水溶性大分子修饰~(125)I-尿激酶在小白鼠体内的分布及代谢

本文用放射性同位素~(125)Ⅰ示踪方法对比研究了水溶性大分子修饰酶与天然酶在小白鼠体内的滞留率;通过对标记物在各脏器中的分布及代谢的研究,对修饰酶的性质及临床应用前景做出了判断。 实验结果表明;右旋糖酐及右旋糖酐磺酸酯修饰了的尿激酶明显地延长了它们在血液中的停留时间;尿激酶进入体内后,主要分布于肝及肾脏中,脾、肺及心脏中分布很少;修饰酶与天然酶在肝及肾中的变化很不一致,天然酶在其主要排泄器官肾中分布较高,而修饰酶在肝中的分布则略高于天然酶。     

高碘酸活化肝素修饰~(125)Ⅰ-尿激酶在小白鼠体内的分布与代谢

本文用~(125)Ⅰ示踪法对此研究了高碘酸活化肝素修饰尿激酶和天然尿激酶在小白鼠体内的分布与代谢。结果表明,与天然酶相比,修饰酶在其主要排泄器官(肾脏)中分布较低,在肝脏则相反。修饰酶不仅完全保留了天然酶的活性,而且明显地延长了在血液中的滞留时间。     

右旋糖酐对胰岛素共价修饰的研究

本文报导了用高碘酸活化右旋糖酐对胰岛素的化学修饰作用,对比研究了修饰胰岛素与天然胰岛素的某些性质,及其在小鼠体内的分布与代谢。实验结果表明,修饰胰岛素较天然胰岛素的降血糖活性明显提高,增强了热稳定性和抗蛋白水解酶降解能力,修饰胰岛素在其靶器官肝脏中分布显著提高,而在其排泄器官肾脏中的分布低于天然胰岛素,并且明显延长了在体内的作用时间。     

牛红细胞铜锌超氧物歧化酶的化学修饰与性质

用戎二醛交联法对牛红细胞Ｃｕ．Ｚｎ－ＳＯＤ进行化学修饰，得到了热稳定性高，耐酸碱笥优越，抗蛋白酶酶解能力强的修饰酶，该酚分子量约为８６０００，在经外区最大吸收值为２６９ｎｍ，它的荧光激发光谱和荧光发射光谱强度均大于天然酶。     

化学修饰弹性蛋白酶稳定性的研究

本文用高碘酸活化右旋糖酐对弹性蛋白酶进行共价修饰。结果表明,修饰酶不仅完全保留了天然酶的活性和抗胰蛋白酶水解能力,而且修饰酶在耐热性、耐酸性和抗胃蛋白酶水解能力上都明显地优于天然酶。本文还对修饰酶进行了某些光谱学特性的研究。     

用微机作修饰尿激酶在小鼠体内分布代谢的统计

药物研究经常要作药代动力学实验,实验所得的大量数据需进行统计学处理,这是一件繁重的工作。本文以高碘酸活化肝素修饰的尿激酶和天然尿激酶在小鼠血液、肝、肾中的分布代谢为例,设计了计算机程序,用IBM—PC微机对实验数据作统计处理,不仅提高了工作效率、节省了时间,而且保证了准确性。     

猪血超氧化物歧化酶的研究(Ⅱ)——右旋糖苷对猪血超氧化物歧化酶的共价修饰

用高碘酸钠活化右旋糖苷,对猪血超氧化物歧化酶进行共价修饰,修饰酶完全保留了天然酶的酶学特性和抗胰蛋白酶水解的能力,而且修饰酶的热稳定性明显提高。     

酶化学修饰的研究进展

化学修饰已成为改进酶理化性质和生物活性的有效方法 ,引起了人们高度的重视 .本文主要介绍酶化学修饰的目的、意义、方法 ,以及修饰剂的选择、种类 ,评述了酶化学修饰领域的主要进展、研究概况及其应用     

PEG修饰青霉素酰化酶及其在两水相生物转化体系中的分配

厅用对甲苯磺酰氯法,用聚乙二醇对青霉素酰化酶进行化学修饰,修饰酶的比活为未修饰酶的75％,稳定性比游离酶有了很大提高。酶在带修饰酶的聚乙二醇与葡聚糖组成的两水相体系中的分配系数为25。     

烟草叶片蔗糖酶的化学修饰

采用PMSF、NBS、IAc、BrAc、SUAN、TNBS、PCMB、DTT等8种化学修饰剂在一定的条件下选择性修饰蔗糖酶,研究烟草蔗糖酶分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系.结果表明:PMSF、NBS、PCMB等3种化学修饰剂能显著地抑制酶的活力,而BrAc、IAc、TNBS、SUAN、DTT等对酶的活力影响不大.说明对丝氨酸残基、色氨酸残基和巯基的化学修饰后对酶的活力影响很大,而酶分子中的组氨酸残基及赖氨酸残基不在酶的活性中心,修饰后对酶的活力没有直接影响.     

中性蛋白酶修饰条件的优化

以氰脲酰氯活化的单甲氧基聚乙二醇5000(mPEG 5000)对中性蛋白酶进行化学修饰,并研究其修饰条件对修饰率的影响.正交试验结果表明,mPEG 5000修饰中性蛋白酶的最佳条件为pH值7、修饰温度45℃、酶质量浓度1.8g/L、反应时间5.5h,此条件下修饰率可达到51.9%,为下一步研究修饰中性蛋白酶的酶学性质提供了理论依据.     

天然与修饰超氧化物歧化酶某些物化性质的比较

本文对天然与月桂酸修饰的超氧化物歧化酶的某些物化性质进行了比较，结果表明，修饰酶较天然酶的稳定性显著增加，且保留了天然酶的大部分活性，具有广泛的应用前景。     

僧帽牡蛎碱性磷酸酶功能基团的研究

采用化学修饰法研究僧帽牡蛎碱性磷酸酶活性功能基团性质.酶经0.4mmol·L-1PCMB修饰30min后活力仍然保持不变,提示巯基与酶的活力无关;用二巯基苏糖醇(DTT)对酶进行修饰,当DTT浓度达到2.5mmol·L-1时,酶活力丧失98%,表明硫 硫键与酶活力有密切的关系;以N 溴代琥珀酰亚胺(NBS)修饰酶的色氨酸残基,酶的修饰失活呈一级反应,当NBS浓度达到0.65mmol·L-1时,酶活力丧失100%,并辅以紫外吸收光谱的变化分析,表明色氨酸残基是酶催化活力所必需的;醋酸酐、马来酸酐、甲醛等氨基试剂对酶的修饰作用显示氨基是酶的必需基团.     

牛血清白蛋白对牛红细胞SOD的化学修饰

应用戊二醛交联法研究了牛血甭白蛋白对牛红细胞ＳＯＤ的化学修饰，修饰酶活力回收率为５１．２％，氨基修饰率为３３．１％，ＳＯＤ经牛血清白蛋白修饰后提高了耐热、耐酸碱稳定性，并保持良好贮藏稳定性。     

壳聚糖修饰L-天门冬酰胺酶对酶活及抗原的影响

采用水溶性壳聚糖对L－天门冬酶胺酶进行化学修饰，修饰后的酶活回收率高达705，修饰酶的比活为每毫克蛋白质121.79U，pH值为7.4，更接近于人体血浆pH值(7.2-7.4），对底物的亲和力有所提高，稳定性增加，抗原性仅为自然酶的1／3，增加了临床使用的安全性。     

福建部分海藻凝集素的检测

用天然和经酶修饰的绵羊、兔、鸡，以及人的Ａ型、Ｂ型、ＡＢ型和Ｏ型７种红细胞，对产于福建的１６种海藻（绿藻１种、红藻８种、褐藻７种）进行了凝集素的检测．实验结果表明，每种海藻提取液至少能凝集２种以上天然或经酶修饰的红细胞。在检测的１６种海藻中，褐藻门的铁钉菜、厚网藻和绿藻门的浒苔产生的阳性凝血结果最广泛，能凝集供试的７种天然或经酶修饰的红细胞．红藻门的粗枝软骨藻、褐藻门的扁铁钉、鼠尾藻的凝血能力最差，只能凝集２或３种天然或经酶修饰的红细胞。在７种红细胞中，绵羊血红细胞对海藻凝集素最敏感。各种类型的红细胞经酶（胰蛋白酶）修饰后，对凝集素的敏感性普遍增加（鸡红细胞对几种海藻例外）。     

硅酸乙酯在天然生漆膜表面的化学修饰

通过硅酸乙酯和生漆膜的化学反应,对天然生漆膜进行化学修饰.用红外光谱、扫描电子显微镜和热重法等,对该修饰膜进行测试表征.结果表明,漆膜易与硅酸乙酯发生化学反应并生成致密的漆酚硅聚合物修饰膜.与生漆膜相比,该修饰膜具有更优异的耐热性和耐酸碱腐蚀性能.     

分子模拟预测离子液体修饰南极假丝酵母脂肪酶B修饰位点

化学修饰是一种被广泛应用的酶分子改造手段,基于分子模拟技术在分子水平上合理指导脂肪酶的化学修饰亦是当前的研究热点,修饰位点的随机性是限制其进一步研究的因素之一。本研究采用分子动力学手段模拟了南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)在4种手性脯氨酸离子液体体系中的构象变化,分析了体系中酶蛋白不同修饰位点的溶剂可及性面积、氢键及盐桥的形成。结果表明,离子液体构型的不同会影响CALB的修饰位点,其中D型离子液体修饰位点是Lys124、Lys290和Lys308。L型离子液体修饰位点是Lys124、Lys136、Lys290和Lys308,模拟预测的结果与肽谱一致。本工作拓宽了分子模拟技术在酶分子改造中的应用,为进一步理性指导功能性离子液体修饰脂肪酶的高效改造奠定了基础。     

尿激酶B链的制备及性质研究

本文将巯基乙醇还原法与苯甲脒-Sepharose 4B亲和层析法相结合,于亲和柱上裂解了尿激酶蛋白的A、B链,制备出高纯度的尿激酶B链,活力回收达89.3％。样品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测为均一单带,测得分子量为32KD,比活为214×10~3iu/mg蛋白,活性的最适pH为8.0。在体外测活系统中,尿激酶B链有类似于尿激酶的性质。若以纤维蛋白溶酶原为底物,测得B链的Km值为尿激酶的3.2倍。由此推测,天然形成的尿激酶结构更有利于纤溶反应。     

菜青虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性必需基团的研究

从菜青虫表皮分离纯化N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase），获得电泳单一纯的酶制剂，通过化学修饰法研究该酶的活性必需基团．分别以碳化二亚胺（EDC）、N-溴代琥珀酰亚胺（NBS）、对-氯汞苯甲酸（pCMB）、二硫苏糖醇（DTT）、澳代乙酸（BrAc）和乙酰丙酮在特定条件下对该酶进行特异的化学修饰，结果表明酸性氨基酸的侧链羧基、半胱氨酸巯基、色氨酸的吲哚基、组氨酸的咪唑基、二硫键被修饰后，酶活性均显著下降，因此这些氨基酸残基是酶活性的必需基团，而精氨酸残基及赖氨酸ε-氨基被修饰后对酶活力没有影响，不是酶的必需基团．