基于流式细胞技术的两种槭属植物基因组大小测定

【目的】槭属植物具有重要的园林观赏价值和药用价值,开发应用前景广阔,但该属植物分子生物学及基因组学研究还相对匮乏,此次研究利用流式细胞仪技术对该属中鸡爪槭和元宝枫基因组大小进行测定,为后期槭属植物的细胞遗传学和基因组学研究奠定基础。【方法】以鸡爪槭(Acer palmatum)和元宝枫(A. truncatum)的嫩叶为材料,首次采用LB01解离液和碘化丙啶(PI)荧光染料,利用基因组大小已知的玉米(Zea mays L.)CE-777作为内标,建立适合于该两种材料的流式细胞术基因组大小测定方法。【结果】LB01解离液对测定样品与内标解离效果均较好,粒子清晰集中,无重叠峰且区分度良好,最后测得鸡爪槭的基因组1C含量为0.840 4 pg,元宝枫的基因组1C含量为0.756 0 pg。【结论】基于流式细胞仪技术,选取合适的样品处理方法,可成功测定鸡爪槭和元宝枫的基因组大小。该结果和方法可丰富槭属植物的基因库,为揭示该属植物的物种起源和进化提供重要依据,也为其后期的基因组测序工作奠定了重要基础。     

山樱花基因组大小的测定

为了测定山樱花基因组的大小,获得适合山樱花裂解的流式细胞术的最适裂解液,优化了樱属植物流式细胞术流程。结果显示,在所对比的6种裂解液中,LB01最适合樱属植物细胞裂解。以大豆(Glycine max(L.)Merrill)为内标,比较待测样品和内参峰值,计算得出山樱花基因组大小为366.67 Mb,C值为0.375 pg。可用于樱属植物的倍性鉴定。     

桂花及其近缘种倍性和基因组大小分析

[目的]解决桂花(Osmanthus fragrans)及其近缘种[柊树(O.heterophyllus)、齿叶木犀(O.×fortunei)和华东木犀(O.cooperi)]在分类处理上存在的较多争议,为桂花及其近缘种的分类研究提供新的依据.[方法]以水稻品种'日本晴'(Oryza sativa'Nipponbare...     

栎属植物流式细胞术实验体系的建立与优化

为建立适于栎属植物的流式细胞核实验体系,分别利用Tris-MgCl2、Galbraith’s、Marie’s和Otto’s细胞核分离缓冲液对麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎制备细胞核悬浮液。检验发现:Tris-MgCl2、Galbraith’s缓冲液所制备样品未能检测出DNA峰,Otto’s缓冲液制备的样品中,除白栎外其他3个样品的测试结果均较差,Marie’s缓冲液所制备的4个样品测试DNA峰的变异系数(CV)均大于10%。采用正交设计方法对经典Marie’s缓冲液中的β-巯基乙醇和Tween 20组分进行了优化,发现麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎的最适β-巯基乙醇浓度和Tween 20体积比分别为45 mmol/L和2.5%、15 mmol/L和2.0%、60 mmol/L和1.0%及30 mmol/L和1.0%。运用改进后的最适Marie’s缓冲液进行流式细胞核测定,4种样品的变异系数均显著下降(在3.52%~4.81%之间),表明改进后的Marie’s缓冲液对4种栎属植物的测试结果准确可信。     

花楸属直脉组7种/变种基因组大小及叶表皮微形态特征的分类学意义

【目的】通过对花楸属直脉组(Sorbus Sect.Alnifoliae)5种及具有分类争议的2变种的基因组大小和叶表皮微形态研究,探讨其分类学意义以及基因组大小和细胞大小之间的相关性。【方法】基于流式细胞术、光学和电子显微镜分别对研究对象的基因组大小、叶表皮细胞和气孔的质量和数量性状进行测定、分析。【结果】基因组大小测定显示所有分类群均为极小基因组,大小介于神农架花楸(S.yuana)的1.348 pg至长果花楸(S.zahlbruckneri)的1.586 pg之间;虽均为二倍体,但分类群间基因组大小差异显著。光学显微镜下叶表皮细胞形状兼有多边形和无规则形,或者仅无规则形,垂周壁式样有平直状、弧状和波状;扫描电镜下表皮纹饰有近光滑、局部加厚、脊状、网纹、褶皱等类型,蜡质纹饰有壳状、颗粒状、线状、片状等;4个分类群的下表皮具带状单毛。气孔器均为无规则型,分布于下表皮脉间区;保卫细胞具明显的环形外缘或无。表皮细胞面积、气孔宽度及面积、气孔密度、气孔指数等指标在分类群间差异显著,基因组大小同表皮细胞面积、气孔长宽及面积呈正相关,同气孔密度和气孔指数呈负相关。【结论】基因组大小、叶表皮微形...     

基于叶绿体基因组比较栝楼属植物的演化

叶绿体基因组在基因水平上高度保守,并且遵循单亲遗传及单倍体遗传,已被广泛应用于物种鉴定和系统发育分析。栝楼属为葫芦科的一个重要属,具有极其重要的药用价值及经济价值,但种内关系不清。本文利用生物信息学及比较基因组学的方法,分析了11种栝楼的叶绿体基因组大小、结构、组成、重复序列、密码子偏性、边界扩张、正向选择、基因组共线性、核苷酸变异位点及系统发育等。结果显示,11种栝楼的叶绿体基因组都具有典型的四联体结构,长度为156 413 bp～157 556 bp,GCs含量为37%,较为保守。重复序列在LSC区域分布较多,密码子偏好性不强,没有明显的边界扩张或收缩,但是某些栝楼属植物叶绿体基因组存在序列重排,其中三种栝楼还受到环境的正向选择。同时,序列重排将11种栝楼分为两个主要分支,其中第一分支的演化与环境的正向选择密切相关。栝楼属物种核酸多态性位点多分布在SSC区域,系统发育分析表明栝楼属与油渣果属、丝瓜属及藏瓜属亲缘关系较近。本研究为栝楼属物种的分类及演化提供了分类依据,同时为编制栝楼属物种DNA条码提供了候选标记。     

稻蝗属基因组DNA提取方法

运用一种改进的方法对稻蝗属新鲜标本、酒精浸泡标本及干标本进行基因组 Ｄ Ｎ Ａ 提取．样品经检测,谱带基本呈线形,无拖尾, Ｏ Ｄ（２６０／２８０ ｎｍ ）值６６７％ 在１６～１８ 之间．     

苦参属6种植物的核型分析

本文通过常规压片法,分析了苦参属（Sophora） 6种植物的染色体数目和核型。结果表明：白刺花（S.davidii）核型公式为2n=2x=18=14m+4sm,属2A型;苦豆子（S.alopecuroides）核型公式为2n=4x=36=28m+8sm,属2B型;苦参（S.flavescens）核型公式为2n=2x=18=14m+4sm,属2B型;柳叶槐（S. dunnii）核型公式为2n=2x=18=18m,属1B型;短绒槐（S.velutina）核型公式为2n=2x=18=16m+2sm,属1B型;砂生槐（S.moorcroftiana）核型公式为2n=2x=18=16m+2sm,属1B型。在本研究的6种苦参属植物中,苦豆子的染色体数目和核型类型与前人报道一致,而白刺花和苦参、砂生槐的染色体数目一致但核型类型不同,其余2种植物的染色体数目和核型类型为首次报道。     

葡萄属植物的基因组DNA提取及RAPD体系优化

采用ＣＴＡＢ改良法提取葡萄属７种植物的基因组ＤＮＡ,对其完整性进行了测定,并以此为模板进行ＲＡＰＤ反应,对ＲＡＰＤ反应体系的５个主要影响因子进行系统的初选与复选,获得了葡萄属植物的ＲＡＰＤ最优反应体系及扩增程序。     

用流式细胞仪和RAPD快速鉴定柑橘体细胞杂种

利用流式细胞仪和随机扩增多态DNA（RAPD）方法对获得的3例柑橘体细胞杂种进行鉴定,结果表明,两者相结合可快速有效地鉴定体细胞杂种．所检测的3个组合共9株再生植株,有8株是四倍体体细胞杂种,1株为二倍体叶肉亲本型杂种．体细胞杂种一般表现为具有双亲的特征带,且综合双亲的所有带,但在部分杂种中检测到了双亲都没有的新带,也发现有丢失亲本的特征带或共有带的现象,说明融合后染色体发生了重组和交换;有的引物只检测到叶肉亲本的特征带,根据柑橘叶肉细胞无论单独培养还是共培养均不能再生的事实,可推测其为体细胞杂种或二倍体叶肉亲本型胞质杂种．对这两种方法相结合用于体细胞杂种鉴定的可行性进行了讨论．     

槭树属常见树种翅果性状多样性与风传播特征分析

【目的】研究15种槭树属树种翅果性状,探究果实性状和风传播特征之间的相关性,为深入研究槭树属植物果实的风传播机制和种群扩张提供理论参考。【方法】以15种槭树属树种翅果为材料,在分析种子长度、种子宽度、果翅长度、果翅宽度、种子长宽比和种子长/果翅长特征等参数的基础上,模拟果实的传播特征(沉降速度和水平传播距离),比较15种果实性状和风传播特性间的相关性。【结果】①15种槭树属树种翅果开张角度对沉降速度和水平传播距离的影响最大,种子宽度影响较弱;②15种槭树属树种翅果沉降速度为69.14~224.06 cm/s,扇叶槭最慢,梣叶槭最快;扇叶槭果实的水平传播距离最远,梣叶槭最近;③15种槭树属植物果实沉降速度与种子长度、果翅长度、果翅宽度、种子长宽比和种子长/果翅长正相关,与果实两翅开张角度和种子宽度负相关;水平传播距离与果实两翅开张角度、种子长、果翅长、果翅宽、种子长宽比和种子长/果翅长均呈负相关,而与种子宽度正相关,果实水平传播距离与其沉降速度呈负相关,果实沉降速度和水平传播距离受多种性状影响;④对15种槭树翅果的8个性状主成分分析表明,前3个主成分的累计贡献率达82.911%, 基于8个性状进行聚类分析可知,当欧氏距离为10时,15种槭树可分为4类。【结论】果实形态特征的相关性分析表明,15种槭树果实形态特征对沉降速度的影响依次为:两翅张开角度>种子长/果翅长>种子长度>果翅长度>种子长宽比>果翅宽度>种子宽度。果实的水平传播距离受多种因子的综合制约。千粒质量、两翅张开角度、种子长/果翅长可作为槭树分类的重要依据。     

Selection of anticoagulant solution to the hemolymph of Chlamys farreri by transmission electron microscropy and flow cytometry

Mixtures of hemolymph from Chlamys farreri with three different anticoagulant solutions were incu-bated for an hour in vitro, then the ultrastructural alterations of hemocytes were observed, and the aggre-gation rate was analyzed by using transmission electron microscropy and flow cytometry respectively. The results showed that Formula 3 （glucose 20.8 g L^-1; EDTA 20mM; sodium chloride 20 g L^-1; Tris-HCI 0.05M;pH 7.4）was the desirable anticoagulant solution for C. farreri hemocytes. Further phagocytosis assay showed that no obvious negative effect was given to the hemocyte phagocytic activity when using Formula 3 as the anticoagulant solution.     

濒危植物五小叶槭(Acer pentaphyllum Diels)天然种群遗传多样性的ISSR标记分析

五小叶槭(Acer pentaphyllum Diels)是中国四川特有野生珍稀濒危植物,仅分布于雅砻江中上游干旱河谷地带;探索其遗传多样性特征可以为其遗传资源的保护和利用提供理论依据.本文采用ISSR技术对五小叶槭的5个野生种群的44份材料进行遗传多样性分析,8条引物总共检测到38个位点,其中多态性位点35个,多态位点百分率(PPL)平均为90.21%.应用分析软件Popgen32分析得出:在物种水平上,五小叶槭的香农多样性指数(I)为0.3924,Nei氏基因多样性指数(H_e)为0.2498;种群间基因分化系数(G_(st))为0.3722,种群间的基因流(N_m)为0.8433,这表明五小叶槭的遗传变异主要存在于种群内.在种群水平上,香农多样性指数(I)为0.2125, Nei氏基因多样性指数(H_e)为0.1456.结果表明木里、九龙三垭宫和康定这3个种群的遗传多样性水平较高,而雅江和九龙洛莫种群遗传多样性较低.通过Mantel检测,种群间遗传距离和地理距离之间没有显著相关性.     

流式细胞术在液体基质食品检测中的应用研究进展

流式细胞术(FCM)是一种新兴的快速检测技术,具有检测快速、简便、灵敏的优势,现已广泛用于食品检测中。因流式检测原理要求,流式细胞术多用于液体食品检测中。该文综述了流式细胞术在液体基质食品如乳制品、酒类、饮料类中的应用。     

分隔板结构对挤出流动影响的数值分析

采用有限元数值分析方法,分析了分隔板结构对挤出流动平衡性的影响,指出其调节流动均匀性的效果是非常明显的,对于型材截面上相邻区域壁厚相差悬殊的情况,采用分隔板结构是减小横向流动、提高挤出流动均匀性的最有效措施之一.针对分隔板有限元建模困难问题,提出了用边界约束条件替代模具结构几何特征的方法,其分析结果和采用真实分隔板结构时的分析结果基本一致,说明所采用的处理方法是合理的、有效的,能够大大降低有限元建模的困难性,提高分析效率和速度.     

流动注射分析系统中操作参数对流出曲线的影响

将固定化鸡肝酯酶酶柱应用于流动注射分析系统中,以峰值时间和峰高为指标,考察了底物浓度、缓冲液流量和酶柱长度对流出曲线的影响．结果发现,当底物进样量体积一定时,底物浓度对峰值时间无显著影响,而对峰高的影响近似符合酶催化反应中的米氏方程;在现有酶活力水平条件下,底物浓度应选择为160mmol／L;缓冲液流量在0．38～0．75mL／min范围内,峰值时间与流量呈反比,即每提高1mL／min,峰值时间约缩短13．3min,而流量对峰高的影响呈不对称的下凹曲线关系;峰值时间和峰高分别随酶柱长度的延长而延迟或升高．