玉米胚胎发育初期蛋白质凝胶电泳技术

蛋白质凝胶电泳目前常用的方法有两种,一是聚丙烯酰胺凝胶电泳,二是十二烷基磺酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳。使用的电泳槽有圆盘和平板电泳二类。我们使用的是垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳。此种生化技术,在蛋白质的分析鉴定中,灵敏度高,分辨清晰,应用十分普遍。由于在实践操作中,要求严谨,因此在操作过程中,常因各种因素干扰,以致影响效果,事先如何加以预防,目前虽有些报道,但未见有关胚胎电泳     

利用两种电泳技术分析大麦品种的醇溶蛋白差异及亲缘关系

利用大麦醇溶蛋白电泳鉴定方法了解大麦各品种间的亲缘关系,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对国内18份大麦品种的醇溶蛋白电泳图谱进行了分析。结果表明:从18个供试大麦品种中分别分离出13条和18条迁移率不同的多态性醇溶蛋白谱带。利用各品种在迁移率Rf值不同的谱带存在的明显差异,可将供试18个大麦品种区分开。对醇溶蛋白电泳结果进行聚类分析,结果显示:18份大麦材料在遗传距离(GD)0.49处聚为4个大类,这表明醇溶蛋白电泳技术对大麦品种鉴定和亲缘关系的评价是一种有效的方法。     

黑豆中抗真菌蛋白的纯化及活性鉴定

利用硫酸铵分级沉降、亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从黑豆种子中分离出一种抗菌蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳标准蛋白迁移率与分子量对数的关系,计算出该抗菌蛋白的分子量为93.3 kDa,还原和非还原状态下均显示单一区带,说明该抗真菌蛋白为单倍体蛋白.抑菌试验结果表明,此纯化的蛋白对植物致病菌瓜果腐霉病菌、棉花枯萎病菌、苹果轮纹病菌、葡萄灰霉病菌和菜豆根腐病菌等5种真菌的生长具有不同的抑制作用.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的“集成化”研究

聚丙烯酰胺凝胶电泳是生物类相关专业学生必须掌握的一项实验技术。该项实验技术可以分析蛋白质及各种同工酶。教学实验中往往只能涉及蛋白质电泳或者是某一种同工酶的分析。为使学生能全面地掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,本实验教学示范中心开展了聚丙烯酰胺凝胶电泳实验的"集成化"研究与实践,并取得了满意的效果。     

黄精属植物种间蛋白质和蛋白水解酶的分析比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术和复性电泳(G-PAGE)技术对五种黄精属植物茎和叶的蛋白谱带和蛋白水解酶谱进行了分析。结果表明:(1)茎和叶的蛋白质和蛋白水解酶种类有很大差异;(2)它们的茎中均含有66.2、54.6、38.5、28、18.6kD蛋白质和肠、55kD的蛋白水解酶;(3)蛋白质和蛋白水解酶可作为黄精属植物的分类依据之一。     

人类绒毛膜促性腺激素（HCG）的高分辨双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

采用高分辨的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D—PAGE)对人类绒毛膜促性腺激素(~bCG)进行分析。第一向等电点聚焦电泳(IEF)后,在第二向SDS—聚丙烯酰胺梯度凝胶垂直板上电泳(SDS)—PAGE),电泳结束,用银染色法染色,电泳图谱上得到三条主要的蛋白区带,即A,B和C带,并测定了它们的pH值和分子量,A带分子量是36K为未裂解的~hCG,B带分子量是23K为~hCG的β—基亚,C带分子量是17K为~hCG的α—亚基,通过双向电泳的分析和鉴定,为~hCG的分子结构在双向电泳中的特性提供了初步参考数据。     

中华锯齿米虾卵黄蛋白的纯化鉴定

为了研究中华锯齿米虾卵黄蛋白的性质,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用不同的染色方法对其进行分析鉴定,并采用电泳洗脱法从中华锯齿米虾成熟卵巢中将其分离纯化.研究结果表明,中华锯齿米虾成熟卵巢中的卵黄蛋白为糖脂复合蛋白,该蛋白分子质量为434 ku.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析该卵黄蛋白由3个主要亚基组成,分子质量分...     

绿豆几丁质酶的纯化和酶学性质分析

利用亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从绿豆种子中分离纯化出几丁质酶.纯化的蛋白通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯,分子质量为30.8kDa.还原和非还原状态下的几丁质酶蛋白均显示单一区带,说明该几丁质酶为单倍体蛋白.通过等点聚焦法测得pI为6.3.该酶的最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

甘蓝(Brassica oleracea L.)叶片蛋白提取方法的比较

分别用直接提取法、丙酮沉淀法和丙酮三氯乙酸结合沉淀法提取甘蓝叶片蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果表明,丙酮沉淀法较适合甘蓝叶片蛋白质的提取.本文对影响SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的关键步骤进行了探讨,对凝胶的不同染色方法进行了比较,确立了一套适用于甘蓝叶片蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色以及脱色的方法.采用改良后的丙酮沉淀法提取的甘蓝叶片蛋白SDS-PAGE电泳结果显示,其条带清晰,数量多,分辨率高.     

成熟中国对虾(Penaeus chinensis)卵巢中卵黄蛋白的纯化

用层析(SephadexG-150, DEAE-Cellulose-52)和电泳洗脱2种方法分别从成熟中国对虾卵巢中纯化得到了一种卵黄蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测表明,卵黄蛋白出现在SephadexG-150的第1个洗脱峰和DEAE-Cellulose-52的0.4 mol/L和0.5 mol/L NaCl洗脱峰处.比较了这2种方法的优缺点:层析法可用于蛋白的大量制备,电泳洗脱能够得到高纯度的蛋白.并对与其结合的类胡萝卜素的稳定性进行了讨论.     

5种黄精属植物的蛋白指纺分析

本用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析了５种黄精属植物根状茎和叶的蛋白指纹。     

用种子醇溶蛋白电泳技术鉴定外源DNA导入春小麦变异后代

采用醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对外源DNA导入技术选育的春小麦变异株系的单株及其受体种子的分析结果:小麦各变异后代电泳谱带在15～19条之间变动,受体谱带为16条.多数谱带与受体相似,也出现了受体所没有的新谱带.各后代的谱带着色深度、谱带宽度均存在显著差异,其差异的出现与外源DNA导入有关.同时说明,种子醇溶蛋白电泳技术可用于外源遗传物质导入小麦变异后代的鉴定.     

用种子醇溶蛋白电泳技术鉴定外源DNA导入春小麦变异 …

采用醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对外源ＤＮＡ导入技术选育的春小麦变异株系的单株及其受体种子的分析结果：小麦各变异后代电泳谱带在１５￣１９条之间变动,受体谱带为１６条。多数谱带与受体相似,也出现了受体所没有的新谱带。各后代的谱带着色深度,谱带宽度均存在显著差异,其差异的出现与外源ＤＮＡ导入有关。同时说明,种子醇溶蛋白电泳技术可用于外源遗传物质导入小麦变异后代的鉴定。     

小鼠腹水癌细胞脂酶的亲和制备及一些性质的研究

在接种了血癌(L—7712)及腹水癌(Hep.A)的小鼠腹水癌细胞中存在远高于正常细胞的脂酶(Lipase)活力.本文通过免疫亲和层析方法从小鼠腹水癌细胞中纯化了该脂酶,比活力达到2000国际单位/mg.蛋白.经 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯度达电泳纯,为单亚基酶.分子量65kd.经等电聚焦电冰分析,等电点(PI)为5.3.     

大鼠十七种组织器官的蛋白图谱和它们的蛋白水解酶活性分析

用聚丙烯酰胺凝胶电泳和酶的原位复性电泳方法分析了大鼠脑、心脏、肺、舌、胃、小肠、大肠、肝脏、胰脏、肾脏、睾丸、附睾、输精管、阴茎、卵巢、子宫、肌肉等组织器官的蛋白质图谱和蛋白水解酶活性。     

利用两种电泳技术分析番茄品种醇溶蛋白及其亲缘关系

本文利用番茄种子醇溶蛋白电泳图谱鉴定番茄各个品种之间的亲缘关系,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对枣庄市售10种番茄品种的醇溶蛋白电泳图谱的分析.结果表明：不同物种间的醇溶蛋白谱带存在一定差异且这种差异反映一定的关系.10种番茄醇溶蛋白分离谱带8条,大部分具有5条相同谱带,少部分谱带数量较少,最少谱带4条,经过遗传相似性与遗传多样性分析番茄的亲缘关系,经过遗传多样性聚类分析,将10种番茄在一定水平上,聚为5类.为枣庄番茄品种的亲缘关系分析以及遗传育种工作提供了依据.     

猪胸腺活性肽A_1和A_2的纯化和性质

本文报道了从猪胸腺免疫调节剂中,利用垂直板型制备聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分离纯化二种猪胸腺活性肽(PTPA_1和PTPA_2)的方法。二种肽在酸性和碱性聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳中呈单一区带;在聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦中几乎呈单一区带。PTPA_1的等电点约为4.7;PTPA_2的等电点约为4.6。二种肽皆以酸性和中性氨基酸为主PTPA_1,不含色氨酸、酪氨酸和脯氦酸。依Sephadex G—50测定分子量的结果,估计PTPA_1的分子量约为7,200;PTPA_2的分子量约为8,700。二种肽均能非常显著地升高仔猪胸腺淋巴细胞玫瑰花结百分率(P<0.01)。     

牦牛乳经凝乳酶作用后的蛋白组分变化

为研究牦牛乳经凝乳酶凝乳后的乳蛋白组分变化,在牦牛乳中加入凝乳酶进行凝乳,采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和碱性尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,对凝乳酪蛋白和乳清蛋白的组成进行了分析.结果显示,牦牛乳凝乳后酪蛋白发生了显著水解,水解产物存在于凝乳酪蛋白中,同时乳清中新增加了一些低分子量的可溶性蛋白.这些变化可能涉及部分α-酪蛋白的水解.     

蛋白质印迹技术在生物医学中的应用方法

蛋白质印迹（Westem blot）技术是通过聚丙烯酰胺电泳根据分子量大小分离蛋白后转移到杂交膜上，然后通过一抗／二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。蛋白质印迹技术进行蛋白质分析最流行和作成熟的技术之一，超过60％的生命科学工作者使用该方法。     

中国鲎血蓝蛋白研究

应用超离心和柱层析结合聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）及电镜技术，研究中国鲎血蓝蛋白的结构特点．结果表明，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００纯化的血蓝蛋白在ＰＡＧＥ电泳中出现４条带．纯化的血蓝蛋白再经ＤＥＡＥ－３２纤维素柱层析得到５个洗脱峰，每个峰在ＰＡＧＥ电泳下可分辨出４条带．在电镜下，血蓝蛋白分子出现环形、五角形、十字形和蝴蝶结形等构型并与其他解离的中间的构型同时存在．