原癌基因c-jun对EDS诱导大鼠睾丸间质细胞凋亡的研究

本研究用c-junASODNs拮抗c-jun,用EDS诱导的大鼠睾丸间质细胞凋亡,通过琼脂糖凝胶电泳、Henchest33342染色荧光显微镜检查方法研究c-jun对EDS诱导的大鼠睾丸间质细胞凋亡的影响.实验结果显示0.5μmol/Lc-junASODNs抑制EDS诱导的离体间质细胞凋亡(P<0.01).提示c-jun有促进大鼠睾丸间质细胞凋亡的作用.     

齐墩果酸对衰老大鼠睾丸间质细胞胰岛素/IGF1通路关键基因表达的影响

为了探讨齐墩果酸对衰老大鼠睾丸间质细胞的作用,采用MTT法确定齐墩果酸最适药物浓度,氧化应激创建大鼠睾丸间质细胞衰老模型,RT-qPCR、免疫荧光和免疫印迹检测胰岛素/胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1, IGF1)信号通路关键基因转录情况和蛋白翻译情况,采用INSR抑制剂处理细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果显示:与正常组相比,INSR、IRS1、IRS2、IGF1的mRNA转录水平和蛋白翻译水平显著下降(P<0.05);IGFBP3的mRNA转录水平显著提高(P<0.05),免疫荧光和免疫印迹均未检测到此基因表达;与衰老组相比,齐墩果酸组明显逆转此现象(P<0.05);齐墩果酸能明显抑制衰老组细胞的凋亡(P<0.05),INSR抑制剂处理后,细胞凋亡率明显高于齐墩果酸组(P<0.05).综上可知,齐墩果酸通过调控胰岛素/IGF1信号通路关键基因的转录和翻译延缓Leydig细胞衰老.     

补充海参小分子肽对运动小鼠血睾酮及睾丸组织氧化应激的影响

目的：探讨海参小分子肽对运动小鼠血清睾酮含量以及睾丸组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的影响。方法：30只KM雄性小鼠随机分为安静对照组（C）、有氧运动组（T1）、补充海参小分子肽有氧运动组（T2）、无氧运动组（T3）和补充海参小分子肽无氧运动组（T4）,其中T1、T2、T3、T4组分别进行不同方式的跑台训练,持续6周后,观察各组小鼠血清睾酮和睾丸组织MDA、SOD含量。结果：运动组小鼠血睾酮、SOD、MDA含量都有变化,但T3、T4组较T1、T2组变化显著,T1、T3组较T2、T4组变化显著。结论：补充海参小分子肽可以改善运动训练尤其是有氧运动训练导致的小鼠血清睾酮水平下降。     

乙醇对雄性大鼠睾丸、附睾、血清睾酮和血浆cAMP水平的影响

利用含15％和35％乙醇的水溶液作为雄性大鼠的饮用水,观察了乙醇对雄性性器官及血清睾酮和血浆c AMP水平的影响。结果表明,乙醇对附睾重及血清睾酮水平均具有较强的抑制作用,对血清睾酮水平的抑制作用存在剂量依赖关系。同时,血浆cAMP水平也受到抑制,但不存在剂量依赖关系。实验结果提示,乙醇可能是通过降低血清睾酮水平而实现对附睾的抑制作用,而乙醇通过抑制cAMP可能是导致血清睾酮水平下降的机理之一。     

睾酮对老年雄性糖尿病大鼠糖代谢的影响

目的探讨生理剂量的睾酮能否改善老年雄性糖尿病大鼠的糖代谢。方法用6~7月龄雄性SD大鼠给小剂量的四氧嘧啶,72 h后筛选空腹血糖高和2 h糖耐量异常的动物随机分为对照组和给药组,给药组每周两次给丙酸睾酮2 mg/kg,35 d后测空腹血糖、血脂和糖耐量。结果给药组空腹血糖显著低于对照组;糖耐量试验在30、60和120 min血糖均比对照低;给药组甘油三脂比对照组明显降低,总胆固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白两组没有区别。结论睾酮能降低老年雄性糖尿病大鼠的空腹血糖和改善糖耐量。     

二苯乙烯苷调控胰岛素/IGF-1信号通路延缓大鼠睾丸间质细胞衰老的作用机制

采用自由基损伤的方法建立大鼠睾丸间质细胞衰老模型,用流式细胞术检测各组细胞周期的变化;应用RT-qPCR、免疫荧光和Western blot技术检测睾丸间质细胞胰岛素/IGF-1信号传导通路关键基因的表达水平.结果 显示:与正常组相比,衰老组β-半乳糖苷酶阳性细胞率可达60％以上(P＜0.05),G1期所占比重明显增加...     

睾酮对大鼠再生肝细胞转录活性的影响

以血清睾酮(testosterone,T)和核仁组织区相关嗜银蛋白(argyrophil nucleolar organiting regions,AgNORs)为指标,探讨去睾丸大鼠部分肝切除(partial hepatectomy,PH)后,外源注射睾酮对其血清睾酮水平及再生肝细胞DNA转录活性的影响.结果显示:外源睾酮可使大鼠血清睾酮水平显著升高,呈明显剂量-时间效应.除低剂量睾酮(0.5mg/kg体重)处理外,其它各组再生肝细胞AgNORs颗粒数在PH后24h均明显下降,PH后24～72h又持续升高.PH后各时期,低剂量睾酮使AgNORs数目显著高于芝麻油组;而中、高剂量睾酮(2.5mg/kg和5mg/kg体重)使AgNORs数目减少,并呈现明显剂量-效应关系.结果表明:低剂量睾酮对肝细胞的转录活性起促进作用;中、高剂量则起抑制作用,且随着睾酮浓度升高,抑制作用增强.     

猕猴桃籽油对大鼠睾丸的抗衰老影响

通过观察猕猴桃籽油对D－半乳糖造模衰老大鼠睾丸超微结构的影响,探讨猕猴桃籽油延缓性腺功能减退的作用机理.将18只SD大鼠随机分为3组,正常组每鼠灌服生理盐水和背部皮下注150 mg.kg^-1.d^-1生理盐水,模型组每鼠灌服生理盐水和背部皮下注射150　mg.kg^-1.d^-1　25%　D-半乳糖溶液,猕猴桃籽油干预组每鼠灌服猕猴桃籽油0.670　g.kg^-1.d^-1和背部皮下注射150　mg.kg^-1.d^-1 25%　D-半乳糖溶液.每组实验时间均为8周,8周后透射电镜下观察各组大鼠睾丸超微结构的变化.结果显示,与模型组比较,猕猴桃籽油可以显著改善间质细胞、支持细胞、精原细胞的退行性改变.说明猕猴桃籽油可改善衰老大鼠睾丸间质细胞、支持细胞、精原细胞的退行性改变,具有一定延缓性腺衰老的功能.     

继发性输尿管梗阻对大鼠活体输尿管蠕动规律及ICC样间质细胞的影响

目的探讨继发性输尿管梗阻后活体大鼠输尿管蠕动及肾盂输尿管交界处ICC样间质细胞形态和密度的变化规律,并分析两者的相关性。方法清洁级SD大鼠35只,随机分为7组,每组5只。大鼠被分为3个大组,5只作为正常对照组（C）,5只作为假手术组（S）,其余作为实验组（S1～S5）：梗阻3 d组S1、梗阻1周组S2、梗阻2周组S3、梗阻4周组S4、梗阻8周组S5。实验组动物建立左侧输尿管完全梗阻模型。外接压力感受器法测定各组大鼠输尿管蠕动活性,分析其变化规律。取实验侧肾盂输尿管交界处上下各0.2 cm输尿管,采用免疫组织化学显色,光镜下计数ICC样细胞密度并观察形态。结果所有实验组大鼠左肾盂及输尿管均见明显扩张积水,动物模型建立成功。各组输尿管蠕动频率分别为：C（19.6±4.037）次/min,S（18.8±2.168）次/min,S1（4.6±1.140）次/min,S2（8.0±2.345）次/min,S3（5.4±1.673）次/min,S4（5.4±1.517）次/min,S5（6.2±1.789）次/min,但输尿管蠕动频率在正常对照组（C）和假手术组（S）间没有显著性差异（P=0.706）。各实验组输尿管蠕动频率较正常对照组（C）和假手术组（S）有所下降,但呈现出先下降后上升再下降的趋势,这种差异除了在S1和S2组之间有统计学差异外,在其他各个实验组之间没有统计学差异。各组ICC样间质细胞的密度分别为：C（7.20±2.29）个/视野,S（7.02±2.68）个/视野,S1（3.54±1.85）个/视野,S2（6.30±1.19）个/视野,S3（4.30±0.67）个/视野,S4（4.42±1.45）个/视野,S5（4.70±1.09）个/视野。除了S2组以外的各实验组ICC样间质细胞的密度较正常对照组（C）和假手术组（S）有所下降,但呈现出先下降后上升再下降的趋势,这种差异在各个实验组之间没有显著的统计学差异。大鼠输尿管蠕动频率变化趋势与ICC样间质细胞的变化趋势有很好的相关性。结论大鼠肾盂输尿管交界处ICC样间质细胞的密度变化与输尿管蠕动活性关系密切,为将来研究ICC样间质细胞在泌尿系统中的作用奠定了一定的基础。     

模拟失重对大鼠睾丸组织结构及AR和HSP70表达的影响

采用-30°尾部悬帛模拟失重生理效应,32只Wistar雄性大鼠随机分为7 d对照组、14 d对照组、悬吊7 d组和悬吊14 d组4组,运用HE染色和免疫组织化学染色方法,分别观察模拟失重7 d、14 d大鼠睾丸组织的组织病理学变化,同时定置对比观察了对照组、模拟失重组大鼠睾丸组织中AR和HSP70的表达和定位.结果显示,悬吊7 d和14 d的大鼠睾丸组织均出现了明显的组织病理学变化,表现为睾丸曲细精管内生精上皮细胞排列紊乱,出现不同程度的变性、坏死:悬吊14 d的大鼠睾丸的病变比悬吊7 d的更为明显.免疫组化染色结果表明,模拟失重7 d、14 d的大鼠睾丸组织中,AR表达量均极显著降低(P<0.01);而HSP70表达置均极显著升高(P<0.01).在组织间隙和间质渗出物中出现大量eHSP70.研究表明,模拟失重状态对雄性大鼠生殖器官睾丸的组织结构会造成严重的病理损伤,导致睾丸生精上皮不可逆损伤,使睾丸组织分泌表达AR的功能减退,引起HSP70的过量表达和大量释放形成eHSP70,以至造成睾丸实质的严重损伤.     

染氟对成纤维细胞和成骨细胞C—los和C—jun基因表达的影响

目的：探讨不同染氟剂量在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞c—fos和c—jun基因表达的影响．方法：应用RT—PCR和琼脂糖凝胶电泳方法检测和比较染氟对成纤维细胞和成骨细胞c—los和c—jun基因表达的影响．结果：染氟可促进成纤维细胞c—los基因表达,在过量氟的刺激下,成纤维细胞和成骨细胞c-地基因表达均有增强．染氟对成纤维细胞c—jun基因表达增强作用不明显．结论：染氟成纤维细胞已有成骨表型表现,在氟刺激成纤维细胞向成骨细胞转化过程中,c—los也发挥重要作用．     

茶叶糖蛋白对RAW264.7细胞分泌作用的影响

本文研究利用小鼠巨噬细胞建立体外实验模型,对茶叶糖蛋白(TGP)的免疫活性进行研究。采用倒置显微镜观察细胞形态变化。Griess法和ELISA法检测不同剂量茶叶糖蛋白对RAW264.7细胞一氧化氮(NO)和细胞因子TNF-α、IL-1β分泌量的影响。结果表明:50μg/mL茶叶糖蛋白可显著促进细胞分泌一氧化氮和细胞因子TNF-α、IL-1β(p<0.01),说明茶叶糖蛋白可通过促进细胞分泌一氧化氮和细胞因子,起到活化RAW264.7细胞和调节机体免疫的功效。     

蜂毒肽Melittin对小鼠红细胞溶血效应及影响机制分析

蜂毒肽Melittin是一种具有高效抗细菌、真菌、肿瘤细胞等多种生物学活性的抗菌肽,然而其溶血活性限制了其发展为高效抗菌抗癌药物的应用.本文深入分析了Melittin对小鼠红细胞的作用机制,探讨影响Melittin溶血活性的细胞机制.结果表明,Melittin可以引起红细胞膜上形成空洞,抑制细胞内ATPase的活性.红细胞膜中糖蛋白或糖脂糖链中的唾液酸参与Melittin的相互作用,介导Melittin的溶血活性.质膜胆固醇也影响Melittin与红细胞膜相互作用,降低溶血活性.研究还发现,外源添加D-葡萄糖和D-蔗糖能显著抑制Melittin的溶血活性.研究结果为降低抗菌肽溶血性以及推动抗菌肽的药物应用提供了重要理论基础.     

DBP介导Cx43对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响

目的观察邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对成年大鼠睾丸Leydig细胞连接蛋白43(Cx43)及其引起睾酮分泌变化的影响,探讨DBP对睾酮(T)的调节是否与Cx43有关.方法将原代培养纯化的leydig细胞分为3组:50μg/mL DBP处理组,50μg/mL DBP+10μmol/L前列腺素E2(PGE2)组及DMSO处理组,分别同时处理细胞24h;采用细胞免疫荧光法检测细胞膜Cx43表达变化,Western印记法观察Cx43总蛋白量的变化,应用睾酮试剂盒测定睾酮值.结果与对照组相比,DBP处理24h后,Cx43表达与睾酮值均降低,差异具有统计学意义(P0.05);但加入Cx43增强剂(PGE2)组与DBP组相比,CX43表达明显恢复,但T值变化不明显(P0.05).结论DBP对睾酮及Cx43均有影响,但对Leydig细胞睾酮合成抑制作用并不一定是通过调节Cx43的表达来实现.     

嗜铬细胞分泌的模型研究

在大鼠肾上腺嗜铬细胞上应用全细胞膜片钳和膜电容检测技术，对细胞分泌的模型进行了研究．对Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ等提出的准备释放库Ｂ，进行了更为精确深入的分析，提出了新的论据和修改内容．证实在距细胞膜 Ｃａ２＋通道３０ｎｍ处存在立即释放库，在距Ｃａ２＋通道３００ｎｍ处存在可释放库．通过内分泌细胞分泌模型分析了Ｃａ２＋的控制作用以及囊泡释放过程的时序特征．     

神经元素3蛋白(Ngn3)诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素表达细胞分化的初步研究

胰腺发育相关基因神经元素3（neurogenin3,Ngn3）,属于碱性螺旋-环-螺旋（basichelix-loop-helix,bHLH）家族的转录因子,对胰腺内分泌细胞的发育及分化至关重要,且被认为是胰腺祖细胞的标志蛋白质．之前的研究发现,全长Ngn3蛋白具有蛋白质转导功能,可以高效进入多种真核细胞系．近年来多项研究显示,骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的多能干细胞．利用蛋白质转导技术,将体外表达纯化的胰腺发育重要因子Ngn3蛋白导人体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞中,诱导其向胰岛素表达细胞分化．结果显示,经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞出现细胞聚集生长现象,并有形状类似胰岛的细胞团出现．RT-PCR结果显示经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞可以有效表达胰岛素,并且一些β细胞相关基因如胰十二指肠同源盒基因-1（pancreatic-duodenal homeoboxl,Pdx-1）,神经分化因子（neurogenic differentiation,NeuroD）,同源结构域基因4（pairedboxgene4,Pax4）,葡萄糖转运体-2（gluoase transporter2,Glut-2）都有表达．细胞免疫荧光也可检测到胰岛素的表达．通过Ngn3蛋白质诱导分化大鼠骨髓间充质干细胞的初步研究,探索了应用骨髓间充质干细胞体外诱导分化获得胰岛素表达细胞的可行性,为糖尿病治疗提供一定的实验依据．     

2-APB对自发性高血压大鼠脑微动脉平滑肌细胞缝隙连接的影响

为探讨正常血压Wistar大鼠(Wistar rat,WR)和自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive rat,SHR)脑微动脉段平滑肌细胞电生理学及偶联力的异同,并观察2-氨基乙基二苯硼酸酯(2-Aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)对脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接的影响。应用全细胞膜片钳技术方法,观察2-APB对WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞膜电容(Cinput)、膜电导(Ginput)和膜电阻(Rinput)的影响。结果显示,(1)SHR收缩压明显高于正常WR,差异有统计学意义(P0.01)。(2)SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput高于WR,差异有统计学意义(P0.05)。(3)2-APB可以浓度依赖性的降低脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput和Ginput(或者增加Rinput)。(4)2-APB抑制WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞Ginput的IC50分别为0.21μmol/L和0.83μmol/L,差异有统计学意义(P0.05)。(5)2-APB浓度≥100μmol/L时,WR和SHR脑微动脉段上平滑肌细胞的Cinput、Ginput或Rinput与单个平滑肌细胞十分接近。由此可知,SHR较WR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接耦联力增强,2-APB可以浓度依赖地抑制WR和SHR脑微动脉平滑肌细胞间缝隙连接,且对SHR的抑制效力较强。