蛋清提取溶菌酶技术

溶菌酶是有抗菌作用的糖着水解酶,又称胞壁质酶,是优良的防腐剂,可用于饮料及食品等保鲜,它还具有抗炎消肿清疮排脓、增强机体免疫力等多种药理作用,常用于治疗多种粘膜炎症,带状癌症等疾病。鸡蛋清中溶菌酶的含量约占蛋白质含量的35％,目前医药工业上所用的溶菌酶主要是以蛋清为原料提取结晶的。本文介绍一种简便提取溶菌酶的新方法。提取原理向蛋清中加入一定量的中性盐,并调节pH值至溶菌酶的等电区（10.7－11．3）,溶菌酶即可结晶析出,而大多数蛋白质仍存留于溶液之中;结晶体经过滤后再溶于酸性水溶液中,许多杂质蛋白形成沉…     

酵母多糖对赤眼鳟非特异性免疫机能的影响

分别给赤眼鳟投喂4种不同酵母多糖含量的饲料(w(酵母多糖)分别为0、0．2％、0．5％、0.8％)36d。并在第12、24和36天检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、溶菌酶活性、白细胞吞噬活性、红细胞的免疫功能，和第36天检测血清中补体C3水平。结果表明：饲料添加了0．5％和0.8％酵母多糖的饲料能显提高鱼类SOD酶活性．溶菌酶活性、补体C3水平、白细胞吞噬活性、红细胞的免疫功能，而添加了0．2％的酵母多糖饲料只能显提高溶菌酶活性。     

珍禽蛋溶菌酶制备工艺优化及稳定性研究

溶菌酶广泛存在于动、植物及微生物中,以鸡蛋蛋清中含量最高.珍禽蛋蛋清中溶菌酶酶活力远高于普通鸡蛋中溶菌酶酶活力,更适宜作为优质溶菌酶生产来源.文中以珍禽蛋与阳离子交换树脂为原料,建立一条适合工业化生产的珍禽蛋溶菌酶的制备工艺,研究主要分为以下几个方面：溶菌酶提取原料及树脂型号的选用,高原乌鸡鸡蛋溶菌酶制备工艺的建立,高原乌鸡鸡蛋溶菌酶质量评价.     

Nocardia rubra细胞壁骨架(N-CWS)抑制小鼠Lewis肺癌的试验研究

以冻干Nocardia rubra细胞壁骨架注射剂对C57BL／6J小鼠移植肿瘤Lewis肺癌进行抑瘤试验，并进行荷瘤鼠外周白细胞计数和测定血清溶菌酶含量。结果表明，Nocardia rubra细胞壁骨架对Lewis肺癌的抑瘤率为37．2％，显示了明显的抑制肿瘤生长的作用。同时荷瘤小鼠外周血白细胞有明显升高，血清溶菌酶含量的增加也非常显著，提示其抗肿瘤过程中的非特异性免疫促进作用。     

Ag(Ⅰ)-溶菌酶相互作用的光谱学研究

利用紫外可见光谱和红外光谱研究了Ag(Ⅰ)与溶菌酶之间的相互作用和酶微观结构的变化.紫外可见光谱测试表明Ag+与溶菌酶肽链上的C=O存在相互作用,红外光谱测试表明Ag+与溶菌酶结合位点可能为—OH和—NH基团,利用二阶导、自退卷积和谱线拟合技术对溶菌酶红外谱图的酰胺Ⅰ带进行处理并推测其二级结构变化,结果表明:α-螺旋二级结构含量降低,β-折叠二级结构含量增加,与Ag+作用后,溶菌酶的活性没有明显改变.     

大气污染对儿童非特异性免疫功能的影响

为了探讨大气污染对儿童非特异性免疫功能的影响,我们测定了焦作和新乡丙市工业污染区和相对清洁区儿童唾液溶菌酶的含量。两市工业污染区儿童唾液溶菌酶含量的均值为121.35±1.86μg/ml;相对清洁区为38.08±1.79μg/ml。前者明显低于后者,有板显著差异(u=9.19>2.53)。说明焦作和新乡两市工业区的大气污染已构成对儿童非特异性免疫功能的影响。对儿童健康的危害十分明显,在相对清洁区不同性别的男女儿童唾液溶菌酶含量无明显差异,而在工业污染区男童唾液溶菌酶含量明显低于女童,有极显著差异(u=2.69<2.58)。说明不同性别儿童对不良环境的耐受能力不同,男童明显低于女童。     

从溶菌酶看酶学的进展

溶菌酶是一种能溶解细菌细胞的酶。在酶学分类中,它属于水解酶类,作用于糖苷链。其学名为N—acetylmuramide glycanohydrolasce.系统分类编号是3、2、1、17。溶菌酶广泛存在于动物,植物组织及其分泌液中。在鸡蛋白中含量较多。自1922年被发现以来,于1937年、1945年先后自鸡蛋白得两种溶菌酶结晶。53年、54年又自兔脾得结晶。45年用皂土吸附再洗脱法得高纯度的溶菌酶。71年又自人的皮肤得到溶菌酶。这其间,提纯、测定的方法不断改进,化学性质的研究亦为数众多。为进一步研究溶菌酶的结构及功能提供     

酶凝固天然橡胶硫化特性及力学性能的研究

采用溶菌酶和碱性蛋白酶凝固天然胶乳,考察了凝固方法对天然橡胶硫化特性、力学性能等的影响。结果表明,溶菌酶和碱性蛋白酶均能使新鲜天然胶乳顺利凝固;采用溶菌酶凝固新鲜天然胶乳,得到的天然橡胶蛋白质含量较高,硫化速率较慢,硫化胶具有较高的交联密度和力学性能,以及较高的玻璃化转变温度和压缩生热;而采用碱性蛋白酶处理新鲜胶乳,部分蛋白质被水解,导致天然橡胶中蛋白质含量下降,硫化速率加快,硫化胶具有较低的交联密度和力学性能。     

灭活疫苗对鲤鱼血清溶菌酶和腹腔吞噬细胞活性的作用

腹腔注射豚鼠气单胞菌灭活疫苗可以提高吞噬细胞和血清溶菌酶的活性,强化免疫后７２ｈ腹腔吞噬细胞活性和血清溶菌酶活性最高,吞噬率为３９．８３％,吞噬指数为１．８７２,而对照组的吞噬率为２６．７０％,吞噬指数为１．２８６,血清溶菌酶活性为６８４００Ｕ／ｍｌ,而对照组为２０１９０Ｕ／ｍｌ,我们认为,非特异性免疫活性的增强是鱼用疫苗的一种重要的免疫机制。     

酶凝固天然橡胶硫化特性和力学性能的研究

采用溶菌酶和碱性蛋白酶凝固天然胶乳,考察了凝固方法对天然橡胶硫化特性、力学性能等的影响。结果表明,溶菌酶和碱性蛋白酶均能使新鲜天然胶乳顺利凝固。采用溶菌酶凝固新鲜天然胶乳,得到的天然橡胶蛋白质含量较高,硫化速率较慢,硫化胶具有较高的交联密度和力学性能,以及较高的玻璃化转变温度和压缩生热。而采用碱性蛋白酶处理新鲜胶乳,部分蛋白质被水解,导致天然橡胶中蛋白质含量下降,硫化速率加快,硫化胶具有较低的交联密度和力学性能。     

EFFECTS OF HIGH HYDROSTATIC PRESSURE AND OTHER FACTORS ON BACILLUS STEAROTHERMOPHILUS *

研究了高静压协同水分活性、热处理工艺和溶菌酶等方法对嗜热脂肪芽孢杆菌的灭菌作用．结果表明,介质的水分活性明显影响芽孢对压力的敏感性,水分活性越高,芽孢残存率越低．采用不同的热处理工艺来增强压力的灭菌作用,发现高压处理前的预热处理（４５℃,２０ｍｉｎ）比高压处理后的热处理有更高的灭菌效果;与其他预处理温度（４５℃,８５℃）相比,６５℃预热处理获得的芽孢残存数更低．微波预热处理比传统热处理有更好的协同灭菌效果．溶菌酶的存在有助于提高芽孢对压力处理的敏感性．观测了压力与溶菌酶对嗜热脂肪芽孢杆菌的协同作用效果．当介质中溶菌酶浓度为３３３４×１０－２ｍｏｌ／（ｓ·Ｌ）时,在３００ＭＰａ下处理１５ｍｉｎ,芽孢残留量大约可下降５个数量级     

电喷雾质谱研究乙腈诱导的溶菌酶的构象变化

首次采用电喷雾质谱结合圆二色性光谱以及荧光光谱,研究不同浓度的乙腈诱导对溶菌酶构象变化的影响.在pH2.0的酸性环境下,随着乙腈浓度的上升,电喷雾质谱的谱图中溶菌酶电荷状态分布会变宽,当乙腈浓度达到70%时,会出现15 的高电荷离子峰,电荷中心也从纯水溶剂的10 到了12 ,表明其三级结构发生了变化,即由天然构象转变为部分非折叠的构象.圆二色光谱显示在溶菌酶水溶液中加入乙腈,二级结构中无规卷曲的百分含量在增加.荧光光谱进一步证明在乙腈的作用下,溶菌酶由天然构象转变为部分非折叠的构象.     

光谱法研究阿维菌素与溶菌酶的相互作用

为研究阿维菌素残留被生物体吸收后,在生物体内的作用机理,在模拟生理条件下,应用荧光光谱、圆二色谱和同步荧光研究阿维菌素与溶菌酶相互作用的活性机理.研究表明,阿维菌素与溶菌酶的作用机理为荧光静态猝灭;两者通过氢键和范德华力形成1︰1结合,结合距离为4.55 nm;298、303和308 K时的结合常数分别为1.10×105、1.08×105和0.38×105 L·mol?1,结合强度紧密;同步荧光和圆二色谱证实阿维菌素影响溶菌酶的二级结构,使溶菌酶分子α-螺旋结构含量减小.本文为农药残留在生物体内中代谢过程、解毒和指导科学使用农药提供理论依据.     

溶菌酶高产链霉菌RX-17的筛选及其特性研究

在添加变链球菌(Strephtococcus mutans)菌体的双层平板上，筛选到一株产溶菌酶能力较高的放线菌RX-17，将其初步归为链霉菌黄色类群，对产酶进程监测表明，该菌产酶与生长密切相关，72h酶活力可达185U／mL．RX-17所产溶菌酶溶菌谱广泛，能够溶解多种卵清溶菌酶不能作用的革兰氏阳性与阴性细菌，对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及变链球菌族细菌溶解能力较强．通过CM-Sephadex C-50离子交换层析，对RX-17溶菌酶粗制品进行了初步分离，得到了3个有溶菌活力的组分.     

具有溶菌酶的部分生物活性的α—乳清蛋白（^32His→Leu,^33Thr→Glu,^103Tyr→Ala）突变体

在溶菌酶催化机理以及α－乳清蛋白和溶菌酶同源比较的基础上,构建了含3个突变点的α－乳清蛋白突变体（H32L,T33E,Y103A）,并将其克隆到具有T7启动子的表达质粒pET28a（＋）中,在大肠杆菌BL21（DE3）／pLys中获得高效表达,存在于包涵体中的目标蛋白经变复性并通过DEAE Sepharose Streamline和Sephacryl S200层析柱获得纯化蛋白,合成底物p-Nitrophenyl-β-D-N′,N″,N′″－Triacetyl-chitotriose [pNP-(NAcGlc)3]与突变体蛋白的反应时间曲线证明突变体蛋白了部分溶菌酶生物活性,为重组难蛋清溶菌酶（HEWL）的5．26％,利用等温滴定量热法测定突变体蛋白与五糖底物chitopentaose的平均热结合能为71．34kJ/mol,重组HEWL为105．47kJ/mol,实验表明,通过有限元的几个突变就可以使α－乳清蛋白获得溶菌酶的活性,这在分子水平上有力地佐证了两者的高度同源性和进化关系。     

添加剂促进变性还原溶菌酶复性的作用

研究了多种添加剂促进变性还原溶菌酶复性的作用，考察了添加剂浓度及变性剂盐酸胍浓度对复性收率的影响．结果表明，精氨酸、乙酰胺、丙酮、硫脲及甘油均能有效促进变性溶菌酶复性，并且存在最佳的添加剂浓度使变性溶菌酶的复性收率最大．在促进复性中，乙酰胺等结构类似物与盐酸胍具有相同作用，因此，在降低复性液中盐酸胍浓度的同时，适当提高乙酰胺浓度即可获得较高的复性收率．当盐酸胍浓度为0．2mol／L时，复性收率达到90％时的乙酰胺浓度为2mol／L，但降低盐酸胍浓度至0．06mol／L时，达到相同变性收率的乙酰胺浓度需要4mol／L．甘油与盐酸胍存在着协同作用，在一定浓度的盐酸胍存在下，添加适量的甘油能获得较高的复性收率．     

定量负荷对唾液溶菌酶含量影响初探

为探讨定量负荷对大学生唾液溶菌酶(lysozyme缩写LZM)含量的影响,我们对168名大学生LZM含量进行了测定分析。实验结果表明,在静态时,体育系学生LZM含量低于普系学生;定量负荷后即刻体育系学生LZM含量明显增加;不同运动专项的体育学生LZM含量亦有差别,球类专项学生其含量低于田径专项。     

XeCl准分子激光辐照能量变化对溶菌酶结构与活力的影响

采用XeCl准分子激光器,以不同能量密度激光(0.1 mJ/mm2,0.3 mJ/mm2,0.5 mJ/mm2)辐照溶菌酶,研究辐照后酶活力和蛋白质结构变化。以SDS-PAGE方法检测酶分子间聚合情况,并结合荧光光谱、圆二色光谱变化,探讨不同能量密度激光辐照对溶菌酶活力和分子结构变化规律。结果表明,较低能量密度(0.1 mJ/mm2,0.3 mJ/mm2)辐照,溶菌酶的荧光光强和酶活力随着辐照剂量(脉冲数)的增加出现先上升后下降的规律变化,而较高能量激光辐照(0.5 mJ/mm2)导致溶菌酶活力和荧光光强均呈下降趋势,这说明激光辐照导致的溶菌酶活力和分子结构变化存在剂量依赖效应。SDS-PAGE显示,随着辐照能量密度和脉冲数的增加,溶菌酶出现了更多的分子间聚合。较低能量密度辐照时,聚合是由分子间二硫键形成的,而较高能量密度诱发的分子聚合是由分子间二硫键及疏水键协同作用形成的。圆二色光谱分析显示,激光辐照使溶菌酶分子内α螺旋和转角的含量均呈现不同程度下降,β-折叠和无序的氨基酸无规则卷曲的比例均有升高,这说明溶菌酶活力的降低及分子聚合是由溶菌酶分子二级结构改变造成的。     

猪肾溶菌酶的纯化和部分性质研究

猪肾溶菌酶提取液经过正丁醇脱脂,（NH4）2SO4沉淀,得到粗酶液,再经过CM—Sepharose FF阳离子层析柱和Sephacryl S-100凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶．该酶的比活力为162．45,提纯倍数为113．6,回收率为16．89％．该酶对溶壁微球菌作用的最适温度为45℃,最适作用的pH为6．0,在50℃以下和pH4．5～9．0之间都有较好的稳定性．酶分子量约为15．0kd,其米氏常数为0．0135g／mL．     

溶菌酶溶液的膜结晶工艺及影响因素

为研究溶菌酶溶液膜结晶的工艺过程和影响结晶效果的因素,采用超滤法从溶菌酶溶液中脱除溶剂,使溶液达到过饱和,在结晶助剂的作用下,制得了溶菌酶晶体.使用光学显微镜、扫描电镜和红外光谱对晶体进行了检测和分析.结果表明:采用截留分子质量为5 ku的疏水性聚醚砜超滤膜,以切向流方式进行超滤,当结晶助剂NaC l含量为5%、溶液流速为1000μm/s时,晶体粒度最大,达0.2mm,且晶体质量良好,符合X射线衍射分析的要求.