枯草芽孢杆菌LL18-4产类细菌素的分离纯化及特性研究

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）LL18-4菌株分泌物中的类细菌素通过(NH4)2SO4盐析法粗提后,经过SephadexG-75、DEAE-Sephadex A 50和Sephacryl S-200HR分步柱层析,经SDS-PAGE电泳检测到单一蛋白质条带,分子量约为60KD. 该类细菌素在酸性条件下及80%饱和度的(NH4)2SO4溶液中具有较高的稳定性,可4℃放置3个月仍保持大部分活性;对有机溶剂也有一定的耐受性：Mg2+能提高蛋白的抑菌活性.     

荧光蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达

枯草芽孢杆菌是生物工业用的重要宿主体系。为实现荧光蛋白从分子水平定量追踪枯草芽孢杆菌培养过程的目的,构建了一系列整合型表达载体pX-GFPmut1和游离型表达载体pSW1-GFPmut1,pSW1-CFP,pSW1-YFP,研究了不同颜色荧光蛋白在枯草芽孢杆菌中整合型表达和游离型表达的差异。最适合的荧光蛋白表达体系是用游离型质粒pSW1-GFPmut1在枯草芽孢杆菌中表达绿色荧光蛋白GFPmut1。含pSW1-GFPmut1枯草芽孢杆菌通过木糖诱导表达GFPmut1后,细胞破碎后的荧光强度和细胞浓度呈线性关系。结果表明,利用枯草芽孢杆菌表达荧光蛋白可以实现利用荧光蛋白快速定量枯草芽孢杆菌培养过程。     

荧光蛋白在枯草芽孢杆菌中的表达

枯草芽孢杆菌是生物工业用的重要宿主体系。为实现荧光蛋白从分子水平定量追踪枯草芽孢杆菌培养过程的目的,构建了一系列整合型表达载体pX-GFPmut1和游离型表达载体pSW1-GFPmut1,pSW1-CFP,pSW1-YFP,研究了不同颜色荧光蛋白在枯草芽孢杆菌中整合型表达和游离型表达的差异。最适合的荧光蛋白表达体系是用游离型质粒pSW1-GFPmut1在枯草芽孢杆菌中表达绿色荧光蛋白GFPmut1。含pSW1-GFPmut1枯草芽孢杆菌通过木糖诱导表达GFPmut1后,细胞破碎后的荧光强度和细胞浓度呈线性关系。结果表明,利用枯草芽孢杆菌表达荧光蛋白可以实现利用荧光蛋白快速定量枯草芽孢杆菌培养过程。     

芽孢杆菌WF63脂肪酶分离纯化及酶学性质

芽孢杆菌WF63脂肪酶发酵上清液经硫酸铵沉淀、Sephaery1 S200柱层析、CMSephrose FF柱层析,得到纯化的脂肪酶,纯化倍数为9.45倍,活性回收率为4.27%.对该酶性质研究表明:该酶水解橄榄油的最适温度为50℃,最适pH为8.0,在60℃以下和pH4~10之间有很好的稳定性.K+,Mg2+对该脂肪酶的水解活性有促进作用,而Na+,Mn2+,Ca2+对脂肪酶则没有显著的促进作用,Fe2+对酶活的抑制作用不明显.浓度为0.1%时,Triton X-100对脂肪酶活力有明显促进作用;Brij 35,Tween-80对酶活力的影响不明显;离子型表面活性剂SDS则表现出抑制作用.     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因在枯草芽孢杆菌中的表达

根据NCBI上已公布的枯草芽孢杆菌BS168菌株的β-1,4-glucanase(eglS)基因以及苏云金芽孢杆菌的aiiA基因序列,设计引物并扩增得到eglS基因的启动子、信号肽序列和aiiA基因.构建重组表达载体Ps4-eaiiA,转化枯草芽孢杆菌BS168,得到枯草芽孢杆菌工程菌BS168/Ps4-eaiiA.该工程菌诱导发酵后经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:aiiA基因实现了在枯草芽孢杆菌中的表达.对胡萝卜软腐欧文氏菌进行马铃薯的抗病性实验,结果表明aiiA基因在枯草芽孢杆菌中表达的AiiA蛋白对胡萝卜欧文氏杆菌表现出一定的抗病性.     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)TH2菌株抗菌物质对植物病原菌的抑制作用

作者从福建各地不同作物根围和根际土壤中筛选出拮抗茄科青枯病一些菌株,其中有一芽孢杆菌的强拮抗菌株(TH2),研究认为该菌株不仅对茄科的青枯病病菌有抑制作用,而且对Xanthomonas camperctris.及Erwina carotovora的病原细菌和Peronospora parasitica的病原真菌都有抑制作用,抑菌谱广.田间小区试验证明TH2菌滤液可以防治姜瘟病、白菜软腐病、花椰菜黑腐病等.     

海洋枯草芽孢杆菌Bs-1产生多种抗真菌活性物质

从香港清水湾海域中分离到一株能产生抗酵母样真菌和革兰氏阳性菌抗生素的枯草芽孢杆菌菌株Bs—1。对Bs—1产生抗生素条件的研究表明，Bs—1在多种培养基中生长迅速，但只在PDB(马铃薯葡萄糖液体)中产生抗真菌活性物质；活性物质粗提液具有良好的耐热性和酸碱度，121℃加热15min及在pH2和pHl0处理24h仍有相当高的活性；对Bs—1产抗生素的营养条件和影响的理化因子进行了分析；最后用吸附、萃取、离子交换层析和RP-HPLC等技术对此菌的抗菌代谢产物进行纯化，结果发现Bs-1在PDB培养基中发酵时至少产生3种亲水性的抗真菌活性化合物，三在C18反相层析柱上的保留时间差别不大，对HPLC纯化后的其中一种化合物结构的初步分析表明，该化合物含有共轭双键但无任何氨基酸残基，与目前已知的枯草芽孢杆菌产生的抗生素都不相同，很可能是一种新的非肽类抗真菌化合物。     

椰果内生枯草芽孢杆菌YZ-21产β-甘露聚糖酶的纯化及酶学性质研究

[目的]分离纯化来源于内生枯草芽孢杆菌YZ-21的β-甘露聚糖酶,并研究其酶学性质.[方法]采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH_4)_2SO_4]双水相体系进行分离与纯化,在此基础研究它的酶学性质.[结果]比较3种纯化方法,最优方法为双水相萃取法,在双水相体系为16%(NH_4)_2SO_4、18%PEG2000、2%NaCl条件下,纯化倍数最高可以达到3.06,酶回收率达到99.26%;酶学性质研究表明,β-甘露聚糖酶的最适反应pH为7.0,最适的反应温度是40℃,pH稳定性在3.0～7.0,热稳定范围在35～55℃之间;Ca~(2+),Ba~(2+),Mg~(2+),K~+,Co~(2+)对酶都有激活作用,而Ca~(2+)激活作用最强,Cu~(2+),Na~+,Zn~(2+),Mn~(2+),EDTA对酶有抑制作用.[结论]利用双水相萃取法较好纯化了β-甘露聚糖酶,酶学性质良好,可以广泛应用于饲料添加剂、纸浆漂白和食品加工等领域.     

一株产纤维素酶的枯草芽孢杆菌部分生物学特性研究

为了解藏绵羊源产纤维素酶的芽孢杆菌分离株(SWUN 6407)作为微生物添加剂候选菌株的潜力,用PCR扩增16S r DNA序列对其进行鉴定,刚果红染色法测定其产纤维素酶能力,以比浊法测定其对酸和牛胆盐的耐受力,用纸片法测定其对庆大霉素、链霉素、青霉素G、万古霉素、乙酰螺旋霉素、克林霉素、林可霉素、环丙沙星、红霉素、四环素、卡那霉素、磷霉素、替考拉宁、头孢噻肟、利福平、氨苄西林、呋喃妥因、阿莫西林等18种抗菌药物的敏感性.结果显示,SWUN 6407为枯草芽孢杆菌,水解圈与菌落直径的比值为5.8,在p H 2.0环境中存活率为30.5%,在0.7%牛胆盐环境中存活率为64.1%,对18种抗菌药物均敏感.综上可见,SWUN 6407是纤维素酶高产酶菌株,其耐酸、耐胆盐的能力符合微生物添加剂的要求,且不具有耐药性,是一株良好的高产纤维素酶微生物添加剂候选菌株.     

驱油枯草芽孢杆菌产芽孢条件优化

试验研究了采油微生物枯草芽孢杆菌的芽孢形成及萌发过程。结果表明,最适产芽孢培养基为(g/L):氯化钠5,牛肉膏5,酵母膏2,可溶性淀粉20。最适中间调控pH为9.0,最适中间调控温度为45℃。活菌总数达到1.6×10~9CFU/mL,芽孢数达到2.2×10~8CFU/mL,芽孢率为13.8%。对枯草芽孢杆菌进行3 L发酵罐研究,确定了芽孢形成的最佳搅拌转速为140 r/min,同时确定了芽孢在低转速下也可以萌发。     

兔圆小囊组织中抗菌肽类物质的分离纯化及抗菌活性研究

成年健康家兔,经腹腔注射猪大肠杆菌刺激后,取圆小囊组织以捣碎机捣碎,沸水浴处理后,以5％乙酸提取,调整pH值后,经SephadexG100凝胶柱过滤层析,收集各组分并用琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性,获得纯化的抗菌肽类物质。纯化物经Tricine SDS-PAGE,银染后分析为一条蛋白带,分子量约为7000Da左右,经超滤分析,纯化物的分子量大于3000Da。抗菌肽粗提物和纯化物经体外抗菌实验,对大肠杆菌（078）、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均表现出较强的抗菌活性。     

芽孢杆菌(Bacillus subtilis No.16A)苎麻脱胶聚半乳糖醛酸裂解酶的纯化及酶学性质

通过丙酮沉淀,阳离子交换层析,凝胶过滤,从苎麻脱胶菌Bacillus subtilis No.16A发酵液中纯化了聚半乳糖醛酸酶（PGase）.结果表明该酶分子量为30.2?ｋu,最适作用pH为9.0,最适作用温度为50?℃,在55?℃以下、中性pH（6.0～8.0）范围内稳定, Ca2+、Mg2+对该酶有激活作用, Cu2+、Mn2+、Co2+、Hg2+有抑制作用,酶解产物在235 nm处有强吸收峰,说明该酶是聚半乳糖醛酸裂解酶.     

普鲁兰酶的纯化及其性质

采用ＤＥＡＥ—纤维素柱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱色谱对从土壤中筛选得到的普鲁兰杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓａｃｉｄｏｐｕｌｕｌｙｔｉｃｕｓ）菌株所产生的普鲁兰酶（丹麦ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ产品）进行分离纯化。酶活测定的结果表明,该酶的最适催化ｐＨ为４８,最适温度为３８℃,有相当高的热稳定性,米氏常数Ｋｍ为５２ｍｍｏｌ。     

Cloning and Characterization of Gene Promoters from Bacillus pumilus

DNA fragments obtained from Sau3AI partially digested total DNA of Bacillus pumilus UN31-C-42 are first inserted into BamHI site of pSUPV4, a promoter-probe vector. The recombinant DNA molecules are transformed into Escherichia coli cells and eight-three Kanr clones (named pSUBp1-pSUBp83) are obtained. The inserted fragments in pSUBp53, pSUBp57, pSUBp21, which showed high level of kanamycin- resistance, are sequenced and analyzed, respectively. These fragments contain some con-served sequences of prokaryotic gene promoters, such as TATAAT and TIGACA box. The promoter frag-ment Bp53 could efficiently promote the alkaline protease gene of B. pumilus expression not only in E.coli but also in B. subtilis cells.     

一株广谱抗菌活性菌株的鉴定及生物学特性研究

从湛江湖光岩世界地质公园的火山岩石中分离到一株具有广谱抗菌活性的菌株,命名为菌株HGY25,该菌株对多种食品致病菌均有较强的抑制作用。通过形态学观察、生理生化指标测定、16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。对菌株部分生物学特性研究表明:其生长的最适pH值为7.0,最适生长温度为37℃。     

贯叶连翘总提取物对枯草杆菌的抗菌作用

报道了经光照和未经光照处理后贯叶连翘总提取物对枯草杆菌的作用，结果表明：总提取物对枯草杆菌有强烈的抑菌或杀菌作用，并且其抑菌或杀菌作用与其浓度有关，但不需光照。     

枯草芽孢杆菌发酵鱼蛋白制备抗氧化型发酵液工艺的初步研究

利用食用级枯草芽孢杆菌发酵鱼蛋白制备抗氧化型发酵液,以发酵液的DPPH清除率为抗氧化性指标,分别研究了接种量、发酵时间、料液比、葡萄糖添加量、装液量和摇床转速对产物抗氧化性的影响。结果表明:接种量2%、发酵时间24 h、水:鱼肉比例2:1、葡萄糖添加量2%、(50~100)mL/250 mL三角瓶的装液量和摇床转速150 r/min分别是各单因素下的最佳水平。发酵液经蛋白质、肽类和游离氨基酸定性检测均呈阳性,表明是具有抗氧化作用的肽类混合物。