SPF裸鼠在简易裸鼠饲育室培育的探讨

利用旧动物室改造成具有恒温、恒湿、洁净的饲育室,配合无菌操作技术,应用层流架饲养从上海肿瘤所引进的SPF裸鼠,经过四年对动物育种,饲养和无菌操作技术进行探讨。我们成功地培育了300只SPF裸鼠用于人胃高分化腺癌7911侈植瘤、人胃低分化腺癌MGC80-3裸鼠肝转移、人肝癌组织裸鼠移植瘤、人肝癌细胞株BEL-7102移植瘤、3.4苯丙吡诱发裸鼠皮肤癌等模型。在动物育种方面我们采用BALB/c非裸近交产生基因稳定核心群,BALB/c裸鼠与BALB/c核心群回交以保持BALB/c裸鼠基因的稳定性和一致,利用回交产生的雌性半裸鼠和维性全裸鼠生产裸鼠,淘汰半裸鼠。以此循环能准确断定仔鼠基因型,使留种,配种及繁殖方便准确。此繁殖方法生产断乳的仔鼠比杂交法断乳仔鼠平均体重增加2g,半裸雌鼠受孕率达82％,28和60日龄课鼠与同龄半裸或非裸鼠体重相差无几,已接近国内同行繁育裸鼠水平。在改造旧动物房繁殖裸鼠同时,我们严格采用无菌衣帽穿戴、消毒和无菌操作技术使层流架和房间每平皿菌落低于国外同类饲育室平均标准。     

净化室与层流架相结合饲养繁殖裸鼠经验

为创造一个净化环境饲养裸鼠,我们将旧动物房改造成11M~2和9M~2两间净化室,一间为裸鼠繁殖室,一间为裸鼠实验室。净化室空气经过初、中、高效三级过滤,由鼓风机送风,室内保持正压,净化室内放层流架饲养繁殖裸鼠。进入净化室的一切物品经过严格消毒后由传递窗传入,层层拆包进入层流架,工作人员洗澡后更换无菌服进入净化室。经过一年多的使用,取得了一定的效果。裸鼠繁殖平均产仔数6.8只,平均成活率80％,一年内进行了四次空气菌落检测,均达到100级净化标准。此外,还在实验室进行了裸鼠肿瘤实验,均取得满意的效果。通过一年的裸鼠繁殖,实验证明在外环境条件比较差的情况下,利用旧房屋改造建立裸鼠室是可行的。只要严格管理,合理操作,同样能取得满意的效果。     

小型裸鼠屏障设施与管理

总结了裸鼠饲养繁殖与裸鼠实验研究二部分的屏障设施及其管理经验,包括无菌隔离器、层流架、洁净间、过滤帽鼠盒、高压蒸气消毒器等设备的布局,使用方法与检测要求。实践表明,建立小型屏障系统加之必需的辅助设备,可以完成裸鼠的扩大生产,并进行高水平的实验研究。     

保证裸鼠饲养环境净化的有效措施

旧房改造的棵鼠饲养室，保证饲养环境净化和恒温，是我们四年来繁殖裸小鼠成功的主要经验。其主要措施是：加强工作人员责任心，严格无菌操作；严密的净化设施、净化室内放置层流架；层流架内放置带过滤帽的鼠盒；三保险净化措施；双制冷热空调器；科学的管理制度。室验表明，只要按以上措施施行，裸鼠的饲养环境可达到ＳＰＦ级，可保证裸鼠高质量的生产，并可进行高水平的实验研究。     

层流架内应用带空气过滤罩的鼠盒繁育Scid小鼠研究初报

采用带空气过滤罩的鼠盒在层流架内饲育Ｓｃｉｄ小鼠获得成功。平均窝产仔数４．８只，肥孕率６６．７％，离乳率较高可达９６．６％，其骨髓活化ＮＫ细胞用于异基因骨髓移植可促进骨髓植入和造血功能重建，预防移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ），并增强抗肿瘤效应（ＧＶＴ）。该法可以作为缺乏现代化馈养设施又急需Ｓｃｉｄ小鼠的单位进行中短期饲育。     

应用层流柜饲养裸鼠的体会

裸鼠是先天性胸腺缺陷动物 ,T细胞缺乏 ,是现今进行人癌异种移植的理想动物。然而由于裸鼠的饲养条件要求较高 ,使其应用受到了很多的限制。我们教研室经过几年的探索 ,在无菌实验室内使用层流柜 ,再加上比较严格的管理制度 ,成功地饲养裸鼠 18批次 ,5 6 0余只 ,都顺利地完成了实验。所以 ,在实验室条件下使用层流柜短期饲养裸鼠是可行的     

ICR／RMU—nu无胸腺裸鼠的培育

作者从一窝白色ＩＣＲ远交系小鼠群中发现突变裸鼠，采用回交一互交号法“ｎｕ”基因保留下来，随后用隔离器养的ＩＣＲ小鼠为代乳鼠，通过剖腹取胎净化该种群，微生物学检查其主要项目达到ＳＰＦ级标准，术后动物饲养于洁净层流架中，＾６０Ｃｏ灭菌饲料，酸化水、鼠盒、垫料均高压灭菌，以纯合雄鼠与杂合雌鼠１：１非近亲繁殖，扩大了种群，定名ＩＣＲ／ＰＭＵ－ｎｕ裸鼠。与此同时，对突变裸鼠进行了免疫生物学检查，剖检１０余只     

关于特殊笼器具性能主要技术指标检测的探讨

实验动物笼器具是实验动物科学发展及生命科学研究重要的基本条件,其质量将会直接影响动物实验的准确性,其中特殊笼器具是将经过高效过滤的空气送入器具内,以免实验动物受微生物的污染,如独立通风笼盒（IVC）、层流架、隔离器等,其质量将会直接影响微生物控制级别的动物实验与饲育。目前实验动物相关国家标准对此类设备各项技术指标的检测并无说明,笔者对该类产品按江苏省地方标准（简称地标）检测进行了初步的探讨。     

关于615B_6/PBI-beige纯合型裸鼠催产克雷伯氏菌慢性肠炎的研究

在SPF条件饲育的繁育群中,我们发现偶尔有少数6158_6/PBI-beige纯合型裸鼠慢性腹泻。经微生物分离、培养,自4只病鼠粪便中分离出4株占优势的催产克雷伯氏菌。根据Robert koch's原则,用此菌株分别人工感染6158_6/PBI-beige纯合型和杂合型裸鼠、BALB/c-nu纯合型和杂合型等不同免疫缺陷背景的裸鼠,结果仅6158_6/PBI-beige纯合型裸鼠发病,获得疾病模型。并再次自模型鼠粪便中分离到与原始致病菌株特性相同的催产克雷伯氏菌。因此确认催产克雷伯氏菌(Klebsiella oxyfoca)为6158_6/PBI-beige纯合型裸鼠慢性肠炎的条件致病菌。     

保持裸鼠稳产高产水平的经验

我们应用空气层流室成功地繁育裸鼠已有十年历史。本文介绍在裸鼠生产过程中严格执行科学管理,控制微生物污染,选配营养合哩的全价颗粒饲料以及加强选种、育种,使裸鼠的生产指数保持在较高的稳定水平等多方面的经验体会。1990年开始,采用nu/nu♀×nu/nu♂的繁育形式,再用同步繁育的有毛鼠代乳的方法,使裸鼠的产量有了较大提高。1991年全年共提供裸鼠4300余只,月生产指数平均在4.0,最高达5.3,其中一只BALB/c-nu/nu♀小鼠受孕8胎产仔83只,经代乳全部成活。     

荷人鼻咽癌裸鼠血浆和鼻咽癌细胞株培养上清液MDA水平的动态变化

利用NC裸鼠复制人鼻咽癌(NPC)动物模型和低分化鼻咽癌细胞株(CNE_2)培养,检测不同时期荷人NPC裸鼠血浆MDA,以探讨荷瘤鼠血中自由基的变化规律和肿瘤的关系,并以CNE_(-2)细胞株为线索,检测CNE_(-2)细胞株培养上清液MDA,间接追踪荷人NPC裸鼠血中自由基变化的来源。结果表明荷人NPC裸鼠潜伏期血浆MDA已明显高于正常裸鼠(P<0.01),且荷人NPC裸鼠血浆中MDA从早期到中期逐渐升高,并达高峰,中期至晚期MDA渐下降,但仍高于正常水平(P<0.01); CNE_(-2)细胞株培养上清液中MDA明显高于人胚肺细胞株培养上清液所含MDA(P<0.01),并随着培养时间延长而增多。提示肿瘤发展与自由基水平的增高有关,荷人NPC裸鼠血浆MDA增高可能来源于肿瘤细胞自由基产生过多或清除不足。     

独立通气笼盒(IVC)的工作原理及国内外研究进展

独立通气笼盒(Individually ventilated cages,IVC)系统替代传统屏障净化系统用于实验动物与动物实验始于上世纪70年代末,90年代大量推广使用[1]。在国内,该系统是近几年才被研制、生产与推广应用,产品也是良莠不齐,与国外发达国家的产品质量相比还有很大差距。该系统采用先进的微型隔离技术,通过向动物饲养笼盒内部输送经初、中、高效过滤的空气,以获得洁净度为10 000~100级的生活环境。与传统的SPF屏障系统、层流架(LAFR)系统相比,IVC系统具有笼盒内环境优越及安全性能高、对饲育及实验人员的健康有良好的保护作用[2~6]、占地面积小…     

裸鼠异种移植瘤激活c型RNA病毒的机理探讨

裸鼠因胸腺先天发育不良、T细胞免疫功能缺损而成为移植异种肿瘤的理想动物模型。然而,裸鼠c型RNA病毒有被移植瘤活化的可能,国外已发现了几十例。从1981年起,我们对10余株长期传代的裸鼠移植瘤模型进行了比较系统的电镜检测,先后在大鼠BERH-2肝癌移植瘤(RL-1)、人肺鳞癌移植瘤(LSX-83)以及人肝癌移植瘤(LTNM_4)三株裸鼠模型中检出c型RNA病毒,进而对它们的活化,侵染机理进行了探讨,现报告如下。一般认为,裸鼠内源性c型RNA病毒在活化初期仅在包围移植瘤的基质中显现,而后2—3代,才侵染进入移植瘤的结缔组织、瘤细胞的间隙及其胞浆内。我们在RL-1中所见基本与之相符,但c型病毒的侵染范围似更大——瘤细胞的核周隙萌生芽孢以及毛细血管腔出现病毒颗粒,以往未见有报道。LTNM_4株的瘤细胞质膜上病毒芽孢多见,但胞浆内却查无病毒颗粒;LSX-83株从40代起,连续l5代c型病毒仅局限于瘤细胞的间隙。上述种种,提示裸鼠c型RNA病毒活化侵染过程的复杂性。 c型RNA病毒对移植瘤的侵染导致移植瘤生物学特性的改变。RL-1被侵染后,瘤细胞的间隙和内质网小池出现异常致密的有形物质;移植瘤生长缓慢;瘤组织回种大鼠皮下不能成活,而传代早期能生长。对LSX-83的侵染影响表现为移植瘤呈分化升级的趋向;瘤细胞核仁出现典型的核仁微分离。LTNM_4株的主要改变是暗细胞消失;线粒体内嵴有较多囊泡。长期传代的裸鼠异种移植瘤,其形态学特征会出现某些变化,但较c型病毒的侵染影响则小得多。内源性,c型病毒的基因组通常整合于宿主的染色体中,其潘化、侵染的机理同前尚不太清楚。订人认为,功能性肿瘤产生的蛋白质类活性物质可能对c型病毒有较强的诱导作用。RL-1与LTNM。株均乃高AFP含量的移植肝癌,c型病毒的激活可能与AFP有夫。至于淆化的e型病毒较长时期滞留在LSX-83瘤细咆的间隙,推测LSX-83瘤细胞表面可能缺乏c型病毒受体抑或具有某种抵御机制。三株裸鼠异种侈植瘤中查见c型病毒均在连续传代40代后。对于长期传代裸鼠肿瘤模型的病毒检测是鉴定模型质量的必要手段。     

鼻咽癌转移灶细胞裸鼠体内演进中转移及增殖动力学研究

将鼻咽癌单克隆细胞株（ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５）移植于裸鼠皮下，待裸鼠发生转移时，取其淋巴结和（或）肺转移灶癌细胞再次移植裸鼠皮下传代，如此用转移灶癌细胞重复传２－４代后，观察各代裸鼠的转移率和转移途径；同时观察各代癌细胞生长曲线、增殖指数及移植瘤瘤重和体积倍增时间的变化。结果显示：随着鼻咽癌转移灶癌细胞裸鼠体内的演进，各代裸鼠的转移率增高，且转移途径更为单一；各代癌细胞的增殖能力不断增强。提示：鼻咽癌细胞在裸鼠体内演进中转移能力和增殖能力均不断增强，且二者关系密切。     

裸鼠自发性淋巴道转移肿瘤模型的建立

在裸鼠发现一例自发性皮下肿瘤,伴广泛淋巴结转移,经10代以上体内传代,在裸鼠体内长瘤及转移的特性稳定,原位长瘤率大于95％,潜伏期5—12天,转移率100％,平均荷瘤生存时间22天。大体解剖见腹股沟、腋下、颌下、腹腔等处有不同程度淋巴结转移。光镜和电镜的形态学检查见肿瘤细胞形态圆、较小、核大胞浆少,染色质呈块状、围裙状,分裂相多见,符合小细胞分化程度较差的恶性肿瘤,转移灶和原位灶形态学上相似。该可稳定传代、广泛淋巴道转移的小鼠肿瘤定名为LMLM瘤系。     

无菌大鼠培育的技术创新及其繁育探讨

对清洁级SD大鼠进行剖腹取胎净化,经人工饲育建立无菌SD大鼠群,以满足科研单位对无菌大鼠的需求。在手术隔离器中剥离子宫,取35只仔鼠传入饲育隔离器,静置2 h后存活20只;用自行研制的灌胃注射器,和市售配方改良奶粉,对剖腹取胎仔鼠进行人工哺乳。每24 h人工哺乳5~6次。哺乳20只,离乳13只。粪便、垫料、棉拭子经无菌检查,均无细菌生长。通过优化人工乳配方,创新无菌鼠培育技术,成功建立无菌大鼠模型,并传代保种,解决了科学研究在国内买不到无菌大鼠的难题。     

人食管癌裸鼠移植瘤株建立及其应用的研究

用人食管癌组织直接接种于裸鼠,建立两株裸鼠移植瘤株,分别命名为人食管鳞状细胞癌裸鼠移植瘤(HEC_2)和人食管腺鳞癌裸鼠移植瘤(HEC_6),两瘤株的鼠间传代达40余代,历时3年,生长稳定,潜伏期短,移值成功率达100％。并应用于抗癌药物和放射增敏的实验研究,结果表明:平阳霉素对HEC_6有明显的抑制作用,重复两次,抑制率分别为56.5％和8.87％;血卟啉衍生物(HPD)对HEC_2 X线分次照射有明显增敏作用。     

幂律流体在定向井偏心环空内流动规律的研究

本文对定向井环室内幂律流体流动规律进行了理论分析和实验研究,建立了定向井环空流动物理模型,导出了幂律流体轴向定常层流流动的流场分布、流量和压耗模式,并对其变化规律分别作了详细分析。设计安装了定向井环空模拟实验架,对幂律流体在模拟环室内轴向层流流场和流动压耗进行了测量,并对流态变化规律、紊流压耗及内管旋转对幂律流体流动的影响作了探索性的试验研究。     

鼻咽癌克隆株裸鼠体内传代过程中CD44粘附分子的表达

本实验用免疫组化的方法检测了人低分化鼻咽癌单克隆株（ＣＮＥ－２Ｚ－Ｈ５）体内传代过程中裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞中ＣＤ４４粘附分子的表达及其与转移的关系。结果表明；不同代之间裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞中ＣＤ４４粘附分子的表达有差异。其中第四代裸鼠移植瘤和回复培养的肿瘤细胞ＣＤ４４粘附分子的表达明显高于原代移植瘤及原代细胞（Ｐ＜０．０５）。裸鼠移植瘤中ＣＤ４４粘附分子的表达与肿瘤转移率成正相关关系。结果提示：ＣＤ４４粘附分子的表达与鼻咽癌转移关系密切。     

黄芩苷下调CyclinB1基因表达对SMMC-7721裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:本研究通过对肝癌细胞株SMC-7721的裸鼠移植瘤模型使用不同剂量的黄芩苷处理,观察裸鼠移植瘤组织中Cyclin B1基因表达及裸鼠血清AFP蛋白含量的变化,初步探讨黄芩苷对肝癌的抑制作用,为中药黄芩的抗肿瘤应用提供理论基础.方法:使用传代后的人肝癌SMMC-7721细胞悬液建立裸鼠肝癌移植瘤模型,使用随机数字法分组.使用不同剂量的黄芩苷进行腹腔注射,2周后处死裸鼠解剖瘤体,使用免疫组化法测定肝癌组织中CyclinB1基因的表达水平、酶联免疫法测定各组裸鼠血清中AFP(甲胎蛋白)含量.结果:各黄芩苷组裸鼠的瘤荷显著低于对照组,黄芩苷组裸鼠抑制瘤肝癌组织中CyclinB1基因与对照组均有显著差异,并呈剂量负相关性(P0.01);黄芩苷组裸鼠血清AFP阳性例数显著小于对照组,具有统计学意义(P0.01).结论:黄芩苷对肝癌裸鼠移植瘤肝癌组织中CyclinB1基因有明显抑制作用,且其抑制强度与黄芩苷计量呈正相关关系;黄芩苷对肝癌裸鼠移植瘤外周血中AFP含量有明显抑制作用,其具体机制值得进一步研究.