结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及活性

以结核分枝杆菌H₃₇Rv基因为模板, PCR反应扩增该菌株的异柠檬酸裂解酶基因（ICL）, 将其克隆入原核表达载体pET28b中, 并将pET28b I
CL转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达. 结果表明, ICL蛋白的最佳诱导表达条件为: 温度20 ℃, IPTG终浓度为025 mmol/L, 诱导表达4 h, 在此条件下 ICL实现了高效表达, 以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化ICL蛋白, 纯化程度较高. 酶学性质鉴定表明, 实验获得了具有生物学活性的重组蛋白, 重组ICL的比活力为24 μmol/(mg·min).     

细胞膜色谱初步测定2-取代噻唑烷-4-羧酸活性

测定合成的2-取代噻唑烷-4-甲酸的初步生理活性.将由动物心脏制备的心肌细胞膜与硅胶结合制备成心肌细胞膜硅胶混悬液,湿法填充色谱柱(50 mm×2 mm I.D.)得到细胞膜色谱固定相,同时将硅胶填充至同样色谱柱得到阴性对照硅胶固定相.以卡托普利为阳性对照药物,磷酸盐缓冲液(pH 7.4)为流动相,在37℃,流速0.5 mL/min,不同波长下检测.结果显示2-(4-羟基苯基)-噻唑烷-4-甲酸(HT)、2-丙基-噻唑烷-4-甲酸(PT)、2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-噻唑烷-4-甲酸(HMT)及卡托普利在细胞膜色谱柱上均有吸附,而在硅胶柱上无特异性吸附.表明化合物能与细胞膜产生特异性结合,初步判断HT,PT,HMT具有生理活性.细胞膜色谱用于定性测定化合物活性简便、快捷、准确.     

L-噻唑烷-4-甲酸的合成及降压活性测定

为寻找新型降压化合物,由L-半胱氨酸盐酸盐及甲醛合成L-噻唑烷-4-甲酸,收率为84.4%,其结构经IR,1H-NMR和元素分析确证。采用经典的二肾一夹法复制肾血管性高血压大鼠(RHR)模型,以卡托普利为对照,通过直接测血压法测定给药后血压变化。初步药理实验结果表明:目标化合物降压作用极显著P<0.01,且表现出作用效果呈剂量依赖性增长。该化合物具有进一步的研究意义。     

4-取代苯基-7-氯-1,5-苯并硫氮杂■-2-甲酸酯类化合物的合成及抑菌活性

合成了3个系列的新型1,5-苯并硫氮杂■类化合物:2,3-二氢-4-取代苯基-7-氯-1,5-苯并硫氮杂■-2-甲酸酯(Ⅳa～e),2,3-二氢-4-取代苯基-7-氯-1,5-苯并硫氮杂■-2-甲酸钾(Ⅴa～e),2,3,4,5-四氢-4-取代苯基-7-氯-1,5-苯并硫氮杂■-2-甲酸酯(Ⅵa～e).抑菌活性测试表明,大部分Ⅳa～e,Ⅴa～e对真菌白色念珠菌和细菌金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌具有良好的抑制作用;Ⅵa～e对白色念珠菌具有良好的抑制作用.其中,Ⅳa,Ⅳe,Ⅴe,Ⅵd在各个质量浓度时均表现出对白色念珠菌的高度抑制作用;Ⅴa～d在200μg/disc时表现出对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌的高度抑制作用.初步抑菌构效关系的研究表明■双键是抑菌活性的关键官能团.     

2-甲基-4′-甲氧基-7-(2-(1-(2-甲基苯并咪唑基))乙氧基)异黄酮的合成及抗氧化活性研究

以对甲氧基苯乙酸和间苯二酚为原料,经5步反应合成了一种新的苯并咪唑类异黄酮衍生物--2-甲基-4′-甲氧基-7-(2-(1-(2-甲基苯并咪唑基))乙氧基)异黄酮.其结构经过IR,1H NMR,13C NMR,元素分析确证.番红花红T-Mn2+-H2O2体系对目标化合物的抗氧化活性研究表明,目标化合物具有较强的清除羟基自由基能力.     

大豆GmCBL7-2生物信息学及非生物胁迫表达分析

钙调磷酸酶B类似蛋白（CBL）作为植物钙离子信号感受器,在植物非生物胁迫和信号转导中发挥重要作用。对大豆Gm CBL7-2基因进行生物信息学分析及非生物胁迫下表达量的检测。Gm CBL7-2基因开放阅读框全长639 bp,编码一个含212个氨基酸的蛋白质,相对分子量24.4 kD,等电点4.56,属于亲水性蛋白。预测结果显示,Gm CBL7-2蛋白主要定位于细胞质中,含有13个磷酸化位点。Gm CBL7-2蛋白质3D结构模型中存在两个Ca2+结合位点。Gm CBL7-2蛋白与拟南芥At CBL7蛋白亲缘关系最近。表达量检测结果显示,Gm CBL7-2在大豆幼苗中可以响应干旱、高盐及低温胁迫,且对干旱胁迫的响应更加显著。     

自然水中SO2-4的测定

利用Ba2 作沉淀剂与SO2-4反应,形成硫酸钡晶状沉淀的反应基础.本文讨论了各种反应条件,确定了测定方法的精密度,对AAS-FAAS和ICP-AES的对比分析结果,制定了间接测定天然水中SO2-4的两种方法,获得满意结果.     

假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的酶解工艺优化及产物分析

为探索假交替单胞菌κ-卡拉胶酶的酶解工艺,以κ-卡拉胶为底物,还原糖生成量为评价指标,对酶解工艺进行优化。采用3,5-二硝基水杨酸法和苯酚 硫酸法分别测定还原糖和总糖含量,计算酶解产物的平均聚合度,并利用质谱鉴定酶解产物。结果显示,假交替单胞菌κ-卡拉胶酶降解κ-卡拉胶的优化工艺条件为:加酶量为0.35 U（反应体系5 mL）,反应温度为40 ℃,反应pH=8.0,κ-卡拉胶底物质量浓度为9 g/L。在此条件下,酶解反应240 min后产生的还原糖质量浓度为1.531 g/L,酶解产物的平均聚合度为2。该κ-卡拉胶酶酶解反应的Km=2.07 g/L,Vmax=7.25 U/mg。质谱分析显示,假交替单胞菌κ-卡拉胶酶降解κ-卡拉胶的产物为κ-卡拉胶二糖和κ-卡拉胶四糖。     

一类邻甲氧基苯乙酸类席夫碱的合成及抑菌活性研究

以邻甲氧基苯乙酸为起始原料制备酰肼,再与取代苯甲醛在酸性条件下制得8个邻甲氧基苯乙酰席夫碱(2a-2h),产物经红外﹑核磁﹑质谱﹑元素分析确认结构.抑菌性能研究结果表明2b,2h对所选大肠杆菌﹑金黄色葡萄球菌﹑枯草杆菌﹑绿脓杆菌均有一定抑制作用,其中化合物2b对枯草杆菌﹑金黄色葡萄球菌表现出极好的抑菌性能.     

巴伦葛兹类芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的表达、酶学性质及结构解析

从克隆巴伦葛兹类芽孢杆菌CAU904中克隆得到一个β-葡萄糖苷酶基因,并在大肠杆菌中进行了异源表达,研究了重组酶的酶学性质,进一步解析了该酶的晶体结构。研究结果表明,该酶的最适温度和pH值分别为50℃和7.5。该酶底物特异性较广,能够水解β-1,2、β-1,3、β-1,4、β-1,6-糖苷键等在内的多种糖苷键,对昆布多糖、大麦β-葡聚糖和地衣多糖等聚糖均有水解作用。晶体结构信息表明,该酶呈现糖苷水解酶(GH)3家族典型的多结构域结构,其催化口袋由类似(α/β)₅的三明治结构域和(β/α)₈折叠桶结构域中间的loop构成,其中芳香氨基酸残基Trp748侧链提供-1位结合位点,Trp749侧链提供+1位结合位点,Trp131侧链提供+2位结合位点,这些芳香氨基酸残基形成了一个小的口袋和疏水性环境,不利于转糖苷反应。     

人胰蛋白酶原-2在大肠杆菌中的表达、纯化与活性测定

胰蛋白酶原-2是急性胰腺炎相关的敏感而特异的标志物,并且与多种肿瘤转移的过程密切相关．对胰蛋白酶原-2基因5’端4个氨基酸的密码子碱基进行简并突变,并在其3’端连接6个组氨酸编码序列构建含重组质粒pBVTg2的大肠杆菌工程菌-pBvTg2／DH5α．重组大肠杆菌经温度诱导后获得了高效表达,重组蛋白占总菌体蛋白的20％,并以包涵体形式存在．包涵体经尿素缓冲液裂解后,通过Ni-NTA亲和树脂一步分离纯化．纯化蛋白经SDS-PAGE分析及利用anti—histidine mAb进行Western blotting分析,以及蛋白N末端测序分析,结果表明与目的蛋白特征相符合．纯化的重组人胰蛋白酶原-2经复性后能与天然人胰蛋白酶原-2的单抗antihTrypsinogen2 mAb特异结合,复性后的蛋白在肠激酶作用后测得具有74BAEEU／mg的胰蛋白酶比活力,为进行胰蛋白酶原-2单克隆抗体的制备及其检测和应用奠定了基础．     

2-取代巯基-5-邻羟基苯基-1,3,4-噁二唑类化合物的合成及抑菌活性

由于"邻羟基苯基"和"杂环"分子片断具有良好的抗菌活性,我们将其合理组合,设计合成了5个新型2-取代硫基-5-邻羟基苯基-1,3,4-噁二唑类化合物(1-5).以邻羟基苯乙酸为原料,经过肼解,在碱性条件下与二硫化碳反应,得到噁二唑中间产物,最后在碱性条件下与(取代)卤代苯乙酮、卤代苯乙酰胺发生烷基化反应生成目标化合物.目标化合物的结构经1H-NMR、IR以及元素分析等表征确认.抑菌活性测试表明,质量浓度为0.01%时,对大肠杆菌的抑菌率高达91%以上,具有强抑菌活性;对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的抑菌率高达83%以上,具有较强的抑菌活性;这表明目标化合物对不同菌株具有广谱抑菌活性,它是一类极具潜力的抗真菌、抗细菌化合物.构效分析表明,苯乙酰胺环上引入不同取代基的类型对化合物抑菌活性有重要影响,引入Cl、Br等卤原子,能显著增强化合物的抑菌活性.     

Na2WO4溶液离子交换中WO2-4和SO2-4分离系数的测定

在钨冶炼的离子交换过程中,Na2WO4溶液中杂质阴离子的存在对钨的交换容量和产品APT的质量都有较大的影响.作者通过试验,测定了含有SO2-4的Na2WO4溶液和201×7强碱性阴离子交换树脂进行离子交换时WO2-4和SO2-4的分离系数,绘制了该体系在25 ℃时的离子交换平衡等温线.研究结果表明在WO2-4溶液中,当WO3浓度为0.0862 mol/L,SO2-4浓度为0.02～0.4 mol/L时,分离系数β(WO2-4/SO2-4)为2.4731～3.7804.并且当溶液中WO2-4浓度不变,而改变SO2-4浓度时,随着溶液总浓度的增大,分离系数β(WO2-4/SO2-4)逐步增大.表明在离子交换过程中,随着溶液中SO2-4摩尔分数的增大,树脂对SO2-4的吸附能力减小.     

粟酒裂殖酵母质膜ATP酶的制备及活性测定

用小玻璃珠破碎处于对数生长中期的粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｐｏｍｂｅ）细胞,将所得到的匀浆液经差速离心,酸处理,不连续蔗糖密度梯度离心,得到质膜ＡＴＰ酶,并对其进行鉴定及活性测定．发现所制备的质膜ＡＴＰ酶对ＮａＮ３不敏感,而对Ｎａ３ＶＯ４具有高度的敏感性,半抑制浓度为１２μｍｏｌ／Ｌ,表明所制备的质膜ＡＴＰ酶较纯,不混杂线粒体ＡＴＰ酶．该酶的最适ｐＨ为６．３,对Ｍｇ２＋有很强的依赖性,对ＡＴＰ有较强的亲和性,Ｋｍ值为１．３ｍｍｏｌ／Ｌ．     

两种3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶的制备及活性测定

3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶[EC.1.4.17](简称PDE),在生物体内有重要的生化功能.它可水解环核苷酸为5'-核苷酸,并与核苷酸环化酶共同维持细胞内环核苷酸水平.根据性质的不同PDE分为多种形式,但总的可分为两大类:依赖于Ca2+的PDE,可被钙调蛋白激活;不依赖于Ca2+的PDE,不被钙调蛋白激活.开展对环核苷酸、钙调蛋白及药物杀虫机理的研究都需要分离制备这两类不同形式的PDE.本实验以新鲜的猪心为材料制备分离出这两种PDE,并进行了活性分析.     

3-酰基-4-羟基喹啉-2-酮类化合物的合成及除草活性研究

为了发现具有良好除草活性的新型先导化合物,在前期工作的基础上,利用电子等排原理,设计合成了一系列3-酰基-4-羟基喹啉-2-酮衍生物.其结构经1 HNMR,13 CNMR及高分辨质谱确证.利用平皿小杯法初步评价了其对双子叶植物油菜和单子叶植物稗草的抑制活性,结果显示部分化合物对油菜表现出良好的抑制活性.其中,化合物Ⅱ-13在10μg/mL浓度下对油菜的抑制率达到84.1%.温室盆栽活性结果显示,化合物Ⅱ-13在100g/hm~2施药量情况下,对油菜和苋菜的茎叶处理呈现出很好的防除效果,抑制率达到90%以上.研究结果表明,化合物Ⅱ-13可以作为开发新型选择性除草剂的先导化合物继续优化.     

水稻蛋白质激酶CK2催化亚基的表达和活性测定

用RT-PCR的方法分离到了水稻蛋白质激酶CK2催化亚基（OsCK2α）的cDNA,通过大肠杆菌高效表达系统表达了OsCK2α,并利用亲合层析的方法纯化了重组蛋白质GST—OsCK2α．得到的大肠杆菌重组蛋白质GST—OsCK2α能够体外磷酸化CK2的常用底物酪蛋白,并且该磷酸化反应能够被CK2的特异性抑制剂肝素所抑制,研究表明重组CK2α具有典型的蛋白质激酶CK2的活性,为研究水稻CK2及其底物的功能奠定了基础．     

两类4-正则循环图的邻点可区别全色数

设G是阶数不小于2的连通图,则其邻点可区别全染色是指G中任意两个相邻的顶点有不同的颜色和色集合,且任意相邻的两条边及一个顶点与其关联边的颜色也不相同．给出了两类邻接矩阵的第一行分别为（0,1,0,1,0,…,0）和（0,1,0,0,1,0,…,0）的循环图的邻点可区别金色数．     

邻单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfdC)在拟南芥中表达的初步研究

将从一株邻单胞菌中克隆到的一个新的邻苯二酚1，2－双加氧酶基因（tfd C)的起始密码子由GTG突变成ATG，并克隆到农杆菌双元载体pPZPY122中，利用农杆菌介导转化模式植物拟南芥，获得了转化植株，经过PCR，PCR－Southern和Southern dot blot方法检测证实，ftd C基因已经整合到拟南芥基因组中，邻苯二酚1，2－双加氧酶酶活性检测表明，转基因植株具有一定的酶活性，而未转化的植株则不具有酶活性。