滇重楼皂苷提取及含量测定

采用小型浓缩提取设备提取重楼并制备重楼浸膏粉,用高效液相色谱法测定重楼皂苷的含量：色谱柱Lichrospher100RP-18e（5um,4．6mm×250mm）,以乙腈-水为流动相,流速1．0mL／min,检测波长203nm,柱温25℃．在此条件下测定重楼浸膏中皂苷含量为Ⅶ：90．86mg／g,PA：89．93mg／g,H：198．02mg／g,Ⅵ：302．57mg／g,Ⅰ：27．22mg／g,Ⅱ：137．18mg／g．此法制备重楼浸膏简单方便,能够简易快捷测定重楼浸膏中重楼皂苷的含量．     

滇重楼根可培养内生细菌多样性分析及促生菌筛选

为了探究滇重楼根的内生细菌的多样性以及筛选促生菌株,从云南丽江采集5年生滇重楼,并从0.1 g根中分离获得228株内生细菌. 16S rDNA序列分析结果表明,这些内生细菌归属到4个门,5个纲,7个目,11个科,13个属,其中假单胞菌属(40.35%)和芽孢杆菌属(22.37%)为优势属.之后,通过与小麦幼苗的共培养,筛选获得10株具有促进生长作用的菌株. YNR32016菌株对小麦幼苗的株高的促进作用最强,与对照相比增长了72.43%;YNR32041菌株对小麦幼苗的根长的促进作用最强,与对照相比增长了602.51%; YNR32046菌株对小麦幼苗的茎粗的促进作用最强,与对照相比增长了26.87%.结果为深入分析滇重楼不同组织内生菌的多样性以及开发促生菌资源奠定了基础.     

豆壳过氧化物酶活力测定条件的优化

应用响应面法从过氧化氢、愈创木酚、温度、pH值、酶浓度等方面对过氧化物酶活力测定方法进行单因素分析,以优化豆壳过氧化物酶活力测定条件.结果表明,豆壳过氧化物酶在70 ℃、pH值为6.0,愈创木酚和过氧化氢加入量分别为25 μL和21 μL条件下测定的活力为最优值.     

大茴香有效成分提取条件优化研究

采取水蒸气蒸馏法和索氏提取法,分别对大茴香提取从时间、破碎度、料剂比和乙醇浓度等方面进行条件优化,以精油的得率为指标,选用正交表L9(34)设计三因素三水平九个实验.结果表明:索氏提取法优于水蒸气蒸馏法,且在索氏提取法中,将大茴香干果粉碎过20目筛,加10倍量95%乙醇,回流提取3h,得油率最高,可达0.185%。     

细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞(CIK)培养条件优化的研究

肿瘤生物治疗目前是继手术、药物、放化疗治疗之后的第四种肿瘤治疗主要手段,目前,临床上应用最广泛的是细胞因子诱导的肿瘤杀伤细胞(CIK).由于CIK培养方式多样,因子选择及配比不同,医疗机构各有不同,造成CIK细胞数量、有效细胞数量、杀伤率有较大的差异.本研究通过对无血清培养基中添加的单克隆抗体CD3,注射用重组人白介素-2(IL-2),采血者自体血浆进行正交实验,得知在无血清培养基中加入CD3 100ng/mL,I-2 700IU/mL,自体血浆2％时,培养效果最好,双阳性有效细胞比率可达97.88％,以效靶比10:1接种,MTT法检测,效应细胞CIK对Hela细胞杀伤率为32.80％.初步观察此种培养条件下的CIK细胞在临床治疗上有一定的疗效.     

正交试验优化HPLC测定齐墩果酸与熊果酸的色谱条件

为建立简单、快速的分离测定齐墩果酸与熊果酸的HPLC方法,实验采用L16(44)的正交试验设计表,对HPLC分离测定齐墩果酸与熊果酸的主要影响因素(甲醇与水相的体积比、水相中乙酸和三乙胺的体积分数以及流动相流速)进行了优化.结果表明,以体积比为90∶10的甲醇与含有0.5%乙酸及0.01%三乙胺的水相混合溶液为流动相,流速为0.8 mL/min,齐墩果酸和熊果酸可以在16 min内得到有效分离,其工作曲线的线性范围对于齐墩果酸为2.5～340.0μg/mL,对于熊果酸为5.0～340.0μg/mL.将方法应用于女贞子和山楂中齐墩果酸和熊果酸含量的测定,相对标准偏差均小于2.0%,加样回收率均在95%～105%之间.     

中心组合实验设计响应面法优化α淀粉酶抑制剂筛选条件

采用中心组合设计(CCD)响应面法(RSM)优化α淀粉酶抑制剂筛选条件.在单因素试验基础上,对影响α淀粉酶抑制剂活性的4个因素即淀粉溶液浓度、保温温度、DNS用量、沸水时间进行优化,根据回归方程最终确定α淀粉酶溶液质量浓度1mg/mL,淀粉溶液质量浓度17 mg/mL,保温温度46℃,保温时间15 min,DNS用量2mL,沸水时间6min.经试验验证结果稳定可靠,可用于α淀粉酶抑制剂筛选.     

正交设计法优化纳米Fe_3O_4的合成工艺条件

采用液相共沉淀法制备纳米级Fe3O4颗粒,并利用芷交设计法对制备纳米级Fe3O4颗粒的影响因素如Fe3 /Fe2 的物质的量比、制备Fe3O4的晶化温度和晶化时间等进行实验设计,利用Zetasizer粒径分布仪对所制备纳米粉的颗粒大小进行表征,据此找出最佳实验条件为Fe3O4的晶化温度为90℃,Fe3 /Fe2 的物质的量比为1:2和制备Fe3O4的晶化时间为30min,此时制得的纳米粉体平均粒径可达15nm;并利用XRD、HRTEM对所制备纳米粉进行结构表征.     

四种华重楼内生细菌的初步研究

从华重楼（Paris polyphylla var Chinensis）的新鲜块茎中分离得到107株内生菌．对这107株菌进行了液体培养,经初步检测鉴定,有6株菌产生薯蓣皂甙或其类似物等甾体皂甙,对其中4株菌的形态学和理化特征进行了研究,确定这4株菌分别属于德克斯氏菌属（Derxia sp）、芽孢杆菌属（Bacillus sp）、动性球菌属（Planococcus sp）、肠杆菌属（Enterobacter sp）.     

滇重楼切块繁殖不定芽发生的组织学研究

 对滇重楼切块繁殖过程中不定芽发生及其组织细胞学特征进行了研究.结果表明,不定芽仅在根状茎的节上发生,切块上的不定芽,起源于薄壁组织细胞脱分化,为直接发生,不经过愈伤组织阶段.从淀粉粒的分布等情况推测,顶芽具有顶端优势,这正是自然状态下1个根茎只能产生1个芽的原因.滇重楼切块繁殖的机理是顶端优势的打破.     

表观遗传试剂诱导滇重楼内生真菌 Hypomyces sp.CLG4次生代谢产物的研究

采用高效液相色谱(HPLC)分析添加HDACI,500μM恩提诺特的H.sp.CLG4.培养萃取物与对照的差异,硅胶柱层析、反相柱层析、半制备高效液相等色谱方法对添加表观遗传试剂的Hypomyces sp.CLG4.次级代谢产物进行分离纯化,并利用现代波谱分析方法对化合物进行结构鉴定.研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(his...     

一株有抗菌活性的云南重楼植物内生真菌的鉴定

首次从云南重楼植物中分离得到的1株内生真菌(编号c 196),发现它对多种病原菌有抗菌活性.通过进一步对其培养特征,显微形态特征,电镜扫描特征的观察以及ITS序列测定和系统发育树构建与分析,发现该菌与巴西青霉(P.brasilianum)的赫昆青霉(P.paraherquei)的亲缘关系最为接近,相似性为99.6%,但形态特征存在差别,c 196菌株的分生孢子小梗有1~3个分支,而巴西青霉和赫昆青霉[1,2]的分生孢子小梗都是4~7个分支.因此我们建议将其定为P.paraherquei的1个变种———赫昆青霉云南变种(Penicillium para-herqueivar.yunnanensisn.var Sun et Chen).     

滇重楼光合作用与环境因子的关系

 利用LI-6400光合测定仪和人工气候箱研究了滇重楼叶片的光合补偿点、光合饱和点、羧化效率和CO₂补偿点,并进行温度、相对湿度对光合速率的单因子影响研究.滇重楼叶片的光合补偿点为5.7μmol/(m²·s),光合有效辐射增至2000μmol/(m·s)²仍未测到光合饱和点,最适光合有效辐射为750～2000μmol/(m·s)².叶片的羧化效率为0.0295,CO₂补偿点为65μmol/mol,光合速率随CO₂浓度升高而明显增加,高于大气正常值的CO₂浓度对增加滇重楼光合作用的光能利用率是有利的.光合速率在温度11～20℃范围内,随温度升高上升;20～35℃随温度升高下降,最适温度为16～28℃.相对湿度20%～85%的试验范围内,叶片光合速率随湿度增加而增大,最适相对湿度条件在75%以上.     

HPLC法测定重楼块根中4种重楼皂苷含量研究

建立HPLC测定重楼块根中4种重楼皂苷含量的方法。结果表明:重楼皂苷Ⅰ质量浓度在0.054~0.540 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.999 6 (n=5),回收率为99.12%,RSD为1.95%;重楼皂苷Ⅱ质量浓度在0.043 4~0.434 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.990 8 (n=5),回收率为99.10%,RSD为1.89%;重楼皂苷Ⅵ质量浓度在0.012 6~0.126 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.993 3 (n=5),回收率为99.46%,RSD为2.01%;重楼皂苷Ⅶ质量浓度在0.010 3~0.103 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.999 1 (n=5),回收率为96.52%,RSD为2.25%。HPLC法能够准确检测出重楼块根的主要皂苷成分及其含量,且操作简便,可为重楼中4种主要皂苷含量的检测提供科学方法。     

柳叶红茎黄芩不同部位中4种黄酮类活性成分质量浓度的RT-HPLC法测定

采用RT-HPLC法,以KINETEX-C18为色谱柱(4.6 mm× 100 mm,2.6 μm)、水-四氢呋喃-磷酸(体积比为80∶10∶0.2)和乙腈为流动相,流速0.7 mL/min,柱温30℃,检测波长275 nm,建立了柳叶红茎黄芩的根、茎、叶中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素质量浓度的RP-HPLC测定...     

爱玉ISSR反应体系的建立与优化

通过单因子试验和正交设计,对影响爱玉ISSR-PCR扩增效果的因素,如模板DNA用量、Taq酶用量、dNTPs浓度、引物浓度、延伸时间和循环次数等指标进行优化.实验确立了可用于爱玉ISSR-PCR分析最适宜的反应体系：20 μL反应体积中含1 ng模板DNA、1.0 U Taq酶、0.4 μmol/L引物和0.18 mmol/L dNTPs;PCR扩增程序为94 ℃预变性4 min;94 ℃变性45 s,53 ℃退火45 s,72 ℃延伸2.5 min,共35个循环;72 ℃延伸7min,4 ℃保存.应用该体系对14份爱玉种质进行扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.