山羊精子电穿孔转染外源DNA影响因素及最适条件的研究

本文以山羊精子为材料用电穿孔导入法转染外源基因,为生产转基因山羊奠定基础.用血细胞计数器在显微镜下记数死亡精子数检测精子活力,并用原位杂交实验检测电击精子消化前、后阳性率.以探讨山羊精子电穿孔转染外源DNA的方法及影响因素,摸索并优化电穿孔转染程序和条件.结果显示:电穿孔导入法可用于山羊精子介导转染外源DNA;电场强度、电击时间和电击次数同时影响精子活力,其中电击时间显著影响外源DNA的内化转运(P＜0.05),山羊精子最适电穿孔条件为400V、200μs、电击1次,该条件下电击后精子活力和消化前、后阳性率分别为0.45和27.6%、22.5%;最适电穿孔条件下电击洗涤精子比未洗涤精子的消化后阳性率提高14%(P＜0.01),将洗涤精子与外源DNA共孵育后再电击比不孵育处理组的消化后阳性率提高5.8%(P＞0.05);电穿孔处理消化后阳性率在个体间无显著差异,且电击转染的精子被内化转运到精细胞内的外源DNA分布不规则.结果表明,山羊精子电穿孔转染外源DNA的最适转染条件为对精子充分离心洗涤并与外源DNA共孵育后.在400V/200μs条件下电击1次.     

山羊精子电穿孔转染外源DNA影响因素及最适条件的研究

本文以山羊精子为材料用电穿孔导入法转染外源基因,为生产转基因山羊奠定基础。用血细胞计数器在显微镜下记数死亡精子数检测精子活力,并用原位杂交实验检测电击精子消化前、后阳性率,以探讨山羊精子电穿孔转染外源DNA的方法及影响因素,摸索并优化电穿孔转染程序和条件。结果显示:电穿孔导入法可用于山羊精子介导转染外源DNA;电场强度、电击时间和电击次数同时影响精子活力,其中电击时间显著影响外源DNA的内化转运(P<0.05),山羊精子最适电穿孔条件为400V、200μs、电击1次,该条件下电击后精子活力和消化前、后阳性率分别为0.45和27.6%、22.5%;最适电穿孔条件下电击洗涤精子比未洗涤精子的消化后阳性率提高14%(P<0.01),将洗涤精子与外源DNA共孵育后再电击比不孵育处理组的消化后阳性率提高5.8%(P>0.05);电穿孔处理消化后阳性率在个体间无显著差异,且电击转染的精子被内化转运到精细胞内的外源DNA分布不规则。结果表明,山羊精子电穿孔转染外源DNA的最适转染条件为对精子充分离心洗涤并与外源DNA共孵育后,在400V/200μs条件下电击1次。     

精子介导法生产转基因动物研究进展

精子介导基因转移是利用动物精子具有自发结合和内化转运外源DNA能力的特点,并使其在受精时导入卵母细胞,获得转基因动物.该方法 具有操作简单、高效和适用等特点,但影响精子转染外源基因效率的因素很多,其中包括外源DNA、精子及转染方法 等.     

精子介导法生产转基因动物研究进展

精子介导基因转移是利用动物精子具有自发结合和内化转运外源DNA能力的特点,并使其在受精时导入卵每细胞,获得转基因动物。该方法具有操作简单、高效和适用等特点,但影响精子转染外源基因效率的因素很多,其中包括外源DNA、精子及转染方法等。     

不同解冻方法对辽宁绒山羊精子活力的影响

通过比较三种精液冷冻保存稀释液配方（A、B、C）对山羊细管冷冻精解冻后精子活力的影响,结果表明,三种稀释液配方（A、B、C）,冷冻-解冻后精子活力有极显著的差异（P〈0．01）,分别为42．57％、37．34％、33．03％,A显著优于B液和C液．而且用不同的水浴温度和解冻时间进行解冻,通过精子活力的比较,寻找出最佳的解冻温度为38℃,解冻时间为60s．     

汾河太原段冬季污水对小鼠肝脏毒理效应探究

采用连续灌胃处理小鼠的方法研究了汾河太原段上游和下游不同地点的冬季污水对小鼠肝脏的毒理作用．结果表明：本实验条件下冬季不同地点水样都使小鼠的微核显著增加（P〈0．01），核分裂指数显著下降（P〈0．01），且存在剂量一效应关系；相同处理浓度下，不同地点之间差异显著（P〈0．01）；而不同剂量水样处理间的小鼠的肝脏鲜重比有极显著差异（P〈0．01），说明汾河太原段的污水对小鼠肝脏有极显著的毒害作用（P〈0．01）：上下游水样比较，下游的水样毒害作用更显著（P〈0．01）．     

基因工程ROSA小鼠血液部分生理生化指标

目的测定基因工程B6;129-Gt（ROSA）26Sor小鼠血液生理生化正常值。方法采用全自动血细胞分析仪和全自动生化测定仪能分别对5～6周雄性、6～7周雌性ROSA小鼠的血液常规及生化值进行测定。结果ROSA雄雌小鼠血常规比较,中性粒细胞百分率（GR）、中性粒细胞计数（GR#）、平均红细胞血红蛋白量（MCH）之间比较差异显著（P〈0．05）,红细胞计数（RBC）、红细胞比积（Ht）、血红蛋白（Hb）、血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）之间比较差异非常显著（P〈0．01）;血液生化值雄雌小鼠比较,血肌酐（Cre）间差异显著（P〈0．05）,白蛋白（Alb）、总胆固醇（TC）间差异非常显著（P〈0．01）,其它指标差异不显著。结论该小鼠的某些生理生化指标值在雄雌间有一定的差异。     

青海沙蜥的生长及两性生长差异

为了研究自然生境中沙蜥的生长和两性生长差异情况，于2001～2002两年间对分布在四川西北部若尔盖地区的青海沙蜥（Phrynocephalus vlangalii）进行了6次标志重捕．结果表明：第一年8、9月出生的沙蜥到第二年的6月SVL、TL和BM都有显著的生长（P〈0、05），雌、雄个体的两性生长差异不显著（P〉0．05）；第二年6月至8、9月间，雌、雄个体的SV、TL和BM都有快速的生长（P〈0．01），从7月份开始出现了两性生长差异（雌性的生长速度小于雄性）（P〈0．01）；第三年的6月至8月间，雌性的SVL、TL和BM仍在快速生长（P〈0．01），而雄性的生长则不显著（P〉0．05），雌性的三个生长指标的生长量远大于雄性（P〈0．01），并且SVL和BM的生长量与第二年的同期生长量非常接近（P〉0．05）；四年以后，雌、雄个体的SVL和TL的生长及两性生长差异都不再显著（P〉0．05），但是在体形大小上还存在极显著的两性异形（P〈0．01）．在青海沙蜥的生长发育过程中，雄性的生长曲线近似“S”形，而雌性则是非“S”形．雌、雄个体的生长受季节和年龄的影响，造成雌、雄两性成长差异的主要原因是雌、雄个体对繁殖的能量投入不平衡．     

蒙药肝乐康胶囊对D-GlaN、TAA所致小鼠化学性肝损伤的保护作用

目的：观察肝乐康胶囊的保肝降酶作用．方法：以护肝片作阳性对照,用不同肝毒剂造成小鼠急性肝损伤,分别测定动物血清相关指标,用t检验法比较各组间差异．结果：模型组与正常组比较,小鼠血清AST、ALT明显升高（P〈0．01）;肝乐康胶囊组可降低因D—GlaN所致肝损伤小鼠的ALT及AST（P〈0．05）;明显降低因TAA所致肝损伤小鼠的ALT及AST（P〈0．01）．结论：肝乐康胶囊对以上不同肝损伤模型均有保肝降酶作用．     

桑黄菌质多糖体外抑瘤及抗环磷酰胺致突变的作用

采用MTT法研究桑黄固态发酵菌质多糖（PISPS）对肝癌细胞（HepG-2）、乳腺癌细胞（MCF-7）生长的抑制作用，测定出多糖对细胞生长的最高抑制率为59．18％、55．39%，半数抑制浓度为196.9、162．5μg／mL，且随药物浓度的增加抑制率有增大的趋势，与正常组比较作用较为显著（P〈0．05）；选用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验和小鼠精子畸形试验，对多糖的抗环磷酰胺（CP）致突变作用进行评价，结果表明桑黄菌质多糖使环磷酰胺诱发的细胞微核率和精子畸形率明显降低（P〈0．01）．     

吸烟的重金属危害与DNA损伤

目的 探讨习惯性吸烟对血浆内重金属含量变化以及DNA损伤的影响.方法 湘南学院94名健康大学三年级男生,20名不吸烟者（对照组,C组）;74名吸烟者,按照吸烟数量分为E1组（≤20支/周）,E2组（＞20支/周）;测定每个大学生血浆内汞、镉、铅及8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的含量,并比较了组间有无差异.结果 C组,E1组,E2组血浆中：①汞含量分别为0.022±0.016、0.036±0.018、0.058±0.013 μmol/L;镉含量分别为0.012±0.008、0.020±0.010、0.031±0.013 μmol/L;铅含量分别为0.209±0.028、0.251±0.018、0.272±0.032 μmol/L,三组之间差异均有统计学意义（P 〈 0.01）;②8-OHdG分别为204.23±28.48、354.84±36.13、517.15±19.74 μg/L,三组之间差异有统计学意义（P 〈 0.01）;③吸烟者吸烟指数与血浆中镉、铅及8-OHdG的含量均呈正相关（r分别为0.646、0.520、0.743,P 〈 0.05）.结论 习惯性吸烟能够导致机体重金属的集聚性中毒,并且伴有机体DNA的损伤.随着吸烟量与吸烟时间的累积,这种有害效应的危险性也将显著增大.     

链霉素抑制慢性心肌梗死大鼠心脏牵张时的电生理改变

研究目的：以往研究发现链霉素作为牵张激活离子通道阻断剂,可抑制机械电反馈时心脏的电生理效应,但多为离体研究。由于慢性心肌梗死时心肌细胞问存在较为明确的牵拉,故本研究探讨了在大鼠体内应用链霉素是否可以抑制慢性心肌梗死大鼠心脏牵张诱导的电生理改变。创新要点：首次探讨了在大鼠体内应用链霉素对慢性心梗时心脏机械电反馈现象的影响。研究方法：60只Wistar大鼠随机分为4组：对照组（n=15）、链霉素组（n=15）、心梗组（n=15）和心梗±链霉素组（n=15）。结扎左前降支（LAD）8周制备慢性心梗模型,术后肌注链霉素（180mg／（kg·d）7天后,钳夹主动脉5秒牵张心脏,观察牵张效应包括90％单相动作电位时程（MAPD90）、室性期前收缩（PVB）、室性心动过速（VT）等。重要结论：研究结果发现牵张使得对照组（（50．27±5．61）msVS．（46．27±4．51）ms,P〈0．05）和心梗组（（65．47±6．38）ms vs．（57．47±5．76）ms,P〈0．01）大鼠心脏MAPD90缩短。链霉素可抑制牵张引起的正常（（46．27±4．51）ms vs．（49．53±3．52）ms,P〈0．05）和梗死心肌（（57．47±5．76）ms vs．（61．87±5．33）ms,P〈0．05）MAPD90的缩短（见图1）。牵张后心梗组大鼠心肌PVB（7．93±1．66VS．1．80±0．86,P〈0．01）和VT（7 vs ．1,P〈0．05）的发生较对照组增多。链霉素可抑制正常（0．93±0．59VS,1．80±0．86,P〈0．05）和梗死心肌（5．40±1．18VS,7．93±1．66,P〈0,01）PVB的发生。以上结果表明,牵张诱导慢性梗死心肌出现MAPD90的改变并产生心律失常。在大鼠体内应用链霉素可降低PVB的发生但对VT无影响。因此,牵张激活离子通道可能参与到慢性心梗的机械电反馈中,涮时可能有其他机制参与到牵张诱导的VT中。     

支链氨基酸增强小鼠的游泳能力对其血氨和5-羟色胺变化的研究

目的探讨支链氨基酸（Branched-chain amino acids,BCAAs）对训练小鼠抗疲劳运动能力的影响。方法50只小鼠随机分为实验组（B1、B2、B3、B4）和对照组（C）。实验组分别灌胃补充BCAAs0.45、1.25、3.75和10g/kg.d,对照组灌胃生理盐水。各组小鼠5周递增负荷游泳训练后进行力竭游泳并取材。观察BCAAs对小鼠脑组织5-羟色胺（5-HT）、血氨（PA）和力竭游泳时间的影响。结果实验组小鼠血氨含量升高,脑组织匀浆中5-HT含量下降,但力竭运动游泳时间均显著延长。结果血氨浓度随剂量的增加而增大,C与B1组相比血氨水平无显著性差异,但明显低于B2、B3、B4组（P〈0.01）;C组小鼠5-羟色胺浓度显著高于实验组（P〈0.01）,实验组间随着补充剂量的增大5-羟色胺浓度减小;实验组小鼠力竭游泳能力明显强于对照组（P〈0.01）。实验组间,B2、B3组小鼠力竭时间明显长于B1组（分别为P〈0.05,P〈0.01）,B4组力竭时间与B1、B2、B3组相比则下降。结论BCAAs能够对抗运动性疲劳的发生发展,增强运动能力,但具有量效关系。     

脑震荡后综合征大鼠海马的神经损伤及磁共振波谱分析

目的:探讨脑震荡损伤对大鼠海马区代谢物水平的影响及其病理机制.方法:将25只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(n=10)和PCS组(n=15),采用Marmarou改良法复制大鼠脑震荡损伤模型,对脑震荡24h大鼠及对照组大鼠进行1H-MRS扫描后处死,对脑组织进行免疫组织化学和免疫荧光染色观察海马CA1区的残存锥体细胞和凋亡细胞的数量.结果:1H-MRS扫描结果显示,PCS组大鼠左侧海马区NAA/Cr水平(0.824±0.17)明显低于正常对照组(1.299±0.12),P<0.01;PCS组大鼠右侧海马NAA/Cr水平(0.792±0.17)明显低于正常对照组(1.287±0.18),P<0.01.PCS组大鼠海马CA1区小血管扩张淤血,锥体细胞呈代偿肥大与凋亡并存状态.免疫组织化学结果显示,PCS组大鼠海马CA1区NeuN阳性细胞数量(176.17±26.92)较正常对照组(228.33±26.34)明显减少,P<0.05;免疫荧光实验结果显示,PCS组海马CA1区凋亡细胞的数量(48.03±5.46)较正常对照组(35.49±7.75)明显增多,P<0.01.结论:脑震荡后大鼠双侧海马区神经细胞的代谢物水平均下降,海马CA1区残存锥体细胞数量减少和凋亡细胞增多,后者可能是代谢物水平变化的病理基础.     

太极柔力球结合决明子茶饮对肥胖女大学生的干预影响

目的：探讨太极柔力球结合决明子茶饮对单纯性肥胖女大学生身体形态与血脂代谢的双重干预影响效果,为女大学预防超重尤其是肥胖的发生发展提供参考依据。方法：随机选取某高校肥胖女大学生80名为研究对象。在知情、自愿的原则下,随机分成人数相等的实验组和对照组（实验组有2人,对照组有1人因其他原因中途退出）,实验组每人每天饮用一份决明子茶并练习36式太极柔力球40min,对照组仅每天与实验组同时同地进行太极柔力球练习,共计60d。结果：太极柔力球结合决明子茶饮对肥胖女大学生血压有显著的改善作用（P〈0．01）,减慢安静心率（P〈0．01）,提高心肺功能（P〈0．01）,显著降低体重、BMI值（P〈0．01）,减少脂肪在腰腹部的堆积（P〈0．01）,使腰臀比趋于合理（P〈0．01）,对血脂代谢的TG、CHOL、HDL、LDL、ApoAI、ApoB等指标有显著的良性改善作用（P〈0．01）,是肥胖女大学生保持苗条身材、抑制和预防肥胖的一个较好的选择。     

半夏与苦参合用的镇静催眠作用研究

目的研究半夏与苦参合用后对小鼠的镇静催眠作用。方法采用电位滴定法测定半夏药材中总游离有机酸的含量,酸碱滴定法测定苦参中总生物碱的含量,以控制药材质量;采用阈下和阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠法,对受试药物的镇静催眠作用进行比较研究;结果小鼠睡眠持续时间长短顺序为生理盐水组（20．87±14．07min）〈苦参、半夏小剂量组（38．85±16．69min）〈苦参、半夏大剂量组（41．14±15．99min）〈苦参大剂量组（44．73±16．26min）〈苦参小剂量组（47．29±19．92min）,且给药组时间与空白组时间均有显著性差异。结论结果表明,苦参大、小剂量组,以及苦参＋半夏大、小剂量组均能明显延长戊巴比妥钠小鼠睡眠时间,强度可与安定（1mg／kg）相当。     

乌蕨（Stenoloma chusanum）水部位的体内抗氧化作用研究

目的：研究乌蕨水部位的体内抗氧化作用．方法：采用小鼠CCl4损伤模型,观察乌蕨水部位的抗氧化作用,测定乌蕨对小鼠血液中SOD、GSH—PX酶活性、MDA含量的影响．结果：乌蕨可降低血清中MDA含量（P〈0．01）,提高小鼠的血清SOD酶（P〈0．01）、全血GSH—PX酶的活力（P〈0．05）．结论：表明乌蕨水部位具有体内抗氧化活性．     

重庆中小学学生体质状况与体育锻炼期望价值的研究——以重庆市区中小学为例

通过对重庆市区中小学学生进行为期3个半月的体质测试和问卷调查。1）从各年级学生的体质上看,在身体机能指标中,男生的肺活量增长最快,且此项的男女增长差异最大（P〈0．01）;在运动素质指标中,女生的坐位体前屈指标增长最快,且此项的男女生增长差异最大（P〈0．01）;在身体形态指标中,男生的体重增长最快,且此项的男女增长差异最大（P〈0．01）,在环比研究中发现：男、女学生在身高、体重上均有下降趋势。2）从各年级学生的锻炼行为上看,学生的锻炼时间普遍为30-60min,且随着年级的提升锻炼时间略有增加：从锻炼地点看,三、五年级的学生主要以社区为主,初二和高二年级主要是以学校为主;从锻炼强度上看,三、五年级学生锻炼强度较小,初二和高二年级强度增大,尤以初二年级最为突出。3）从学生的锻炼期望上看,锻炼效果因子中五年级、初二、高二年级差异最大（P〈0．05）;锻炼人际因子中只有高二年级男女生存在差异（P〈0．05）。4）从学生的锻炼期望因子回归上看,锻炼意识因子的贡献系数最大（β=0．127,（P〈0．01））;锻炼人际因子的贡献系数最小（β=-0．009,P〉O．05）。     

反式白藜芦醇对化学诱导小鼠急性肝损伤的预防研究

研究反式白藜芦醇对四氯化碳（CCl4）所致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用．方法雄性昆明种小鼠60只,随机分为正常对照组、急性化学性肝损伤模型组、联苯双酯阳性对照组（15mg／kg）以及反式白藜芦醇低、中、高剂量组（10、15、20mg／kg）共6组．测定并比较各组小鼠肝脏系数,血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性与丙二醛（MDA）含量;测定肝组织中SOD、GSH-Px活性、MDA含量以及组织病理系数．结果反式白藜芦醇各剂量组均能升高急性化学性肝损伤小鼠血清与肝组织SOD、GSH-Px活性（P〈0．01）,降低血清ALT、AST活性（P〈0．01）和血清与肝组织MDA含量（P〈0．01）,并能不同程度地改善肝脏病理组织损伤．结论反式白藜芦醇对CCl4所致急性化学性肝损伤具有预防性保护作用．     

灯盏花素对缺血性记忆障碍和血脑屏障的保护作用

采用行为观察和生化检测相结合的方法,研究了灯盏花素对小鼠缺血性记忆障碍和血脑屏障的保护作用．结果表明：前脑重复缺血再灌注使小鼠的学习记忆能力显著下降（P〈0．01）,同时伴随脑内髓过氧化物酶（MPO）活性上升（P〈0.01）、脑组织伊文思蓝（EB）及水含量升高（P〈0.01）．灯盏花素治疗可提高缺血小鼠的学习记忆能力,并使脑组织EB含量下降（P〈0.05和P〈0.01）、水含量减少（P〈0.05）,使血脑屏障损伤程度有所减轻;同时,伴随MPO活性的下降（P〈0.05和P〈0.01）,炎症反应减弱．提示灯盏花素能减轻缺血再灌注引起的脑损伤,改善小鼠的学习记忆能力．该作用可能与灯盏花素提高脑组织抗血脑屏障损伤和抗炎症反应能力有关．