷酸磷酸二酯酶[EC.1.4.17](简称PDE),在生物体内有重要的生化功能.它可水解环核苷酸为5'-核苷酸,并与核苷酸环化酶共同维持细胞内环核苷酸水平.根据性质的不同PDE分为多种形式,但总的可分为两大类:依赖于Ca2 的PDE,可被钙调蛋白激活;不依赖于Ca2 的PDE,不被钙调蛋白激活.开展对环核苷酸、钙调蛋白及药物杀虫机理的研究都需要分离制备这两类不同形式的PDE.本实验以新鲜的猪心为材料制备分离出这两种PDE,并进行了活性分析.     

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的制备及性质

从麦芽根中提取5′－磷酸二酯酶，酶活可达474U／mL。将所得酶液用于水解酵母核糖核酸，得到5′－CMP、UMP、GMP、AMP4种单核苷酸。最佳反应条件为：底物RNA浓度为0.01g/mL，每毫升底物的酶用量为30U，酶解温度70℃，pH7.0，时间2h,5′－核苷酸转化率达80％。     

高产胞外植酸酶酵母菌的选育

从酒糟样品中筛选得到 5株胞外植酸酶活性较高的野生型酵母菌 ,其中 1 1酵母的酶活性最高 ,胞外植酸酶活为 16 .6 8U /mL .1 1菌株经单倍体分离 ,得到单倍体Sp1 1,胞外植酸梅活为 11.2 0U/mL .以Sp1 1为出发菌株 ,经过原生质体紫外诱变和EMS诱变 ,选育得到一稳定突变体Msp 382 6 ,胞外植酸酶活性为 2 6 .6 5U /mL ,较出发菌株提高了 138%.     

离子诱变选育纤溶酶高产菌及其发酵条件的研究

在诱变育种研究中 ,寻找突变频率高 ,突变频谱广的突变源是一项重要而实效的工作 .离子注入法作为一种新的生物突变技术是近年发展起来的 ,已经引起国内外学者的广泛关注[1,2 ] .离子注入和其他常规诱变有着明显的差异 .离子注入的同时存在能量传递 ,动量传递 ,离子沉积以及电荷积累过程 .而其他的辐射诱变仅仅是利用能量传递 ;化学诱变则从分子基团的交换考虑 .因此离子注入不仅兼有辐射诱变和化学诱变的特点和功能 ,而且可以通过调整离子种类 ,能量及电荷达到有目的进行诱变的效果 .1986年 ,中国科学院等离子体物理研究所余增亮等人发现离…     

强聚硒能力菌种的选育

采用紫外照射法对一株啤酒酵母进行诱变处理,结果表明:在紫外灯功率为15W,照射距离为10 cm,诱变时间为60 s的条件下,致死率可达到83.33%.通过多次初筛和复筛得到5株酵母菌,其中菌株L3经测定其生物量达到6.23 g/L,硒的质量分数达到656.43μg/g,分别是诱变前的1.37倍和1.42倍,确定其适于生产所需的强聚硒能力菌株.     

红酵母苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及性质研究

采用玻珠破壁 ,硫酸铵分级沉淀 ,凝胶过滤和离子交换等方法 ,从L 苯丙氨酸工业生产菌株红酵母中分离纯化苯丙氨酸解氨酶 (PAL) ,纯化倍数为 1 39,收率为 1 2 6%,纯化到的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳均为单一蛋白带 ,其亚基分子量约为79.4kD该酶最适反应温度为 40℃ ,最适反应pH为 8.5 ,以L Phe为底物 ,40℃ ,pH 8.5的Km值为 3 87× 1 0 - 4 mol/L 除了Mg2 +和Na+,其它金属离子如Fe3+,Cu2 +,Co2 +,Hg2 +等对其都有明显的抑制作用 .     

钙调素依赖性的环核苷酸磷酸二酯酶的制备

通过两次离子交换柱层析, 从牛脑中制备钙调素依赖性的环核苷酸磷酸二酯酶． 所得酶不含内源性钙调素, 能被足量外加的钙调素激活 １４ 倍, 可用于测定细胞中的钙调素含量     

腈化物同化菌的筛选及其培养条件的研究

应用富集培养技术和定向筛选技术，从腈化物长期污染的土壤中，以生物量为指标，筛选到６株能在以丙腈为唯一氮源的培养基中生长的细菌，通过对照实验确定为腈化物同化菌，并研究了生长最好的Ｅ菌株的最适培养条件     

产蛋白酶和淀粉酶菌株的筛选及其发酵产酶特性研究

利用酪蛋白固体平板分离培养基、淀粉平板分离固体培养基初筛,液体发酵产酶培养基摇瓶复筛相结合,从实验室保藏的真菌茵株中筛选出一株产蛋白酶的真茵菌株和一株产淀粉酶的真茵茵株,对其固态发酵特性进行了研究．结果表明：蛋白酶产酶高峰为24h,酶活力达到3760tJ／g;淀粉酶产酶高峰为32h,酶活力达到0．405u／g．     

耐受废旧电池微生物的筛选及吸附性能的研究

试验采用浓度梯度筛选的方法,从被废旧锌锰电池污染的土壤中,分离筛选到一株能够耐受和吸附废旧锌锰电池浸出液的革兰氏阴性细菌X.用单因素的方法得到X最适的培养条件为:pH=5.50;NaCl浓度为0.4%;并且可以适应较高的环境温度.以Mn2+作为检测指标,用原子吸收分光光度法测得,X的湿菌体对Mn2+的吸附率为:74.79%;经传代培养后菌体对Mn2+吸附率的检测,证明其遗传性状较为稳定.可进一步开发为废旧锌锰电池污染治理中的重金属吸附剂.     

高温α-淀粉酶产生菌株的选育

从西藏当雄温泉附近的土壤中，分离到一株能在55℃生长并分泌高温α－淀粉酶的菌株，经初步鉴定为凝结芽孢杆菌，命名为Bacillus coagulans LS-1。该菌株用紫外线和亚硝基胍诱变，在55℃摇瓶培养条件下，筛选到一个发酵液酶活达到100U／mL的突变株，较出发菌株的酶活提高了约25倍，发酵液经90℃处理60min，酶活性保持在90％以上。     

磺胺胍抗性筛选法选育L-色氨酸高产菌株及其发酵条件的优化

以谷氨酸棒杆菌FC22(Phe-+Tyr-+5MTr)为出发菌株,经过紫外线诱变,定向选育出具有磺胺胍抗性目的突变株FC523(Phe-+Tyr-+5MTr+SGr).通过正交实验对FC523的发酵培养基进行优化,并通过单因素实验对温度、pH和转速等发酵条件进行研究.在最佳条件下,该菌株摇瓶积累L-色氨酸最高可达8.6 g/L.     

珊瑚来源群体淬灭活性产生菌的筛选与抑菌活性研究

珊瑚病原菌的群体感应（Quorum Sensing,QS）是介导珊瑚疾病发生的重要因素,抑制病原菌的群体感应可以有效抵抗病原菌的侵染作用。为解决耐药性难题并维持珊瑚礁生态系统健康,本研究以紫色杆菌（Chromobacterium violaceum）为指示菌,从三亚市鹿回头半岛三亚湾（109°28''E,18°13''N）采集的珊瑚样品中,分离筛选具有较高群体淬灭酶活性的珊瑚共附生细菌,经16S rDNA测序初步鉴定其大部分为弧菌属。进一步研究群体淬灭活性菌株对两株珊瑚致病菌溶珊瑚弧菌V545（Vibrio coralliilyticus）和溶藻弧菌Z-14（V.alginolyticus）的生长、运动及生物被膜生成的影响。结果显示,5株群体淬灭活性菌株明显抑制溶珊瑚弧菌V545及溶藻弧菌Z-14的生长,8个菌株对溶藻弧菌Z-14的运动有明显抑制作用;9个菌株可显著抑制溶珊瑚弧菌V545生物被膜形成,13个菌株可显著抑制溶藻弧菌Z-14的生物被膜形成,其中11个菌株对溶藻弧菌Z-14生物被膜生长抑制率均超过85%;部分群体淬灭活性菌株对溶珊瑚弧菌V545和溶藻弧菌Z-14的生长、运动及生物被膜形成均有显著抑制作用。本研究筛选获得具有群体淬灭活性的细菌,并揭示其群体淬灭活性对珊瑚致病菌生长、运动、生物膜生成的影响,为解决珊瑚微生物抗病机制提供理论依据与原创材料。     

植酸酶分泌菌株的筛选研究

利用涂平板法从土样中筛选出了3株能分泌植酸酶和淀粉酶的芽孢杆菌（Bacillus）菌株，此菌株接种在植酸酶检测培养基上，37℃恒温下培养86h时，植酸水解圈最大；接种在淀粉酶检测培养基上，37℃恒温下培养24h后，淀粉水解圈最大．     

萘降解菌的筛选及其降解特性研究

环境中的多环芳烃对生物体具有极强的诱变性和致癌性,且较难被生物降解.以萘为研究对象,从某炼油厂石油废水处理工艺的污泥中筛选到1株对萘具有较好降解效果的菌株N5,观察该菌株生化特征并对其降解条件进行优化.结果表明:在30 ℃,自然pH,氮源(NH4)2SO4质量浓度为0.3 g/L,接种量为0.5%的最适条件下,菌株对初始质量浓度为50 mg/L的萘在120 h内的降解率高达99.9%,该菌对高质量浓度萘有较好的耐受性.     

高效催化3-氰基吡啶腈水解酶新菌株的筛选

通过富集培养技术,从土壤中筛选出1株具有较高3-氰基吡啶催化活力的产腈水解酶新微生物。实验主要通过让微生物在以甘油为碳源、腈类化合物为氮源的培养基中生长,达到筛选的目的。当以乙腈为氮源时,从土壤中筛选出具有芳基乙腈水解酶活力的菌株8株,其中2株表现出了对3-氰基吡啶的催化活力;当以3-氰基吡啶为氮源时,从土壤中筛选出具有芳香腈水解酶活力的菌株2株,它们对3-氰基吡啶具有较专一催化活力,其中活力最高的菌株被鉴定属于红细菌属(Rhodobacter),本文首次报道该种属菌株中具有腈水解酶。     

高温大曲中筛选产纤维素酶的耐高温芽孢杆菌

从高温大曲中筛选出产纤维素酶的芽孢杆菌1株,进行形态特征、生化鉴定和16S rDNA序列分子鉴定,该菌株鉴定为Bacillus cereusFrankland.对该菌株进行产酶摇瓶液体发酵,测定其内切纤维素酶活力和外切纤维素酶活力分别为260.32,87.22u.mL-1,对该菌株进行产酶固态发酵,测定其内切纤维素酶活力和外切纤维素酶活力分别为556.64,121.47u.mL-1.酶的稳定性实验显示该菌株产纤维素酶在60℃以下和在pH4～8范围内具有良好的热稳定性和pH稳定性,利用响应面法优化固态发酵产酶培养基,优化后测定纤维素酶活提高至1 643.27u.mL-1.