黑木相思基因组DNA的快速提取

用SDS高盐介质法和1.5×CTAB法提取黑木相思幼叶及叶状柄基因组DNA,将其与2×CTAB法、3×CTAB法、改进的CTAB法进行比较,并用紫外光谱吸收、凝胶电泳、限制性内切酶消化、RAPD(Radomly Amplified Polymorphic DNA)和ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat)等方法进行鉴定.结果表明,叶状柄多糖的质量分数较幼叶少,更易于基因组DNA的提取;SDS高盐介质法与1.5×CTAB法提取叶状柄的基因组DNA得率为180.0～697.5 μg·g-1,分子质量为48 kb,D(260)/D(280)=1.750～1.955,无需经Rnase 处理,可直接用于限制性酶切和RAPD及ISSR分析;1.5×CTAB法所提的基因组DNA的纯度优于SDS高盐介质法.综合考虑认为,1.5×CTAB法可作为黑木相思基因组DNA快速提取的简便方法.     

黑木相思双低频酶cDNA-AFLP反应体系的建立

以黑木相思组培苗为实验材料,对影响cDNA-AFLP反应体系的关键因素进行了研究,建立了适用于黑木相思的cDNA-AFLP分析体系.结果表明:适用于黑木相思dscDNA的限制性酶切组合为EcoR Ⅰ和PstⅠ,dscDNA酶切用量为500 ng.用作预扩增模板的连接产物稀释倍数为1倍,用作选择性扩增模板的预扩增产物稀释倍数为50倍.     

白刺总RNA提取方法的研究

以不同西伯利亚白刺组织为材料 ,利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法、苯酚法和CTAB法提取白刺总RNA ,通过RNA的产率、纯度、电泳图谱等分析来确立适用于白刺总RNA分离的方法 研究结果表明 ,CTAB法提取的RNA具有 2 8SrRNA、 18SrRNA和 5SrRNA三条较清晰的条带 ,很少有降解 ,其A2 6 0 /A2 80为 1.893～ 1.90 1,A2 6 0 /A2 30为 1.80 7～ 2 .4 87 具有较高的纯度 其他三种方法获得的RNA纯度较低 ,降解严重 ,有较多小分子和盐存在 ,RNA无明显条带出现 ,而是以小分子RNA弥撒状分布 将CTAB法提取的RNA逆转录成cDNA ,使用随机引物进行PCR扩增 ,PCR条带清晰 ,分布均匀 ,背景小 该结果进一步证明了CTAB法提取的RNA具有很高的质量与纯度 ,可以满足下一步的研究     

库尔勒香梨总RNA的快速提取方法

以库尔勒香梨花、芽、茎尖、叶片和皮层为材料，对总RNA提取方法进行了改进，从而筛选出适合库尔勒香梨总RNA的提取方法。采用该方法可以在3-4h内得到纯度高、含量高、完整性好的梨总RNA，并获得了逆转录活性较强的病毒RNA，同时使提取成本降低。此方法对苹果、葡萄、桃等果树总RNA的提取均适用。     

小麦总RNA的提取

以小麦苗为材料,通过一些生物化学与分子生物学操作获得总RNA。其条带整齐、清晰,OD260／OD280在1．93～2．06之间,RT-PCR检测PCR产物在500bp处。这些结果表明提取的总RNA质量很好,纯度很高,完整性很好,且适用于cDNA文库的构建、Northern印迹及mRNA差异显示等下一步工作。     

总RNA提取方法的比较与分析

用TRIZOL法、CTAB法和改良的热硼酸盐法从水稻叶片中提取总RNA,结果表明用这三种方法提取总RNA的OD260nm／OD280nm值分别为1．896、1．992和1．657。琼脂糖电泳表明,用改良的热硼酸盐法提取的RNA降解严重,用TRIZOL法提取的总RNA有部分降解,而CTAB法提取的总RNA完整、未降解,可用于后续实验。因此CTAB法更适于从水稻叶片中提取总RNA。     

一种水稻总RNA提取的简易方法

应用高效Trizol试剂,对水稻根、叶、花材料进行了总RNA的提取.采用摸索后的优化程序,可在不用液氮的室温下,1 h完成总RNA的提取.电泳结果可见清晰的条带,表明RNA的完整性较好;紫外测定结果表明了RNA的纯度较高,所得检测结果说明所得总RNA产品可作进一步的实验之用.     

水稻颖果总RNA提取方法的研究

利用TRIZOL试剂快速提取法、异硫氰酸胍法和改良的SDS法提取不同发育时期水稻颖果的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取获得的RNA样品的品质.研究结果表明,改良的SDS法提取的RNA具有28SrRNA和18S rRNA 2条清晰的条带,且无降解.其D260/D280为1.84～1.97,具有较高的纯度.其他2种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象.将改良的SDS法提取的RNA逆转录成cDNA,作为PCR扩增的模板,可获得清晰的约1.7kb的目的条带.该法提取的RNA用于Northern杂交,可产生特异的杂交信号.这些结果进一步证明了改良的SDS法提取的RNA具有很高的品质与纯度,可以满足下一步分子生物学研究的需要.     

山药总RNA不同提取方法的比较研究

为提取高质量的山药总RNA,以铁棍山药茎段为材料,采用Trizol法、RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法、改良CTAB法和试剂盒法提取总RNA,利用琼脂糖凝胶电泳分析所提取RNA的完整性,并用超微量分光光度计分析RNA的纯度.结果显示采用Trizol法难以提RNA,RNAiso for Polysacchariderich Plant Tissue法提取效果不理想,存在DNA和蛋白质污染,而用改良CTAB法和试剂盒法提取到的总RNA纯度高、完整性好,其中,改良CTAB法较试剂盒法价格便宜,但提取过程较烦琐.因此,应根据实验需要选择CTAB法或试剂盒法提取铁棍山药总RNA.本结果对其他品种山药或富含多糖多酚类物质植物的RNA的提取也具有一定借鉴意义.     

萝卜叶片总RNA提取方法比较

获得高质量的RNA是进行RNA相关分子生物学实验和研究的前提.尽管目前已建立了多种真核生物总RNA的提取方法,但这些方法是否适用于提取萝卜(Raphanus sativus L.Var.radiculus Pers.)的总RNA还不清楚.本研究分别采用Trizol法、改进的异硫氰酸胍法和改进的SDS--酸酚法提取萝卜叶片总RNA,并通过分析所得RNA的电泳图谱、得率和纯度来判断这三种方法的优劣, 确定了提取满身红萝卜总RNA的最适方法.实验结果表明,Trizol法和改进SDS酸酚法提取的总RNA中蛋白质和DNA污染比较严重,不能用于下一步实验;而改进的异硫氰酸胍法提取的总RNA得率高、纯度高、完整性好、少降解,完全适合用于Northern blotting,小RNA分离、cDNA文库的构建等分子生物学实验.     

均匀设计优化黑木相思ISSR-PCR体系

采用均匀设计,对影响黑木相思ISSR-PCR体系的引物、Mg2 、dNTP、Taq DNA聚合酶和模板DNA浓度等进行5因素5水平和5因素3水平两轮优化,建立了适合于黑木相思ISSR-PCR的体系:在20μL反应体系中,含引物0.30μmol.L-1,Mg2 3.00 mmol.L-1,dNTP 0.15 mmol.L-1,Taq DNA聚合酶0.75U,模板DNA 2.00 ng.μL-1.在此基础上对扩增程序中的循环次数、退火温度、退火时间进行筛选,获得的扩增程序为:94℃预变性5 min;接着进行33个循环:94℃变性35 s,52~61.5℃退火52 s,72℃延伸90 s;循环结束后,72℃延伸10 min.同时筛选得到10个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物.     

从动物组织中提取总RNA的CTAB法

在生物及生物技术的研究和应用中,RNA的提取已经成为重要的基本实验技术。本研究对CTAB法提取RNA的过程中影响因素进行分析,尝试采用改良的CTAB方法从动物组织中提取总RNA。通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测分析可知,采用该方法提取的总RNA纯度高,完整性好,电泳条带完整清晰,可以进行下一步的分子生物学研究。结果表明,用改良的CTAB法提取动物组织RNA是切实可行的,它具有简便、实用性强的特点,是一个符合分子生物学实验教学要求的新方法。     

一种简易的植物核酸提取方法─—从干叶和新鲜叶中快速提取RNA和DNA

本文介绍了一种植物核酸提取的简易方法．该法只需在常温下按常规的分子生物学操作条件从已干燥的和新鲜的植物叶中快速提取总ＲＮＡ和ＤＮＡ．所获得的ＲＮＡ和ＤＮＡ能顺利用于下一步的ＰＣＲ、测序及小分子ＲＮＡ研究等分子生物学实验．     

一种从富含次生物质的植物中提取RNA的方法

该实验以草莓为材料,建立了一种适合于提取富含多酚、多糖等次生物质的植物RNA的方法,此方法在酸性条件下用苯酚／氯仿／异戊醇进行抽提去除DNA,并用乙二醇丁醚来除去植物组织提取液中的多糖、多酚等次生物质,得到了质量很好的RNA样品。     

兰州大尾羊脂肪组织总RNA提取方法的试验研究

在Trizol法的基础上通过优化操作规程、改进操作步骤等手段提取纯化了兰州大尾羊脂肪组织总RNA,并利用紫外分光光度计和凝胶电泳对其浓度和质量检测进行分析.结果表明:该方法可快速高效地获得适用于RT-PCR、基因表达的高通量分析、cDNA文库的构建等研究的高质量的总RNA.     

一种改进的珙桐(Davidia involucrata)干种子总RNA的提取方法

使用基于去污剂或盐酸胍等常规提取缓冲液 ,从含有大量脂肪、蛋白质和多酚类等次生代谢物的珙桐(ＤａｖｉｄｉａｉｎｖｏｌｕｃｒａｔａＢａｉｌｌ.)干种子中制备足够量的总ＲＮＡ极为困难 .著名的观赏植物珙桐特产于中国西南部 .其组织含大量多酚类物质 ,这些多酚类物质的污染 ,使得从其各种组织中提取核酸尤为困难 .一旦珙桐的组织破裂后 ,胞质内的这些污染物就直接与核酸接触 .许多植物组织中含有多酚类物质 ,它们是极强的氧化剂 .它们的存在会极大地降低所提取核酸的得率和纯度[1] .氧化后的多酚类物质会与蛋白质和核酸发生共价结合 .这…