重度子痫前期患者与正常足月妊娠妇女外周静脉血中可溶性HLA-G水平比较研究

为测定重度子痫前期患者与正常足月妊娠妇女外周静脉血浆中可溶性HLA-G的含量,探讨HLA-G在子痫前期发病中的意义,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定33例重度子痫前期患者及33例正常足月妊娠妇女外周静脉血中可溶性HLA-G水平.重度子痫前期组外周静脉血中可溶性HLA-G水平为24.04±16.01 U/mL,正常妊娠组为38.38±22.15 U/mL,两组比较,差异有统计学意义(P﹤0.05).说明重度子痫前期患者外周静脉血中可溶性HLA-G水平较正常足月孕妇明显降低,提示HLA-G水平的降低与子痫前期发病有关.     

自然流产胚胎绒毛组织中lrh-1基因表达的研究

采用实时荧光定量PCR(Q-RT-PCR)技术,对30例自然流产和30例正常妊娠者的胚胎绒毛组织进行肝受体同系物-1(lrh-1) mRNA检测,同时测定2组人员血清孕酮质量浓度.结果显示:自然流产胚胎绒毛组织中lrh-1 mRNA的表达水平为(0.001385±0.000335),与正常妊娠胚胎绒毛组织中lrh-1 mRNA表达(0.001497±0.000447)无明显差异(P>0.05);自然流产者平均血清孕酮质量浓度((7.17±2.02) ng·mL-1)明显低于正常妊娠者((27.75±1.67) ng·mL-1),二者具有显著性差异(P<0.05);两组lrh-1与孕酮质量浓度相关系数分别为0.37和0.34.推论lrh-1与人类血清孕酮合成无明显相关性,在自然流产中可能不是影响人类胚胎发育的主要因素.     

survivin(存活素)在早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达

目的:研究早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中survivin(存活素)的组织定位和表达,探讨survivin与妊娠滋养细胞疾病的关系。方法:采用免疫组化SP法检测14例正常早孕绒毛、14例葡萄胎、12例侵蚀性葡萄胎及12例绒癌滋养细胞中survivin的表达。结果:survivin在滋养细胞细胞核及细胞浆的表达强度PU值依下列顺序增加:正常早孕组、葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组及绒癌组,各组间的表达强度差异有统计学意义(P <0 0 5 )。结论:适度survivin是正确完成胚胎细胞有丝分裂和细胞增殖的必要条件,因survivin的过表达引起的细胞凋亡阻滞在妊娠滋养细胞疾病的发生发展过程中可能起重要作用     

广州地区早孕妇女HCMV感染及其垂直传播

用聚合酶链反应技术检测１１０例早孕妇女尿液及其胚胎绒毛的ＨＣＭＶＤＮＡ。结果孕母尿液与胚胎绒毛的ＨＣＭＶＤＮＡ阳性率分别为１５．５％和７．３％，宫内感染率为４１．２％，孕母尿液与胚胎绒毛的ＨＣＭＶ阳性数密切相关，提示孕母尿路排毒系全身性活动性感染；孕母尿液ＨＣＭＶ阳性与阴性者其胚胎绒毛ＨＣＭＶ阳性数具显著差异，表明孕母尿液阳性者较阴性者处于垂感染胚胎的高危状态，建立采用ＰＣＲ法普查早孕妇女尿液ＨＣ     

食管鳞癌患者血清可溶性HLA-G分子表达水平及其临床意义

研究可溶性人类白细胞抗原G分子(sHLA-G)在食管鳞癌患者血清中的水平及其临床意义.应用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测60例食管鳞癌患者及28例对照者血清中sHLA-G(sHLA-G1 和 HLA-G5)水平,免疫组化S-P法检测对应的食管鳞瘤患者癌组织及对照组正常食管组织中HLA-G的表达,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测组织中HLA-GmRNA及HLA-G5mRNA的表达情况.结果食管鳞癌患者血清sHLA-G平均水平(15.04 u/mL)较对照(6.81 u/mL)升高(P=0.006);血清sHLA-G水平与肿瘤患者临床病理特征无相关性;HLA-G在60例癌组织表达率为70%且与肿瘤的分化程度(P=0.033)及淋巴结转移相关(P=0.035),正常食管组织无HLA-G表达;HLA-GmRNA和HLA-G5mRNA在20例HLA-G表达阳性的食管鳞癌组织中的均有表达,正常食管组织无HLA-GmRNA和HLA-G5mRNA表达.说明食管鳞癌组织可异常表达HLA-G分子,联合检测血清sHLA-G水平及HLA-G分子可作为临床食管癌的诊断和判断预后的指标.     

HLA-G蛋白在不同孕期胎盘绒毛中的表达及意义

人类白细胞抗原-G(HLA-G)主要表达于胎盘组织中,在维持母胎界面的免疫耐受过程中发挥着关键作用。为研究HLA-G在正常胎盘形成过程中的表达模式,实验检测了妊娠不同阶段的胎盘绒毛组织中HLA-G蛋白的表达水平。实验结果显示HLA-G蛋白在孕6周与7周的绒毛中表达量最高,从孕8周开始,表达量逐渐下降,至足月时,表达量达到最低水平。由此推测HLA-G在妊娠早、中期与胎盘形成有关,在妊娠晚期可能参与妊娠维持。     

AMPK-α表达变化在糖尿病患者骨骼肌脂肪酸代谢和胰岛素抵抗中的作用

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPK-α)表达变化在糖尿病患者骨骼肌脂肪酸代谢和胰岛素抵抗中的作用.方法在骨科行髋关节和下肢手术的患者中选取Ⅱ型糖尿病病程≤5 a的患者20例为研究组,另选取行骨科手术的非糖尿病患者20例为对照组.抽取空腹静脉血检测血生化指标;骨科术中留取骨骼肌组织,测定骨骼肌TG、长链脂酰辅酶A(LCACo A)水平;RT-PCR法检测骨骼肌AMPK-α1,AMPK-α2 mRNA水平;Western blotting法检测骨骼肌AMPK-α1,AMPK-α2和磷酸化AMPK-α蛋白水平.结果研究组空腹血糖、糖化血红蛋白、胰岛素、TG、FFA水平均明显高于对照组,ISI明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);研究组骨骼肌TG,LCACo A含量均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).研究组和对照组AMPK-α1 mRNA拷贝数之间差异无统计学意义(P0.05);研究组AMPK-α1 mRNA拷贝数明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).研究组和对照组AMPK-α1蛋白表达量之间差异无统计学意义(P0.05);研究组AMPK-α2和磷酸化AMPK-α蛋白水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).结论Ⅱ型糖尿病患者易发生脂肪酸代谢异常和胰岛素抵抗,AMPK-α2表达和AMPK-α活性改变在骨骼肌脂质堆积和胰岛素抵抗中发挥关键作用.     

HO-1在慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者鼻息肉组织中的表达及调节机制研究

目的探讨血红素氧合酶1(HO-1)在慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者鼻息肉组织中的表达及调节机制.方法 50例慢性鼻-鼻窦伴鼻息肉患者为鼻息肉组织组,30例单纯鼻中隔偏曲患者的钩突黏膜组织为对照组.采用实时荧光定量RT-PCR、免疫组化、Western blot检测鼻息肉和钩突黏膜组织中HO-1表达情况.另取钩突黏膜组织体外培养,检测不同细胞因子(IL-17A,TGF-β1)和地塞米松(DEX)刺激鼻黏膜组织中HO-1 mRNA的调节作用.结果HO-1 mRNA在鼻息肉组织中表达水平明显高于钩突黏膜组织,差异具有统计学意义(P0.05).鼻息肉组织中HO-1阳性细胞多分布于黏膜下腺体、上皮细胞、炎性细胞;HO-1阳性细胞数明显多于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).鼻息肉组织中HO-1蛋白表达水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).IL-17A可明显提升HO-1 mRNA表达水平;TGF-β1,DEX可明显降低HO-1 mRNA表达水平;且IL-17A,TGF-β1,DEX刺激具有浓度依赖性.DEX与IL-17A联合刺激组和DEX与TGF-β1联合刺激组的HO-1 mRNA表达量均明显低于IL-17A单独刺激组,差异具有统计学意义(P0.05).结论 HO-1作为拮抗氧化剂在鼻息肉组织氧化应激过程中被反馈性诱导上调,而糖皮质激素可抑制其表达上调.     

COPD患者肺组织中活化转录因子对γ-谷氨酰半胱氨酸合酶的影响

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺组织中活化转录因子(Klf2)对γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)的影响及作用机制.方法收集行肺癌根治术30例患者的无癌细胞浸润外周肺组织标本,根据是否伴COPD分为COPD组和对照组,采用原位杂交和免疫组化检测两组肺组织标本中Klf2,γ-GCS mRNA和蛋白表达情况,并分析其与吸烟指数和肺功能的相关性.使用终浓度为10%的烟草烟雾提取物体外诱导人支气管上皮细胞氧化应激模型,Elisa法检测其中谷胱甘肽含量;使用Klf2特异性抑制剂anti-92a转染支气管上皮细胞,RTPCR和Western blot检测各组细胞中Klf2,γ-GCS mRNA和蛋白表达变化.结果 COPD组患者肺组织中Klf2,γ-GCS mRNA和蛋白的相对表达量均明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).相关性分析显示:Klf2mRNA和蛋白表达与γ-GCS呈正相关;Klf2,γ-GCS mRNA和蛋白表达水平均与吸烟指数、FEV1%、FEV1/FVC呈正相关.模型组支气管上皮细胞中谷胱甘肽含量明显高于空白对照组,差异具有显著统计学意义(P0.01);支气管上皮细胞中Klf2,γ-GCS mRNA和蛋白相对表达量模型组明显高于空白对照组;NC+模型组明显高于NC组;Klf2抑制剂组明显低于空白对照组、NC组;Klf2抑制剂+模型组明显低于Klf2抑制剂组、NC组、模型组,上述各组间差异均具有统计学意义(P0.05).结论 Klf2通过调控COPD支气管上皮细胞中γ-GCS的表达而发挥抗氧化作用.     

转录抑制因子锌指蛋白57在前列腺癌组织中的表达

目的探讨转录抑制因子锌指蛋白57(ZFP57)在前列腺癌组织中的表达及意义.方法收集行前列腺穿刺活检的石蜡包埋组织标本,其中前列腺癌组织92例,癌旁组织24例,良性增生组织24例,正常前列腺组织24例.使用免疫组化法半定量检测组织标本中ZFP57的表达情况;Western blot定量检测ZFP57蛋白的相对表达量.收集前列腺癌患者TNM分期、Gleason评分、转移情况、前列腺癌特异性抗原(PSA)血清水平,分析与ZFP57表达的关系.结果免疫组化检测显示:前列腺癌组织中ZFP57阳性率明显低于本研究中其他组织标本,差异具有统计学意义(P0.01);ZFP57阳性率在正常前列腺组织、良性增生组织、癌旁组织间比较差异无统计学意义(P0.05).Western blot检测显示:前列腺癌组织中ZFP57的相对表达量明显低于本研究中其他组织标本,差异具有统计学意义(P0.01).不同TNM分期、Gleason评分、转移情况、PSA水平的前列腺癌患者ZFP57阳性率之间差异均具有统计学意义(P0.01),其中,TNM分期增加、Gleason评分增加、癌细胞转移、ρ(PSA)20 ng/m L的前列腺癌患者ZFP57阳性率明显降低.结论前列腺癌组织中ZFP57呈低表达,且与临床病理指标呈负相关;ZFP57可能作为抑癌基因参与前列腺癌的发生与发展.     

X连锁凋亡抑制蛋白对肺癌细胞生长和细胞周期的影响

为了研究靶向X连锁凋亡抑制蛋白的发夹状RNA对肺癌细胞中抗肿瘤作用,构建XIAP基因的shRNA表达载体,并设计阴性对照(psiRNA-Con)质粒,分别转染A549细胞;实时定量PCR和免疫印记法分别检测XIAP的mR-NA和蛋白的表达;四甲基偶氮唑盐试验(MTT)检测A549细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期分布。实验结果表明:转染psiRNA-XIAP组细胞XIAP mRNA和蛋白水平均低于正常对照组,生长慢于正常组(t=16.82和t=12.13,均P<0.01),G2/M期细胞所占比例增高(t=3.78,P<0.05),并出现亚G1峰。而阴性对照质粒psiRNA-Con未能下调XIAP的表达水平,对A549细胞增殖和细胞周期亦无明显影响。结论:针对XIAP的RNA干扰质粒特异性地抑制了其RNA和蛋白水平,使肺癌细胞A549生长减慢,诱导凋亡,并使其发生G2/M期阻滞,有望发展为新的抗肿瘤药物。     

甲状腺癌组织端粒酶激活与p16基因失活的关系

目的探讨甲状腺癌细胞增殖、分化与端粒酶激活及抑癌基因p16失活（缺失突变）之间可能存在的关系。方法应用TRAP、多重PCR、免疫组化法检测42例甲状腺癌与16例癌旁组织端粒酶活性、P16基因外显子2缺失、P16蛋白表达。结果甲状腺癌组端粒酶活性90．48％,高于癌旁组织（P〈0．01）;甲状腺癌p16基因外显子2纯合缺失率28．57％,相应癌旁组未检出（P〈0．01）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率40．48％,高于癌旁组（P〈0．05）;甲状腺癌P16蛋白表达缺失率高于p16基因外显子2缺失率。结论端粒酶激活与p16基因失活以及P16蛋白表达下调可能是甲状腺癌变过程中的重要分子事件,甲状腺癌中p16基因失活可能是端粒酶激活的一种途径。     

Differential expression analysis of matrix metalloproteinase 20 (MMP20) in human esophageal cancer

The aim of this study was to investigate the different expressions of MMP20 in the process of esophageal cancer. RT-PCR, immunohistochemistry and Western blot were employed to detect the mRNA expression and protein expression of MMP20. Compared with the corresponding normal esophagus tissues, results showed the common trend of the dramatical overexpression of MMP20 in the esophageal cancer tissues. The analysis of MMP20 expression in different clinical early stages of esophageal cancer by RT-PCR indicated that MMP20 was much more overexpressed in the esophageal cancer with invasion than in the early stages. This suggested that MMP20 might play an important role in the progression of esophageal cancer. It probably plays a critical role in tumor invasion.     

制动致福利受损大鼠部分行为学改变及其体内NF-κB的变化

目的 观察制动致福利受损SD大鼠部分行为学改变以及体内NF-κB的变化。方法 选取体质量约200 g的雄性SD大鼠,使用管状容器给予束缚应激刺激,并通过旷场实验和O迷宫观测大鼠在第0、1、3、7、10、14天的行为学表现。测定了相应时期的NF-κB p65 mRNA转录水平和蛋白表达量。结果 束缚第3天起,大鼠肝脏组织NF-κB p65 mRNA转录水平和蛋白表达均较束缚前显著增高 (P< 0.05),但此时尚未见行为学改变;束缚第7天起大鼠的活动兴趣与活动能力水平较束缚前显著下降 (P< 0.05),显示焦虑、恐惧状态。结论 制动致福利受损大鼠肝细胞内NF-κB mRNA及蛋白表达的变化早于行为学的改变。     

应用组织芯片技术分析驱动蛋白KIF18A在卵巢癌中的表达及其意义

采用组织芯片技术研究KIF18A蛋白与卵巢癌发生的关系,并探讨该蛋白分子治疗临床卵巢癌的潜在价值.对比100例卵巢癌病患的癌组织与正常组织芯片,KIF18A蛋白分子在正常卵巢组织、卵巢癌、转移淋巴结中皆有不同程度的表达.在卵巢癌组织中的表达明显高于正常组织(p≤0.05).卵巢浆液性乳头状腺癌的不同分期中,Ⅰ期与Ⅱ期相比,在Ⅱ期中KIF18A蛋白分子的表达明显上调(p≤0.05).同时,淋巴结转移性浆液性乳头状腺癌中的KIF18A蛋白表达量高于非转移性的浆液性乳头状腺癌(p≤0.05).这些结果表明,KIF18A蛋白分子的表达强度与卵巢癌的肿瘤临床分期以及淋巴结转移有关,可作为卵巢癌检测的新型标志物.     

p63在胃癌组织中的表达

目的:探讨抑癌基因p53蛋白家族成员p63蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达情况.方法:回顾性分析41例胃癌及37例癌旁组织,利用组织微阵列技术,构建88点组织阵列,并采用免疫组织化学技术S-P法检测该阵列中p63蛋白在胃癌及其癌旁组织中表达情况.结果:①p63蛋白定位于细胞核,呈弥漫分布的棕黄色颗粒;②胃癌组织中,p63蛋白表达于核大间变细胞中;p63蛋白在高分化型胃癌中阳性表达率为5.9%,在低分化型胃癌中的阳性表达率为41.7%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);③p63蛋白在胃癌癌旁组织中无表达,在胃癌中的阳性表达率为24.4%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:①p63蛋白的高表达可能参与了胃癌的发生;②p63与胃癌的分化程度有关,并可能参与了胃癌细胞的分化.