几种榕属(Ficus)植物标本的DNA提取及PCR扩增

植物标本作为一种非常重要的DNA资源受到越来越多的关注.由于其储存时间久远及储存手段局限,使得植物标本DNA提取和扩增相当困难.本研究以桑科榕属的9个种作为研究对象,采用4种DNA提取方法,比较其产物的数量和质量,并将所提取的DNA作为模版进行PCR扩增ITS和trnL-F片段.通过比较,得出以下结论:①标本的制作和储存条件对于植物标本DNA的质量有重要影响;②改进的CTAB法对于桑科榕属植物的DNA提取最为适合;③DNA模版的质量较之其他因素对PCR扩增的影响更大,适当缩短扩增片段的长度对实验的成功是至关重要的.     

一种快速制备毕赤酵母表达系统P CR鉴定模板DNA的方法

文章研究了简便高效获取毕赤酵母表达系统PCR鉴定模板DNA的提取方法,采用酶消化和物理冻熔结合的方法,提取的酵母基因组DNA直接PCR扩增检测质量。结果表明,该方法提取酵母基因组DNA具有质量高、成本低、耗时短、操作简单等优点。     

SDS一步法制备PCR模板

为了简化PCR模板DNA的制备,选取4种实验材料,采用SDS一步法制备PCR模板.经PCR扩增,获得同常规方法制备的模板相近的实验结果.实现了"一管一步"制备模板DNA,从而开辟了一种快速、简易、低成本的PCR模板制备方法.     

从蔷薇科果树硅胶干燥叶片中制备DNA

以6种蔷薇科主要树种特别是杏属植物为试材，从DNA提取、模板DNA电泳分析、RAPD扩增和S-基因型特异PCR4个方面对硅胶干燥的样品与传统液氮冷冻的样品进行了综合对比研究，结果表明：硅胶保存的样品完全可以与传统液氮冷冻的样品得到同样的PCR扩增结果，甚至在减小褐变影响方面优于后者，且干制样品的DNA纯度均比液氮速冻样品高。研究表明，用硅胶干燥法保存的植物样品可以满足后期有关RAPD等分子生物学研究的需要，且能保证野外考察时植物样品的DNA在运输过程中不被降解。     

一种简易的植物核酸提取方法─—从干叶和新鲜叶中快速提取RNA和DNA

本文介绍了一种植物核酸提取的简易方法．该法只需在常温下按常规的分子生物学操作条件从已干燥的和新鲜的植物叶中快速提取总ＲＮＡ和ＤＮＡ．所获得的ＲＮＡ和ＤＮＡ能顺利用于下一步的ＰＣＲ、测序及小分子ＲＮＡ研究等分子生物学实验．     

阔叶十大功劳ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用单因子试验和正交设计方法,对影响阔叶十大功劳ISSR-PCR反应体系的引物、Taq DNA聚合酶、dNTPs、模板DNA及退火温度5个因素进行优化,为探讨阔叶十大功劳种质遗传多样性奠定基础.结果表明:阔叶十大功劳ISSR-PCR的最佳反应体系为:在20μL反应体系中,0.5μmol/L引物、0.5UTaq酶、150μmol/L dNTPs和20ng模板DNA.在最佳反应条件下,从80条引物中筛选出15条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并经过9份阔叶十大功劳种质检验,证明该体系具有扩增条带清晰、稳定、重复性好等优点.综上所述,本文所建立的ISSR-PCR反应体系可用于阔叶十大功劳的种质鉴定及遗传多样性分析.     

硅胶破碎法抽提真菌染色体DNA

在进行基因组步行PCR克隆真菌木聚糖酶基因的研究中,探索并建立了一套可在普通分子生物学实验室采用的高得率、高质量真菌染色体DNA的抽提方法.采用液氮研磨和硅胶破碎相结合提高染色体DNA得率,采用亚精胺法纯化提高DNA的纯度.抽提的染色体DNA用琼脂糖凝胶电泳、限制酶切、PCR反应及紫外吸收光谱等方法进行了鉴定,结果显示此方法可以获得分子量大、样品纯的染色体DNA,可有效地用于PCR扩增,并能被限制酶有效地消化.     

一种简便高效的古代动物毛皮DNA提取方法

采用试剂盒QIAamp DNA Mini Kit从距今4000年前新疆小河墓地出土的黄牛毛皮中提取出古DNA,并对黄牛线粒体D-loop区部分片段进行了PCR扩增和序列测定.结果表明:所提取的古DNA真实可信;且该方法简便、高效,适用于古代动物毛皮DNA的提取.     

以病毒的230 kb DNA分子为模板的DNA序列测定

目的：为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mouse cytomegalovirus，MCMV)基因组的特定位置，改进大分子病毒DNA的测序方法，建立以230kb DNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法：待测MCMV的Tr3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后，从培养液中制备病毒颗粒并从中纯化得到基因组DNA，以此DNA为模板，合成的寡核苷酸为引物，用热循环方法按Promega公司的DNA Cycle Sequencing System试剂盒的方法进行测序。结果：获得纯度较高可直接作为模板进行测序的：DNA，测序所得放射自显影图片条带清晰明亮，间隔正常，分辨率较高，可顺利读出插入位点的MCMV的DNA序列，证实Tn3-gpt插入在特定的位置。结论：长达230kb的大分子病毒DNA可直接作为模板，用热循环测序方法进行测序，无需切割成小片段后才进行测序。     

改进CTAB法快速大量提取小菜蛾幼虫基因组DNA

报道了一种为大量快速提取小菜蛾幼虫基因组DNA而改进的CTAB(溴代十六烷基三甲胺)法。研究结果表明,该方法比较简单、经济、有效,提取的基因组DNA完全能够满足PCR等分子生物学的研究分析。     

12种作物种子DNA的提取与纯化

采用黄化苗,按氯仿—异戊醇—ＲＮＡ酶法获得ＤＮＡ粗制品,后经酚—氯仿—乙戊醇纯化得１２种作物新品种的ＰＣＲ反应模板ＤＮＡ。结果测量获得的数据和曲线表明：采用本实验的提取方法,可得到具有一定纯度和数量的ＤＮＡ,完全可以满足ＰＣＲ反应所需。     

用改进的CTAB法提取香菇基因组DNA

通过用改进的CTAB法提取27个香菇菌株的基因组DNA,并分别用紫外、琼脂糖凝胶电泳和PCR技术检测提取DNA样品的质量和产量,证明该方法可以用于香菇基因组DNA的提取,为香菇基因组DNA的提取建立了一种简单可靠的新方法.     

B病毒PCR检测方法的建立

目的建立B病毒核酸的PCR检测方法。方法设计引物,用PCR方法扩增B病毒,并验证其灵敏性和特异性。结果引物P1、P2及P3、P4在以B病毒为模板时有特定大小的目的片段出现,在以其他病毒为模板时无目的片段出现;引物P5、P6以B病毒和人单纯疱疹病毒I型(HSVI)为模板能扩增出382bp的产物,经SacⅡ酶切后,B病毒产生176bp和206bp的两个片段,HSVI无变化。结论通过PCR方法成功的区分开B病毒,并且鉴定区分了B病毒和HSVI。     

几种农杆菌质粒DNA提取方法的比较

常规的农杆菌质粒DNA提取常采用碱裂解和酚、氯仿提纯方法，得率较低，一般在50ng／uL以下。就经典的碱裂解法(方法一)和在碱裂解法的基础上改进的方法二(去除了酚、氯仿提取过程，减少了提取过程中对人的伤害，且缩短了提取时间)以及改进的方法三进行了比较，实验结果表明：改进的方法二更适宜于做PCR检测，而方法三则适合于重组质粒DNA的酶切、PCR鉴定等。     

三种血液基因组 DNA 提取方法的比较研究

摘要: 目的 比较采用 3 种不同 DNA 提取方法提取豚鼠血液基因组 DNA 之间的差异。方法 分别用新鲜抗凝血 NaI 手提法、血凝块手提法和试剂盒 DNA 提取法提取 20 只豚鼠血液基因组 DNA,用分光光度计测定、琼脂糖凝胶 电泳、PCR 扩增等方法对提取的 DNA 片段的完整性、浓度、纯度和用于 PCR 扩增的效果等方面进行比较研究。结 果 新鲜抗凝血 NaI 手提法提取的 DNA 完整性、浓度和纯度均为最高; 血凝块法提取的 DNA 浓度和抗凝血提取的 DNA 浓度接近但纯度最低,有一定程度的断裂和降解; 试剂盒法提取的 DNA 浓度最低,纯度和完整性处于中间,但 三种方法提取的 DNA 都可用于 PCR 扩增反应。结论 3 种方法都可以提取基因组 DNA 并且所提取的 DNA 均能 满足后续 PCR 扩增实验的要求,但每种方法各有利弊,可根据具体的条件选择适宜的方法。     

柳树RAPD反应体系均匀设计试验研究

从柳树幼苗的嫩叶中提取基因组DNA作为模板,运用均匀设计方法,获得;柳树RAPD扩增反应的优化体系：25μL反应体系中,DNA模板用量70 ng,引物浓度0.5mmol.L-1,Mg2＋浓度3mmol.L-1,TaqDNA聚合酶用量1.0 U,dNTP浓度0.3mmol.L-1.用16条引物进行验证,证实该体系重复性好、结果稳定.     

山药基因组DNA的提取和RAPD反应条件的优化

研究了山药基因组DNA的提取方法;对Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和Taq酶用量进行了优化,建立了最佳的RAPD反应体系:在25μL反应体系中Mg2+浓度为2.0 mmol.L-1,dNTPs浓度为0.25 mmol.L-1,引物浓度为20 pmol.L-1,Taq酶1.5 U,模板DNA为200 ng.扩增程序为:95℃预变性7 min;94℃变性30 s,36℃退火45 s,72℃延伸2 min,共35个循环;72℃终延伸10 min.     

液氮速冻法快速回收小分子DNA片段

介绍一种高效回收小分子DNA片段的方法,只需两个离心管及一块玻璃棉纸,凝胶速冻后简单离心即可回收DNA.实验证明这种回收DNA的方法具有简便快捷、成本低和效率高等优点,是一种切实可行的方法.     

Chromosome microdissection by laser microbeam, chromosomal fragment isolation and amplificationin vitro in barley (Hordeum vulgare L.)

A method for microdissection, isolation and amplification of plant chromosomal fragments using laser microbeam and a glass microneedle was established. Firstly, 7H chromosome of barley (Hordeum vulgare L.) was dissected by Nd: YAG laserbeam with suitable parameters and the fragment comprising a satellite was isolated with a glass microneedle which was fixed on a micromanipulator. Then, the chromosomal fragment DNA was amplified by LA_PCR (linker adaptor PCR) for two rounds. The size of the DNA fragments of PCR products varied from 500-3 000 bp and the PCR products originated from the genome of barley were verified by Southern hybridization. Compared with previous reports, there are some advantages in this research. The performance is easier, the dissection is more precise and the cost is low. It also permits efficient amplification with only one single chromosome fragment. Laser microbeam_glass microneedle method may be useful in the microdissection of special chromosome regions, especially in plants with middle or small chromosomes.     

Poly(dimethylsiloxane) based microchip for DNA electrophoresis

A novel poly(dimethylsiloxane)(PDMS) -based microchip for DNA separation through electrophoresis has been developed using a micro-electro-mechanical-system(MEMS) technology. Unlike previous hybrid PDMS microchip, one PDMS film is first created on glass support by pressing method in our microchip. Thus, increased band-broadening phenomena, arising from the material nonuniformity at the walls of microchannel, can be avoided in electrophoresis process. A low-viscosity hydroxypropylmethylcellulose-100 (HPMC-100) is used as the separation medium for fluorescent intercalator-labeled double-stranded DNA (dsDNA) fragments. Mannitol is introduced to PDMS-based microchip as a separation medium additive to enhance separation efficiency. At applied electric field strength of 150 V/cm, excellent separations of the PCR marker could be achieved with an effective separation distance of 25mm .